1.一种用于制备β-丙氨酸的固定化酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)使用含有天冬氨酸酶变体基因的菌株进行发酵;
(2)将下罐发酵液浓缩至od550150~350;
(3)将浓缩后的发酵液进行细胞破碎;
(4)向细胞破碎液中加入0.5~1.5g高分子化合物载体,置于20~75℃的恒温摇床上,振荡2~8h;
(5)将振荡后的混合液过滤,收集载有酶的高分子化合物,即为固定化酶;
(6)向固定化酶中加入1倍体积的缓冲液,搅拌均匀,过滤除杂,收集固定化酶,重复上述步骤1~2次。
2.如权利要求1所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中下罐发酵液浓缩可采用离心浓缩或微滤浓缩。
3.如权利要求1所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中细胞破碎方式可为超声破碎、高压匀浆破碎、研磨破碎中的至少一种。
4.如权利要求3所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述高压匀浆破碎的具体条件为:压力600~1000bar,温度0~30℃,破碎次数1~5次。
5.如权利要求1所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中所述高分子化合物载体为氨基树脂或环氧基树脂中的至少一种,其粒径为300~1000微米。
6.如权利要求1所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中混合液过滤可采用20~100目的滤网。
7.如权利要求1所述的固定化酶的制备方法,其特征在于,所述步骤(6)中缓冲液为磷酸盐缓冲液或tris缓冲液的至少一种,其浓度为0.2~2mol/l。
8.一种利用固定化酶制备β-丙氨酸的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)向固定化酶中加入1倍体积的缓冲液,搅拌均匀后加入填充柱中;
(2)转化:将步骤(1)中含有固定化酶的填充柱ph值调至8.0~11.0,然后将丙烯酸和氨水混合后的溶液作为底物加入到填充柱中,控制底物经过填充柱的时间为0.5~5h,流速2~20ml/min,反应温度为40~70℃;所述丙烯酸浓度为500~5600mm,用氨水调节其ph值至8.0~11.0;
(3)水按一定流速加入到填充柱中,进行洗脱,收集液体样品;其中,水的流速与底物经过填充柱的流速保持一致;
(4)对步骤(3)中所得转化液进行减压脱氨,控制蒸发器的真空度-0.07至-0.10mpa,温度为50℃~60℃,操作时间30~60分钟;
(5)脱色:向步骤(4)所得液体中加入活性炭,每升转化液中活性炭的加入量为0.5~2.0g,脱色温度控制在40~75℃,脱色时间20~180分钟,抽滤得到脱色清液;
(6)蒸发浓缩:将步骤(5)中所得的脱色清液蒸发浓缩至β-丙氨酸质量浓度达到70%~95%,得到浓缩精浆;
(7)脱水、干燥:将步骤(6)中得到的浓缩精浆进行脱水、干燥,得到的结晶即为β丙氨酸。
9.如权利要求8所述的利用固定化酶制备β-丙氨酸的方法,其特征在于,所述步骤(2)中调节含有固定化酶填充柱ph值所用的碱液可为ph9.0~11.0的缓冲液或ph9.0~11.0的氨水,其中优选ph9.0~11.0的氨水。
10.如权利要求8所述的利用固定化酶制备β-丙氨酸的方法,其特征在于,所述步骤(7)中浓缩精浆脱水的方法可采用离心和真空抽滤中的至少一种。