本发明属于亚麻蛋白深加工技术领域，具体涉及利用微生物脱除亚麻饼中生氰糖苷的方法。
背景技术：
亚麻是一种经济价值较高的油料作物，亚麻榨油后的亚麻籽饼富含蛋白质和膳食纤维等营养成分，尤其含有的较高的支链氨基酸，是重要的功能食品原料。然而，亚麻饼中含有生氰糖苷，生氰糖苷本身不呈现毒性，但摄入含有生氰糖苷的亚麻饼的组织结构遭到破坏后，生氰糖苷与其共存的水解酶作用产生hcn（一种剧毒）可引起动物中毒。国内外学者对脱除亚麻饼中的生氰糖苷做了许多的研究，常用的脱毒方法有水煮法、溶剂浸出法、挤压法、微生物法等。水煮法脱毒是亚麻籽在足量的水中使其中的糖苷酶充分地发挥效力，最终使生氰糖苷转化成hcn并得以释放。水煮法虽然脱毒率很高，但这种方法容易造成部分营养成分的损失和功能性质的变化。溶剂法主要是利用极性溶剂对生氰糖苷的浸提作用，去除亚麻饼中的糖苷，溶剂脱毒法可显著降低亚麻饼中生氰糖苷含量，但存在溶剂残留等食品安全风险。挤压法具有高压、高温、剪切和热处理、以及短时强烈挤压的功能，挤压法具有物料作用时间短、营养损失小等优点，但需挤压膨化机等专门设备和挤压过程难以控制，设备投资成本高。微生物法是利用其自身代谢过程中产生的β-葡萄糖苷酶降解生氰糖苷，但现知脱除亚麻饼生氰糖苷的菌株较少，脱毒方法较复杂，脱毒效果也不够理想，无法达到食用水平。因此，亟待开发一种技术先进、设备投资少、经济合理的脱除亚麻饼中生氰糖苷的方法。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种复合菌种固态发酵亚麻饼脱毒方法，该方法从益生菌中筛选出对亚麻饼脱毒较好的菌株，再行组合筛选出互作效果好的复合菌种，先经固态发酵脱除大多数的生氰糖苷，最后经高压处理彻底脱除。该方法脱除生氰糖苷效率高，设备投资少，生产成本低，出品率高，经济效益好。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种复合菌种固态发酵亚麻饼脱毒方法，包括如下步骤：
（1）菌种活化
aas2.112酿酒酵母（saccharomycescerevisiae）活化将as2.112酿酒酵母接到斜面ypd培养基中，在25-30℃培养2-4d，备用。
bcgmccno.10921植物乳杆菌grx16(lactobacillusplantarumgrx16)活化，将cgmccno.10921植物乳杆菌grx16接到斜面mrs培养基中，36-38℃、厌氧培养2-3d，备用。
（2）制备液体菌种
aas2.112酿酒酵母洁净容器中装入不加琼脂的酵母蛋白胨葡萄糖ypd培养基，0.10mpa灭菌15-25min，冷却后接入（1）活化的as2.112酿酒酵母斜面菌种，24-30℃、100-160r／min振荡培养2-3d。
bcgmccno.10921植物乳杆菌grx16洁净容器中装入不加琼脂的mrs培养基，0.10mpa灭菌15-25min，冷却后接入（1）活化的cgmccno.10921植物乳杆菌grx16斜面菌种，36-38℃、厌氧、100-160r／min振荡培养2-3d，备用。
（3）制备生产发酵剂培养基
称取玉米粉1份倒入不锈钢容器中，加玉米粉重量4-5倍的水，加热到85-95℃糊化10-15min，降温至70-82℃时，用6%-7%的盐酸调节ph至6.2，加入玉米粉重量1%的中高温淀粉酶液化2h，再降温至60-65℃时用6%-7%的盐酸调节ph至4.3，再加入玉米粉重量0.1%的糖化酶糖化4h，然后在100℃下灭酶10-15min，冷却制得玉米粉糖化液，接种前，用凉开水将糖化液再稀释一倍，得发酵剂培养基。
（4）制备生产发酵剂
aas2.112酿酒酵母在（3）制备的生产发酵剂培养基中接入重量比为5%-6%的（2）制备的酿酒酵母液体菌种，25-30℃、100-160r／min振荡培养24-48h，使酿酒酵母细胞数量达到1.2-1.6×108个/ml。
bcgmccno.10921植物乳杆菌grx16在（3）制备的生产发酵剂培养基中接入重量比为5%-6%的（2）制备的植物乳杆菌grx16液体菌种，36-38℃、厌氧、100-160r／min振荡培养36-48h，使植物乳杆菌grx16细胞数量达到1.5-1.8×108个/ml。
（5）制备复合菌种生产发酵剂
复合菌种生产发酵剂由（4）制备的下列重量份生产发酵剂组成，1份as2.112酿酒酵母和1.5份cgmccno.10921植物乳杆菌grx16。
（6）制备固体发酵原料
固体发酵原料由以下重量份原料组成，100份亚麻饼，40-45份净水，0.1份硫酸铵，0.4份磷酸二氢钾，0.15份氯化钠，0.2份硫酸镁，15份（5）制备的复合菌种生产发酵剂。
（7）固体发酵
将步骤（6）的原料混合均匀，升温到28-30℃发酵24-36h后，继续升温到36-38℃、厌氧培养24-36h。
（8）高压处理
将步骤（7）生产的固体发酵产物放入高压灭菌容器中，0.1-0.15mpa处理10min，脱除残留生氰糖苷，然后烘干，得成品。
本发明方法首先从益生菌中筛选出对亚麻饼脱毒较好的菌株，保证了所选菌种的代谢产物没有对机体有害的毒素，提前把好食品安全关。再将筛选的单一菌种进行组合，从中筛选出互作效果好的复合菌种，采用生产成本低的固态发酵方法脱除大多数的生氰糖苷。作为微生物脱毒的局限性就是不可能达到完全脱除的效果，因此在最后环节采用了高压处理手段彻底脱除了亚麻饼中残留的生氰糖苷。
采用本发明方法与现有微生物脱毒技术相比，具有以下优点：（1）产品中生氰糖苷没有检出，达到食品安全水平。（2）本发明采用的两种复合菌种均为益生菌，代谢产物没有对机体有害的毒素，安全性好。（3)产品无异味、适口性好。（4）产品的蛋白含量较原料提高了8.6%，其中主要为微生物蛋白，富含17种氨基酸，包括多种动物的必需氨基酸，改善了蛋白质量。（5）产品中含有微生物产生的有益酶，包括利于消化的纤维素酶、糖化酶和蛋白酶。（6）产品中含有益生菌产生的有益代谢产物、活性肽等益生物质，可提高免疫力。（7）本发明方法脱除生氰糖苷效率高，设备投资少，生产成本低，出品率高，经济效益好。
下面结合实施例对本发明进一步的说明。
实施例1
本发明的复合菌种固态发酵亚麻饼脱毒方法如下：
（1）制备ypd培养基取葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母膏10g，琼脂18g，蒸馏水1000ml，0.10mpa灭菌20min，倒入试管中倾斜放置得斜面ypd培养基；上述原料不加琼脂时得液体ypd培养基。
（2）制备mrs培养基取蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二铵2g，吐温801ml，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂18g，蒸馏水11000ml，ph6.5，0.10mpa灭菌20min，倒入试管中倾斜放置得斜面mrs培养基；上述原料不加琼脂时得液体mrs培养基。
（3）菌种活化将as2.112酿酒酵母（saccharomycescerevisiae）接到斜面ypd培养基中，在30℃培养72h，备用。将cgmccno.10921植物乳杆菌grx16(lactobacillusplantarumgrx16)接到斜面mrs培养基中，36℃、厌氧培养72h，备用。
（4）制备液体菌种250ml三角瓶中装入液体ypd培养基100ml，0.10mpa灭菌20min，冷却后接入（3）活化的as2.112酿酒酵母斜面菌种，30℃恒温、160r／min振荡培养2d。250ml三角瓶中装入液体mrs培养基150ml，0.10mpa灭菌20min，冷却后接入（3）活化的cgmccno.10921斜面菌种，38℃、厌氧160r／min振荡培养3d。
（5）制备生产发酵剂培养基称取玉米粉0.5公斤倒入不锈钢容器中，加2.5公斤净水，加热到90℃糊化10min，降温至80℃时，用6%的盐酸调节ph至6.2，再加入10g的中高温淀粉酶液化2h，再降温至60℃时用6%的盐酸调节ph至4.3，再加入1g的糖化酶糖化4h，然后在100℃下灭酶10min，冷却制得玉米粉糖化液2.8公斤，接种前加入2.8公斤凉开水，得5.6公斤发酵剂培养基。
（6）制备生产发酵剂称取2公斤（5）制备的生产发酵剂培养基，接入（4）制备的酿酒酵母液体菌种100ml，30℃恒温、160r／min振荡培养24h，使酿酒酵母细胞数量达到1.5×108个/ml。称取3公斤（5）制备的发酵剂培养基，接入（4）制备的cgmccno.10921液体菌种150ml，38℃厌氧培养48h，使植物乳杆菌grx16细胞数量达到1.8×108个/ml。
（7）制备复合菌种生产发酵剂将（6）制备的所有as2.112酿酒酵母和植物乳杆菌grx16发酵剂混合，得到5公斤复合菌种生产发酵剂。
（8）固体发酵称取33公斤亚麻饼、5公斤复合菌种生产发酵剂、13.5公斤净水、33g硫酸铵、132g磷酸二氢钾、49.5g氯化钠、66g硫酸镁，混合均匀后升温到30℃发酵36h后，继续升温到38℃厌氧培养36h。
（9）高压处理将步骤（8）生产的固体发酵产物放入高压灭菌容器中，0.15mpa处理10min后烘干，得成品33.1公斤。
经检测，采用实施例1生产的脱毒亚麻饼粗蛋白含量31.8%，较原料中蛋白含量提高了1.9个百分点；生氰糖苷含量没有检出；气味、口感好，没有异味。
本发明复合菌种的互作增效及高压处理脱毒效果试验
1、试验方法
以as2.112酿酒酵母和cgmccno.10921植物乳杆菌grx16的菌种按实施例1的方法单独进行脱毒处理作为对照，以实施例1的结果作为处理，比较生产成品中生氰糖苷的含量。
2、试验结果
试验结果见表1。
从表1可见，即使选筛选出的菌种，采用单一菌种处理时脱毒效果在30%-45%之间，远远达不到食品安全要求。对上述两种菌课题采用合理的比例复合后脱毒效果达到86.4%，虽然脱毒率提高不少，但仍然不达食品安全标准。因此在最后环节采用了短时间的高压处理手段，才彻底脱除了亚麻饼中残留的生氰糖苷。