血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p及应用的制作方法

文档序号:18145651发布日期:2019-07-10 11:47
血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p及应用的制作方法
本发明属于医学分子生物学领域,具体涉及一种血浆外泌体has-miR-129-5p分子标志物在的制备及其在妊娠滋养细胞肿瘤患者甲氨蝶呤单药化疗耐药性早期预测方面的应用。技术背景妊娠滋养细胞肿瘤(gestationaltrophoblasticneoplasia,GTN),是一种来源于胚胎滋养细胞的恶性肿瘤,可继发于任何类型的妊娠。世界范围内的GTN发生率差异明显,且亚洲和拉丁美洲的发生率明显高于欧洲和北美洲。GTN恶性程度极高,发生转移早而广泛,在化疗药物问世前,其死亡率可高达90%以上。自从甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、放线菌素D(dactinomycin,ACT-D)、等一系列化疗药物有效应用于治疗GTN后,其治愈率已达80%~90%,使其成为通过化疗能治愈的首个人类实体肿瘤,因而化疗是其主要治疗手段,但仍有约10%-20%的GTN患者因发生耐药而达不到治愈目的。目前GTN的临床治疗多以FIGO2000妊娠滋养细胞肿瘤分期与预后评分系统为指导,但对于GTN化疗效果的评估,特别是化疗耐药性的预测仍难以令人满意。随着分子医学的发展,寻找GTN早期诊断及耐药性预测的分子标志物,以便对GTN患者进行分层精准治疗,从而提高其治愈率,已成为GTN研究的关注点。外泌体(exosome),最初是指网织红细胞分化过程中分泌的由多囊泡内体(MV)与质膜融合形成的直径为40-100nm的囊泡样结构。随后大量研究发现各种类型的细胞均能释放外泌体,并广泛分布于唾液、血浆和乳汁等各种体液当中。外泌体内携带有蛋白、RNA、DNA、细胞因子等多种生物活性物质,并能传递重要的信号分子,形成了一种全新的细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与疾病的发生发展密切相关。近年来,寻找以外泌体为依托的分子标志物已成为研究的热点,特别是外泌体来源的microRNA,由于其比血浆游离microRNA具有更好的稳定性,且在外泌体中靶向富集,其作为分子标志物的巨大潜力日益显现。本发明即是首次提出发现了一种血浆外泌体microRNA可以作为GTN患者甲氨蝶呤单药化疗耐药性预测的分子标志物。技术实现要素:本发明的目的在于提供一种血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p,可用于对GTN患者甲氨蝶呤单药化疗耐药性早期预测方面的应用方法及制备的试剂盒。血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p在制备GTN患者早期预测甲氨蝶呤单药化疗耐药性的试剂盒中的应用,所述的has-miR-219a-5p的序列是:UGAUUGUCCAAACGCAAUUCU。所述的GTN早期预测甲氨蝶呤单药化疗耐药性的试剂盒为用于定量检测血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p的试剂盒,具体是实时荧光定量PCR检测试剂盒。一种具有GTN早期甲氨蝶呤单药化疗耐药性早期预测能力的试剂盒,包括血浆外泌体提取系统、外泌体microRNA提取系统、反转录系统、扩增系统和相对定量内参标准化系统。所述的试剂盒是通过定量检测血浆外泌体分子标志物has-miR-219a-5p来早期预测GTN患者对甲氨蝶呤单药化疗耐药性;所述的has-miR-219a-5p的序列是:UGAUUGUCCAAACGCAAUUCU。所述的相对定量内参标准化系统由has-miR-129-5p组成;所述的has-miR-129-5p的序列是:CUUUUUGCGGUCUGGGCUUGC。所述的血浆外泌体提取系统包括:ExoQuickTMExosomePrecipitationSolution;所述的外泌体microRNA提取系统包括:QIAzolTMLysisReagent(RNA裂解液)、三氯甲烷、BufferRW