用于在癌症疗法中靶向坏死的人源化抗核抗体的制作方法

文档序号:19156749发布日期:2019-11-16 00:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人源化抗核抗体,相对于相应的非人源化抗体,该人源化抗核抗体对核靶标具有提高的结合亲和力。

2.如权利要求1所述的人源化抗体,其中该核靶标是单链dna。

3.如权利要求1-2中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有比相应的非人源化抗体高至少2倍的结合亲和力。

4.如权利要求1-3中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有比相应的非人源化抗体高至少4倍的结合亲和力。

5.如权利要求1-4中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有比相应的非人源化抗体高至少8倍的结合亲和力。

6.如权利要求1-5中任一项所述的人源化抗体,其中相对于相应的非人源化抗体,该人源化抗体在h-cdr3中具有突变的氨基酸。

7.如权利要求6所述的人源化抗体,其中h-cdr3中突变的氨基酸选自下组,该组由以下组成:107phe→arg、101ile→his、102gly→arg、109tyr→thr、103val→ser、104arg→thr、109tyr→arg、和104arg→leu。

8.如权利要求1-7中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有以下各项中的至少一种:

h-cdr1序列,其包含trywmh(seqidno:1);

h-cdr2序列,其包含gaiypgnsdtsynqkfkg(seqidno:2);

h-cdr3序列,其包含eeigvrrwfay(seqidno:3);

l-cdr1序列,其包含rarqsisnylh(seqidno:4);

l-cdr2序列,其包含asqsis(seqidno:5);以及

l-cdr3序列,其包含qqsnswplt(seqidno:6)。

9.如权利要求1-6中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有vh序列,该vh序列包含

10.如权利要求1-6中任一项所述的人源化抗体,其中该人源化抗体具有vl序列,该vl序列包含ivltqspatlslspgeratlscrarqsisnylhwyqqkpgqaprlliyyasqsisgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqsnswpltfgqgtkveik(seqidno:8)。

11.一种杂合分子,该杂合分子包含与治疗剂和显像剂中至少一种偶联的如权利要求1-10中任一项所述的抗体的至少结合部分。

12.如权利要求11所述的杂合分子,其中该抗体的至少结合部分是全长抗体、fab片段、f(ab’)2片段、fab2片段、或scfv。

13.如权利要求11-12中任一项所述的杂合分子,其中该治疗剂包含以下各项中的至少一种:细胞因子或其部分、趋化因子或其部分、髓源性抑制细胞(mdsc)的抑制剂、m2巨噬细胞的抑制剂、放射性同位素、共刺激分子、toll样受体(tlr)激动剂或配体、干扰上皮间充质转化(emt)的分子、和化学治疗药。

14.如权利要求11-12中任一项所述的杂合分子,其中该显像剂包含放射性同位素、pet标记、和spect标记中的至少一种。

15.一种药物组合物,其包含如权利要求1-10中任一项所述的抗体或如权利要求11-14中任一项所述的杂合分子。

16.如权利要求15所述的药物组合物,该药物组合物被配制成用于注射。

17.一种用于靶向坏死细胞的方法,该方法包括使该坏死细胞与如权利要求1-10中任一项所述的抗体或如权利要求11-14中任一项所述的杂合分子接触。

18.如权利要求17所述的方法,其中该坏死细胞是肿瘤微环境中的坏死肿瘤细胞。

19.如权利要求17-18中任一项所述的方法,其中接触步骤在体内进行。

20.一种将治疗剂递送至含有坏死肿瘤细胞的肿瘤微环境的方法,该方法包括:

提供与如权利要求1-10中任一项所述的抗体偶联的治疗剂;并且

在允许该抗体与该肿瘤微环境中坏死细胞中的核靶标结合的条件下,使该微环境中的坏死肿瘤细胞与该治疗剂接触。

21.如权利要求20所述的方法,其中该治疗剂包含以下各项中的至少一种:细胞因子或其部分、趋化因子或其部分、髓源性抑制细胞(mdsc)的抑制剂、m2巨噬细胞的抑制剂、放射性同位素、共刺激分子、toll样受体(tlr)激动剂或配体、干扰上皮间充质转化(emt)的分子、和化学治疗药。

22.如权利要求20-21中任一项所述的方法,其中该肿瘤是实体瘤。

23.如权利要求20-22中任一项所述的方法,该方法进一步包括给予脉管系统通透性增强剂的步骤。

24.一种将显像剂递送至含有坏死肿瘤细胞的肿瘤微环境中的方法,该方法包括:

提供与如权利要求1-10中任一项所述的抗体偶联的显像剂;并且

在允许该抗体与该肿瘤微环境中坏死细胞中的核靶标结合的条件下,使该微环境中的坏死肿瘤细胞与该显像剂接触。

25.如权利要求24所述的方法,其中该显像剂包含放射性同位素、pet标记、和spect标记中的至少一种。

26.如权利要求24-25中任一项所述的方法,其中该肿瘤是实体瘤。

27.如权利要求24-26中任一项所述的方法,该方法进一步包括给予脉管系统通透性增强剂的步骤。

28.一种从鼠抗体产生亲和力优化的人源化抗体的方法,该方法包括:

鉴定与该鼠抗体序列具有预定最小同一性的人抗体序列;

将针对vh和vl的鼠cdr移植到经鉴定的人抗体序列的相应vh和vl中,以此获得嵌合vh和vl序列;

使用嵌合vh和vl序列产生scfv杂合体,并且在h-cdr3中进行定点诱变以产生scfv杂合体文库;

使用亲和力选择以从该scfv杂合体文库中鉴定结合物;并且

将该结合物的嵌合vh和vl序列移植到人抗体序列中,以此获得该亲和力优化的人源化抗体。

29.如权利要求28所述的方法,其中除cdr外,该预定最小同一性是至少90%同一性。

30.如权利要求28-29中任一项所述的方法,其中该scfv杂合体是噬菌体展示杂合体。

31.如权利要求28-30中任一项所述的方法,其中h-cdr3中的定点诱变针对该h-cdr3的单个氨基酸位置进行。

32.如权利要求28-31中任一项所述的方法,其中经至少三个连续的选择/富集循环进行该亲和力选择。

33.如权利要求28-32中任一项所述的方法,其中该亲和力选择进一步包括在h-cdr3和/或框架区中进行另外的定点诱变的至少一个步骤。


技术总结
提出了具有增强的结合亲和力和肿瘤摄取的人源化单克隆抗核抗体。特别优选的抗体是H‑CDR3的定点突变体,与非人源化非突变的形式相比,该定点突变体具有高达约8倍提高的亲和力。在另外优选的方面,将此类人源化抗体用于肿瘤坏死靶向地递送免疫调节剂、免疫效应物、和其他治疗剂或诊断剂。

技术研发人员:A·爱泼斯坦;胡培声
受保护的技术使用者:癌症治疗实验室有限公司
技术研发日:2018.03.19
技术公布日:2019.11.15
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