本法发明属于医药技术领域，涉及一类具有抗肿瘤活性的特定化学结构的化合物，具体为1,3,4-恶二唑结构的嘧啶类抗肿瘤化合物及其制备方法和应用。
背景技术
癌症是威胁人类健康的重要疾病，已经超过了心血管疾病成为导致人类死亡的第一杀手。世界卫生组织报道，预计2030年，将有1200万人死于恶性肿瘤。目前的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效，但存在选择性差、毒副作用大等缺点，药物治疗期待着新的突破。嘧啶类化合物在抗肿瘤方面具有良好的活性，其主要作用在dna合成与复制过程中，并且当dna损伤时，通过嘧啶途径补救合成，以保证细胞的增殖。癌细胞dna合成与复制旺盛，因而当dna合成受阻时能够有效抑制癌细胞生长，进而达到抗肿瘤的目的。并且，我们团队已有大量的数据证明嘧啶类化合物具有良好的抗肿瘤效果(我们团队的专利201611205794.0、专利201711009523.2)。1,3,4-恶二唑结构是许多已上市的抑制dna合成药物的重要药效团，近年来研究表明其具有十分优异的抑制dna合成的能力。本发明结合以往我们团队专利设计的嘧啶酰基肼类抗肿瘤化合物的结构特点，引进新基团——1,3,4-恶二唑结构替代双酰基肼结构，以期得到抗肿瘤活性更好的全新化合物，并未见到相关结构的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一类1,3,4-恶二唑结构的嘧啶类抗肿瘤化合物及其制备方法，所制备的化合物在体外抗肿瘤活性测试中显现出了良好的结果。
本发明提供的嘧啶类抗肿瘤化合物的结构通式如下：
其中：
a苯环上相对磺酰氨基团的1,3,4-恶二唑取代为2位、3位或4位；
b苯环r基团取代为2位、3位或4位单取代或双取代的甲基、氟原子、氯原子、或溴原子。
所述的通式为ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，结构选自下述任意一种，但不仅限于以下化合物，只要化合物结构式满足通式，均为本发明的限定范围。
n-(4-(5-苯基-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a1)；
n-(3-(5-(邻甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a2)；
n-(3-(5-(间甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a3)；
n-(3-(5-(对甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a4)；
n-(3-(5-(2-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a5)；
n-(3-(5-(3-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a6)；
n-(3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a7)；
n-(3-(5-(2-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a8)；
n-(3-(5-(3-氯苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a9)；
n-(3-(5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a10)；
n-(3-(5-(2-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a11)；
n-(3-(5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a12)；
n-(3-(5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a13)。
本发明还提供所述1,3,4-恶二唑嘧啶类抗肿瘤化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
所述通式ⅰ所示化合物的制备方法，具体包括以下步骤。
步骤1、于反应瓶中加入1倍量尿嘧啶，2-4倍量氯化亚砜，室温反应1-3h，然后加入3倍量氯磺酸于60℃反应1-2h，70℃继续反应8h，反应完毕后，将反应液加入冰醋酸与冰水的混合物中，析出沉淀，抽滤，多次水洗，干燥，得尿嘧啶-5-磺酰氯，灰白色固体；
步骤2、于反应瓶中加入1倍量硝基取代苯甲酸，适量乙腈作溶剂，2-3倍量无水碳酸钾，1-2倍量硫酸二甲酯，50℃反应，薄层色谱监控反应进程，反应完毕后，抽滤得滤液，减压蒸发除去溶剂，得淡黄色油状液体，取上步淡黄色油状液体于反应瓶中，适量甲醇作溶剂，3-5倍量80％水合肼，回流反应；薄层色谱监控反应进程；反应完毕后，减压蒸发除去溶剂，静置冷却至室温，析出白色固体，水洗抽滤，干燥得中间体硝基取代苯甲酰肼；
步骤3、于反应瓶中加入1倍量r取代苯甲酸，适量氯化亚砜作溶剂，催化量dmf，50℃反应3-6h，然后减压蒸发除去氯化亚砜，制得苯甲酰氯备用，另于反应瓶中加入(相对于r取代苯甲酸)1倍量硝基取代苯甲酰肼，适量二氯甲烷，2-4倍量三乙胺，冰浴条件下滴加适量二氯甲烷稀释的苯甲酰氯溶液，滴加完毕后，于室温反应过夜。反应完毕后，减压蒸发除去溶剂，加入少量甲醇分散，然后搅拌加入大量水中，析出固体，调节ph至酸性，抽滤得滤饼，干燥得中间体n-(r取代苯甲酰基)-硝基取代苯甲酰肼粗品，浅黄色固体；
步骤4、于反应瓶中加入1倍量n-(r取代苯甲酰基)-硝基取代苯甲酰肼，适量三氯氧磷作溶剂，100-110℃回流反应8-12小时，反应完毕后，将反应液缓慢滴加入碎冰中，不断搅拌至有固体析出，放冷抽滤，滤饼用大量水洗，干燥得2-(r-取代苯基)-5-(硝基取代苯基)-1,3,4-恶二唑粗品，灰白色固体；
步骤5、于反应瓶中加入1倍量2-(r-取代苯基)-5-(硝基取代苯基)-1,3,4-恶二唑，适量甲醇作溶剂，再将8-10倍量氯化铵溶于适量水中加入其中，再加入4-6倍量锌粉，室温搅拌反应，薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，抽滤得滤液，减压蒸发除去溶剂至有固体析出，加入大量水中，析出固体，抽滤得滤饼，干燥后经柱层析纯化得中间体取代(5-(r-取代苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，淡黄色固体；
步骤6、于反应瓶中加入1倍量取代(5-(r-取代苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺,适量dmf作溶剂，1-3倍量吡啶和1倍量尿嘧啶-5-磺酰氯，室温反应，薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，将反应液缓慢倒入水中，析出固体，调酸至溶液ph值为酸性，抽滤得滤饼，然后将滤饼溶解在naoh的水溶液中，抽滤得滤液，再调酸至析出固体，抽滤得滤饼，干燥得目标化合物，白色固体粉末，即得。
一种药物组合物，包括1,3,4-恶二唑嘧啶类抗肿瘤化合物、其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，及药学上可接受的载体。
1,3,4-恶二唑嘧啶类抗肿瘤化合物、其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步的，所述的抗肿瘤药物为抑制人肺癌h460细胞、人胃癌mgc-803细胞或人肺癌a549细胞药物。
与现有技术相比，本发明具有如下技术效果。
本发明的化合物在体外抗肿瘤活性试验中具有显著效果。本发明的设计过程中，对以往申请人团队专利中的嘧啶酰基肼化合物(专利201711009523.2)进行结构改造，引进1,3,4-恶二唑结构，设计并合成了1,3,4-恶二唑嘧啶类抗肿瘤全新化合物，大大的提高了抗肿瘤效果，并且与嘧啶酰基肼类化合物相比，对人肺癌a549细胞具有更优秀的抗增殖能力。在合成过程中，简化了合成步骤，对未来工业生产提供可能。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，这些实施例只是举例说明，绝不限制本发明的范围。
实施例1
n-(3-(5-苯基-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a1)的制备
a.尿嘧啶-5-磺酰氯的制备
于100ml反应瓶中加入尿嘧啶(5g,44.61mmol)，氯化亚砜(13.27g,111.52mmol)，室温反应1h，然后加入氯磺酸(17.73g，133.82mmol)于60℃反应1h，70℃继续反应8h。反应完毕后，将反应液加入冰醋酸与冰水的混合物中，析出沉淀，抽滤，多次水洗，干燥，得白色固体7.25g，收率：77.21％。
b.间硝基苯甲酰肼的制备
于100ml反应瓶中加入间硝基苯甲酸(5g，29.92mmol)，乙腈50ml，碳酸钾(10.34g，74.80mmol)，硫酸二甲酯(5.66g，44.88mmol)，50℃反应，薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，抽滤得滤液，减压蒸发除去溶剂，得淡黄色油状液体。取上步淡黄色油状液体于100ml反应瓶中，加入甲醇40ml，80％水合肼(7.49g,119.67mmol)，于70℃回流反应。薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，减压蒸发除去溶剂，静置冷却至室温，析出白色固体，水洗抽滤，得白色固体产物4.50g，收率83.02％。
c.n-苯甲酰基-3-硝基苯甲酰肼的制备
于100ml反应瓶中加入苯甲酸(3g，)，氯化亚砜15ml，dmf3滴，50℃反应5h，然后减压蒸发除去氯化亚砜，制得苯甲酰氯备用。另于250ml反应瓶中加入间硝基苯甲酰肼(4.45g，24.57mmol)，二氯甲烷120ml，三乙胺(4.97g，49.13mmol)，冰浴条件下滴加ml二氯甲烷稀释的苯甲酰氯溶液，滴加完毕后，于35℃反应过夜。反应完毕后，减压蒸发除去溶剂，加入少量甲醇分散，然后搅拌加入大量水中，析出固体，调节ph至酸性，抽滤得滤饼，干燥得粗品5.85g，浅黄色固体，收率83.45％。
d.2-(3-硝基苯基)-5-苯基-1,3,4-恶二唑的制备
于250ml反应瓶中加入n-苯甲酰基-3-硝基苯甲酰肼(5g，17.53mmol)，三氯氧磷50ml，100℃回流反应10小时。反应完毕后，将反应液缓慢滴加入碎冰中，不断搅拌至有固体析出，放冷抽滤，滤饼用大量水洗，干燥得粗品，灰白色固体4.12g，收率88.03％。
e.3-(5-苯基-1,3,4-恶二唑)苯胺的制备
于250ml反应瓶中加入2-(3-硝基苯基)-5-苯基-1,3,4-恶二唑(4g，14.97mmol)，甲醇120ml，再将氯化铵(8.01g，148.68mmol)溶于20ml水中加入其中，锌粉(5.87g，89.81mmol)，室温搅拌反应，薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，抽滤得滤液，减压蒸发除去溶剂至有固体析出，加入大量水中，析出固体，抽滤得滤饼，干燥后经柱层析纯化得淡黄色固体1.55g，收率43.66％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.09(s,2h),7.64(s,3h),7.29(d,j＝53.8hz,3h),6.81(s,1h),5.54(s,2h).
f.n-(3-(5-苯基-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a1)的制备
于100ml反应瓶中加入3-(5-苯基-1,3,4-恶二唑)苯胺(0.5g，2.11mmol),dmf20ml，吡啶(0.25g，3.16mmol)和尿嘧啶-5-磺酰氯(0.44g，2.11mmol)，室温反应，薄层色谱监控反应进程。反应完毕后，将反应液缓慢倒入水中，析出固体，调酸至溶液ph值为2-3，抽滤得滤饼，然后将滤饼溶解在naoh的水溶液中，抽滤得滤液，再调酸至析出固体，抽滤得滤饼，干燥得灰白色固体0.42g，收率：48.44％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.95(d,j＝31.2hz,1h),11.65(s,1h),10.57(s,1h),8.18(s,1h),8.08(d,j＝6.4hz,2h),7.88(s,1h),7.78(d,j＝7.5hz,1h),7.63(d,j＝6.7hz,3h),7.53(t,j＝7.8hz,1h),7.39(d,j＝7.8hz,1h).ms(esi,m/z):410.06[m-h]-。
实施例2
n-(3-(5-(邻甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a2)的制备
以邻甲基苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(邻甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(邻甲苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a2)，灰白色固体，收率：42.56％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.92(s,1h),11.65(s,1h),10.58(s,1h),8.17(s,1h),8.01(d,j＝7.3hz,1h),7.88(s,1h),7.76(d,j＝7.3hz,1h),7.52(d,j＝4.4hz,2h),7.48–7.43(m,2h),7.39(d,j＝7.4hz,1h),2.67(s,3h).ms(esi,m/z):424.08[m-h]-。
实施例3
n-(3-(5-(间甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a3)的制备
以间甲基苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(间甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(间甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a3)，灰白色固体，收率：37.58％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.91(s,1h),11.65(s,1h),10.56(s,1h),8.18(s,1h),7.89–7.85(m,3h),7.77(d,j＝7.4hz,1h),7.53–7.48(m,2h),7.43(d,j＝7.2hz,1h),7.39(d,j＝7.7hz,1h),2.40(s,3h).ms(esi,m/z):424.08[m-h]-。
实施例4
n-(3-(5-(对甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a4)的制备
以对甲基苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(对甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(对甲苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a4)，收率：50.67％。
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实施例5
n-(3-(5-(2-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a5)的制备
以2-氟苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(2-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(2-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a5)，灰白色固体，收率：46.35％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.92(s,1h),11.65(s,1h),10.60(s,1h),8.17(s,1h),8.11(t,j＝6.9hz,1h),7.88(s,1h),7.75(d,j＝7.7hz,1h),7.70(dd,j＝12.1,7.0hz,1h),7.54–7.48(m,2h),7.45(t,j＝7.6hz,1h),7.40(d,j＝9.3hz,1h).ms(esi,m/z):428.05[m-h]-。
实施例6
n-(3-(5-(3-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a6)的制备
以3-氟苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(3-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(3-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a6)，灰白色固体，收率：39.48％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.89(s,1h),11.65(s,1h),10.56(s,1h),8.19(d,j＝4.1hz,1h),7.93(d,j＝7.7hz,1h),7.90–7.86(m,2h),7.81(d,j＝7.7hz,1h),7.68(dd,j＝13.8,7.9hz,1h),7.52(dd,j＝17.4,9.5hz,2h),7.39(d,j＝8.1hz,1h).ms(esi,m/z):428.05[m-h]-。
实施例7
n-(3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a7)的制备
以4-氟苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a5)，灰白色固体，收率：45.65％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ12.13(d,j＝5.1hz,1h),11.64(s,1h),10.57(s,1h),8.17–8.12(m,3h),7.86(s,1h),7.78(d,j＝7.7hz,1h),7.50(dt,j＝17.6,8.4hz,3h),7.38(dd,j＝8.1,1.4hz,1h).ms(esi,m/z):428.05[m-h]-。
实施例8
n-(3-(5-(2-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a8)的制备
以2-氯苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(2-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(2-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a8)，灰白色固体，收率：49.75％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.89(s,1h),11.65(s,1h),10.60(s,1h),8.17(s,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),7.88(s,1h),7.74(t,j＝8.5hz,2h),7.66(t,j＝7.6hz,1h),7.59(t,j＝7.4hz,1h),7.53(t,j＝7.9hz,1h),7.40(d,j＝8.0hz,1h).ms(esi,m/z):444.02[m-h]-。
实施例9
n-(3-(5-(3-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a9)的制备
以3-氯苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(3-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(3-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a9)，灰白色固体，收率：44.52％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ12.06(s,1h),11.64(s,1h),10.56(s,1h),8.15(s,1h),8.09(s,1h),8.05(d,j＝7.6hz,1h),7.89(s,1h),7.82(d,j＝7.6hz,1h),7.73(d,j＝7.4hz,1h),7.67(s,1h),7.53(t,j＝7.9hz,1h),7.40(d,j＝7.9hz,1h).ms(esi,m/z):444.02[m-h]-。
实施例10
n-(3-(5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a10)的制备
以4-氯苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a10)，灰白色固体，收率：45.81％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.90(s,1h),11.65(s,1h),10.61(d,j＝53.2hz,1h),8.19(s,1h),8.08(s,2h),7.87(s,1h),7.73(d,j＝47.7hz,3h),7.52(s,1h),7.39(s,1h).ms(esi,m/z):444.02[m-h]-。
实施例11
n-(3-(5-(2-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a11)的制备
以2-溴苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(2-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(2-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a11)，灰白色固体，收率：43.67％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.91(s,1h),11.65(s,1h),10.58(d,j＝20.4hz,1h),8.17(s,1h),8.04(dd,j＝7.7,1.6hz,1h),7.90(dd,j＝9.5,1.2hz,2h),7.75(d,j＝7.8hz,1h),7.64–7.62(m,1h),7.57(dd,j＝7.6,6.1hz,1h),7.53(t,j＝8.0hz,1h),7.40(dd,j＝8.2,1.3hz,1h).ms(esi,m/z):487.07[m-h]-。
实施例12
n-(3-(5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a12)的制备
以3-溴苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a12)，灰白色固体，收率：38.53％。
1hnmr(600mhz,dmso)δ12.10(s,1h),11.64(s,1h),10.56(s,1h),8.21(s,1h),8.15(s,1h),8.08(d,j＝7.8hz,1h),7.89(s,1h),7.83(dd,j＝15.5,7.8hz,2h),7.59(t,j＝7.9hz,1h),7.52(t,j＝7.9hz,1h),7.40(dd,j＝8.1,1.2hz,1h).ms(esi,m/z):487.07[m-h]-。
实施例13
n-(3-(5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a13)的制备
以4-溴苯甲酸为原料，按照实施例1c，1d，1e步骤制得3-(5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯胺，按照实施例1f步骤制得n-(3-(5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑)苯基)-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-磺酰胺(a13)，灰白色固体，收率：35.24％。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ11.85(s,1h),11.64(s,1h),10.56(s,1h),8.19(s,1h),8.01(d,j＝6.8hz,2h),7.88–7.82(m,3h),7.78(d,j＝6.3hz,1h),7.52(s,1h),7.38(d,j＝6.5hz,1h).ms(esi,m/z):487.07[m-h]-。
实施例14抑制肿瘤细胞增殖实验。
对本发明的化合物进行了肿瘤细胞增殖抑制实验，试验方法采用常规的mtt法。
肿瘤细胞的培养：细胞株选用h460(人肺癌细胞)、mgc-803(人胃癌细胞)和a549(人肺癌细胞)，以rpmi1640+10％fbs+双抗(青霉素100单位/ml，链霉素100μg/ml)的培养液培养。
样品配制：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含dmso的pbs(-)稀释。最终浓度分别为：10μm、5μm、2.5mm、1.25μm、0.625μm。以依托泊苷(etoposide)作为对照。
细胞增殖抑制的测试方法：96孔板每孔加入浓度为4～5×104个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5％co2培养箱内。24小时后，分别加入样品液和对照品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5％co2作用24小时。每孔加入5mg/ml的mtt(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑翁溴化物)溶液15μl，作用4小时后加入溶解液dmso，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用mk-2全自动酶标仪测570nmod值，计算抑制率。
实验结果见表1。结果表明，本专利设计并合成的化合物与阳性药依托泊苷相比，抑制活性均高于依托泊苷，并且对人肺癌a549细胞具有突出抗增殖能力。
表1样品对人体肿瘤细胞的体外增殖抑制活性ic50值
实施例15对比试验
对本专利发明的化合物和以往我们团队嘧啶酰基肼类抗肿瘤化合物(专利201711009523.2)在相同取代基条件下对人肺癌a549细胞进行了肿瘤细胞增殖抑制实验，试验方法采用常规的mtt法如实例14(结果如表2)。
表21,3,4-恶二唑嘧啶类与以往我们团队设计的嘧啶酰基肼类(同取代基)
对细胞a549的增殖抑制活性ic50值对比
以上实验数据显示，本发明中1,3,4-恶二唑嘧啶类化合物具有较好体外抗肿瘤活性，与以往我们团队设计的嘧啶酰基肼类(专利201711009523.2)同取代基比较，对a549细胞的增殖抑制表现出更好的活性，对因而为深入研究和开发新的抗肿瘤药物开辟了新的途径。