本发明属于植物提取
技术领域：
，具体涉及从槐角中提取槐角苷的工艺及其在抗炎症中的用途。
背景技术：
：槐角为豆科植物槐sophorajaponical.的果实，是药典收载的常用中药材，药用槐角通常应采用冬季采收的成熟荚果。冬至以后采摘的干燥槐角荚果，其呈圆柱形，有时弯曲，种子间缢缩成连珠状，包皮后，呈棕色或者黄褐色，其种子呈棕黑色；中医理论认为，槐角性寒、味苦，归肝、大肠经，有清热泻火、凉血止血的功能，适用于肠热便血，痔肿出血，肝热头痛，眩晕目赤。关于槐角的化学研究现有技术中已经有报道，科研人员已经从槐角中分离得到数种黄酮类、生物碱类、三萜类、氨基酸和糖类等成分，其中黄酮类成分含量较高，且高于其他植物中的黄酮类化合物的含量。在槐角中，目前已经确定的总黄酮类化合物包括20种以上，总黄酮类物质主要有槲皮素、山柰酚、异鼠李素、染料木素苷类异黄酮，好包括大量的槐多糖。以染料木素为代表的异黄酮类具有良好的防癌抗癌及雌性激素样活性，对癌症、心血管疾病、骨质疏松和女性更年期综合征具有防治作用。芦丁是槲皮素苷中含量最高的成分；槐角苷是染料木素苷的主要成分。目前，提取槐角黄酮的工艺有很多，大多以采用化学试剂为主进行提取，而常规的提取方法存在有机溶剂残留等不安全因素，对人体健康有潜在威胁，现有技术已经对提取方法进行了改进，例如“酶法提取槐角中总黄酮的工艺优化，食品工艺科学2012年”采用酶法对槐角黄酮进行了提取，具备无毒害，反应条件温和等优点，但是该方法存在酶用量较大，提取率较低等缺陷，需要对其进一步改进。本发明前序工作已经对总黄酮提取工艺进行了改进，并且已经申报专利技术，在此基础上，发明人继续对总黄酮的有效成分进行了分离。技术实现要素：在申请人前期成果的基础上，本发明继续对槐角总黄酮有效成本进行了分离，提供了从槐角中提取槐角苷的工艺及其在抗炎症中的用途。本发明是通过如下技术方案来实现的：从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：粉碎→高压→电场处理→剪切→酶反应→微波醇提→蒸发→干燥→吸附→洗脱→蒸发→干燥→溶解→结晶。具体地，所述提取工艺包括如下步骤：取槐角，粉碎，过100-200目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为2-3mpa，保压30-40s，进行脉冲电场处理；再添加3-5倍重量的水，采用高速剪切机剪切，然后添加纤维素酶进行酶反应，再添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用大孔吸附树脂进行吸附，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。优选地，所述脉冲电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps。优选地，所述高速剪切机的剪切时间3min，剪切速度为5000rpm。优选地，所述酶反应条件为：按照1万-2万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为60-90min。优选地，所述微波提取的条件为，功率400-600w，提取时间30-50min。本发明还要求保护所述的提取工艺制备的槐角苷。本发明所述的槐角苷在抗炎症中的用途。本发明技术采用上述工艺，其优点主要包括但是并不限于以下几个方面：槐角因细胞壁富含纤维素和半纤维素而结构紧密，直接超声或微波提取难以使有效成分充分溶出，本发明首先采用高压处理使得细胞壁受压而变形乃至部分破裂，然后进行脉冲电场处理，能够对细胞壁进行穿孔，再经过纤维素酶对细胞壁的纤维素进行酶解处理，上述方法通过协同作用对细胞壁进行了多重破坏，胞内物质溶出率高，提取优势更加明显，并且工艺简单可行，缩短了提取时间，提取率和纯度也相应提高；常规的提取方法存在有机溶剂残留等不安全因素，对人体健康有潜在威胁。本发明减少采用化学有机制剂，提高了提取物的安全性能；本发明采用多种工艺技术，将高压、脉冲电场、高速机械力剪切、酶法以及微波醇提法有机结合到一起，方法进行结合，实现优势互补，弥补单一工艺的劣势，具有能耗低，效率高，不破坏有效成分等特点，从而可获得更高的提取效率和纯度；本发明采用乙酸乙酯溶解其它类型的可溶性黄酮类物质，然后利用槐角苷在冷热乙醇的溶解度不同，将槐角苷结晶析出，收率和纯度高，可应用于抗炎症的药物。附图说明图1：微波功率和时间对总黄酮收率的影响。具体实施方式本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：粉碎→高压→电场处理→剪切→酶反应→微波醇提→蒸发→干燥→吸附→洗脱→蒸发→干燥→溶解→结晶。具体包括：取槐角，粉碎，过100目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为3mpa，保压30s，进行脉冲电场处理，电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps；然后添加5倍重量的水，采用高速剪切机剪切3min，剪切速度为5000rpm，再按照2万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为60min，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为600w，提取时间为30min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用ab-8型大孔吸附树脂进行吸附，用2bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为0.5bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。将结晶物采用高效液相色谱系统检测（操作流程可参照“hplc同时测定槐角中的芦丁和槐角苷”，华西药物杂志2010年），称重结晶物的重量，分析槐角苷的含量和纯度，其中以槐角粉1000g计算，槐角粉中槐角苷的含量为4.71%，收集结晶物为45.8g，结晶物中槐角苷的纯度为95.1%，槐角苷的收率为92.5%。实施例2从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：粉碎→高压→电场处理→剪切→酶反应→微波醇提→蒸发→干燥→吸附→洗脱→蒸发→干燥→溶解→结晶。具体包括：取槐角，粉碎，过200目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为2mpa，保压40s，进行脉冲电场处理，电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps；然后添加4倍重量的水，采用高速剪切机剪切3min，剪切速度为5000rpm，再按照1万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为90min，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为500w，提取时间为60min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用hpd450型大孔吸附树脂进行吸附，用3bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为1bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。经检测，结晶物中槐角苷的纯度为94.7%，槐角苷的收率为93.1%。对比例1从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：取槐角，粉碎，过100目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，进行脉冲电场处理，电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps；然后添加5倍重量的水，采用高速剪切机剪切3min，剪切速度为5000rpm，再按照2万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为60min，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为500w，提取时间为60min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用ab-8型大孔吸附树脂进行吸附，用2bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为0.5bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。对比例2从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：取槐角，粉碎，过100目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为3mpa，保压30s，然后添加5倍重量的水，采用高速剪切机剪切3min，剪切速度为5000rpm，再按照2万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为60min，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为400w，提取时间为60min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用ab-8型大孔吸附树脂进行吸附，用2bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为0.5bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。对比例3从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：取槐角，粉碎，过100目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为3mpa，保压30s，进行脉冲电场处理，电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps；然后添加5倍重量的水，采用高速剪切机剪切3min，剪切速度为5000rpm，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为500w，提取时间为50min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用ab-8型大孔吸附树脂进行吸附，用2bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为0.5bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。对比例4从槐角中提取槐角苷的工艺，其包括如下步骤：取槐角，粉碎，过100目筛，得到槐角粉，然后置于反应器中，控制反应器中压强为3mpa，保压30s，进行脉冲电场处理，电场的场强10kv/cm，总处理时间为200μs，脉冲宽度为4μs，脉冲频率为400pps；然后添加5倍重量的水，再按照2万u:100g槐角粉的比例添加纤维素酶，控制酶反应温度为35℃，反应时间为60min，然后添加相同体积的70%乙醇，升温至60℃，采用微波提取，控制微波功率为500w，提取时间为60min；过滤，收集提取液；然后进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，然后真空冷冻干燥制得总黄酮粗提物，再用ab-8型大孔吸附树脂进行吸附，用2bv的70%乙醇洗脱，洗脱速度为0.5bv/h，收集洗脱液，再次进入到旋转蒸发器中，减压蒸发去除乙醇，最后真空冷冻干燥制得总黄酮提取物；往总黄酮提取物中添加五倍重量的乙酸乙酯，搅拌均匀，然后过滤，收集不溶物，再往不溶物中滴加85%乙醇，边滴加边加热，同时以100rpm搅拌，至不溶物完全溶解，然后置于0℃环境下30min，过滤，收集结晶物，即得。实施例3总黄酮测定：以鲁南地区的槐角为例，本发明实验采用1000g槐角，hplc法测定槐角粉中总黄酮的含量为19.7%，实验组别分别选择实施例1和对比例1-4。通过称重得出总黄酮提取物的重量，hplc法测定提取物中总黄酮含量，计算总黄酮的收率，计算公式：收率＝（(提取物的质量×含量)/（槐角质量×含量））×100％。具体结果见表1：表1组别槐角粉重量（g）总黄酮提取物（g）提取物中总黄酮含量%收率%实施例11000245.975.894.6对比例11000234.770.483.9对比例21000221.868.176.7对比例31000218.362.669.4对比例41000247.672.991.6本发明还检测了实施例1和对比例1-4的结晶物的重量以及结晶物中槐角苷的含量，具体见表2：表2组别槐角粉重量（g）结晶物重量（g）含量%实施例1100045.892.5对比例1100041.691.4对比例2100042.990.6对比例3100038.791.7对比例4100044.892.1如上表1-2所示，实施例1组中总黄酮收率和纯度均高于对比例1-4，实施例1组中结晶物的重量以及槐角苷含量在各组别中均达到最高；本发明采用多种工艺技术，将高压、脉冲电场、高速机械力剪切、酶法以及微波醇提法有机结合到一起，方法进行结合，实现优势互补，弥补单一工艺的劣势，具有能耗低，效率高，不破坏有效成分等特点，从而可获得更高的提取效率和纯度。实施例4微波功率和时间对收率的影响，设定微波功率分别为200w、400w、600w、800w、1000w，微波时间分别为10、20、30、40、50、60、70、80min。如图1所示，微波功率增大或微波处理时间增加均可以提高总黄酮的收率，但是当微波功率增大到600w以后，收率不再增加，反而降低，可能是功率太大，造成黄酮类物质受到破坏；微波时间在50min以内，收率提升明显，随着时间增加，收率并没有明显变化。因此，本发明选择微波功率在400-600w，微波时间为30-50min。最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。当前第1页12