本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种滑子菇蛋白的提取方法及其应用。
背景技术：
滑子菇是一种冬、春季发生的菌盖粘滑的木腐菌，为主要人工栽培食用菌之一。滑子菇属球盖菇科(strophariaceae)鳞伞属，学名pholiotanamekoitoeximai.，又名光帽鳞伞，光帽黄伞。每100g干菇含粗蛋白质21.8g、脂肪4.25g、碳水化合物64.8g、纤维素7.35g。在自然界多生长于壳斗科等阔叶树的倒木或树桩上，松木或未完全死亡的阔叶树杆上也能生长。
近年来，国内外学者对滑子菇的营养成分及其功能进行了大量研究，在其菌丝体、子实体中分离到多种活性物质，具有免疫调节、降血糖、抗肿瘤、抗氧化等功能。但是，有关研究主要集中在多糖以及生物碱、萜类、黄酮类等小分子次生代谢产物上，对滑子菇蛋白的研究较少。因此，提供一种滑子菇蛋白的提取方法及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种滑子菇蛋白的提取方法及其应用，提取得到的滑子菇蛋白具有抗氧化活性。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种滑子菇蛋白的提取方法，具体步骤如下：
(1)将滑子菇子实体烘干、粉碎，过40-80目筛，获得滑子菇子实体粉；
(2)将步骤(1)获得的滑子菇子实体粉与pbs缓冲液按照1：25-1：35的比例混合，超声提取，获得滑子菇子实体浸提液；
(3)对步骤(2)获得的滑子菇子实体浸提液进行超滤，获得粗蛋白提取液；
(4)向步骤(3)获得的粗蛋白提取液中加入饱和硫酸铵溶液至浓度为65-70％，静置，离心，收集沉淀，获得粗蛋白提取物；
(5)将步骤(4)得到的粗蛋白提取物用磷酸钠缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，-20～-40℃冷冻干燥，获得滑子菇蛋白。
进一步，步骤(2)所述超声频率为15-20khz，功率为200-300w，超声3-5min，期间超声3s，间隔5s。
进一步，步骤(3)所述超滤的ph为6.5-6.8，压力为0.2-0.3mpa，膜分子量为30-50kda，时间为20-30min。
进一步，步骤(5)所述磷酸钠缓冲液的浓度为0.01-0.014mol/l，ph为7.0-7.5。
进一步，上述制备得到的滑子菇蛋白在制备抗氧化药物中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种滑子菇蛋白的提取方法及其应用，工艺简单，成本低，适用于工业化生产；生产过程无污染，产品安全性好，具有抗氧化作用，可应用于食品、保健品和药品。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种滑子菇蛋白的提取方法，具体步骤如下：
(1)将滑子菇子实体烘干、粉碎，过60目筛，获得滑子菇子实体粉；
(2)将步骤(1)获得的滑子菇子实体粉与pbs缓冲液按照1：30的比例混合，超声提取，获得滑子菇子实体浸提液；超声频率为15khz，功率为300w，超声4min，期间超声3s，间隔5s；
(3)对步骤(2)获得的滑子菇子实体浸提液进行超滤，获得粗蛋白提取液；超滤的ph为6.5-6.8，压力为0.2mpa，膜分子量为30-50kda，时间为30min；
(4)向步骤(3)获得的粗蛋白提取液中加入饱和硫酸铵溶液至浓度为65％，静置，离心，收集沉淀，获得粗蛋白提取物；
(5)将步骤(4)得到的粗蛋白提取物用浓度为0.012mol/l，ph为7.0-7.5磷酸钠缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，-20℃冷冻干燥，获得滑子菇蛋白。
实施例2
一种滑子菇蛋白的提取方法，具体步骤如下：
(1)将滑子菇子实体烘干、粉碎，过40目筛，获得滑子菇子实体粉；
(2)将步骤(1)获得的滑子菇子实体粉与pbs缓冲液按照1：25的比例混合，超声提取，获得滑子菇子实体浸提液；超声频率为20khz，功率为200w，超声5min，期间超声3s，间隔5s；
(3)对步骤(2)获得的滑子菇子实体浸提液进行超滤，获得粗蛋白提取液；超滤的ph为6.5-6.8，压力为0.3mpa，膜分子量为30-50kda，时间为20min；
(4)向步骤(3)获得的粗蛋白提取液中加入饱和硫酸铵溶液至浓度为70％，静置，离心，收集沉淀，获得粗蛋白提取物；
(5)将步骤(4)得到的粗蛋白提取物用浓度为0.01mol/l，ph为7.0-7.5磷酸钠缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，-30℃冷冻干燥，获得滑子菇蛋白。
实施例3
一种滑子菇蛋白的提取方法，具体步骤如下：
(1)将滑子菇子实体烘干、粉碎，过80目筛，获得滑子菇子实体粉；
(2)将步骤(1)获得的滑子菇子实体粉与pbs缓冲液按照1：35的比例混合，超声提取，获得滑子菇子实体浸提液；超声频率为20khz，功率为300w，超声5min，期间超声3s，间隔5s；
(3)对步骤(2)获得的滑子菇子实体浸提液进行超滤，获得粗蛋白提取液；超滤的ph为6.5-6.8，压力为0.25mpa，膜分子量为30-50kda，时间为5min；
(4)向步骤(3)获得的粗蛋白提取液中加入饱和硫酸铵溶液至浓度为70％，静置，离心，收集沉淀，获得粗蛋白提取物；
(5)将步骤(4)得到的粗蛋白提取物用浓度为0.014mol/l，ph为7.0-7.5磷酸钠缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，-40℃冷冻干燥，获得滑子菇蛋白。
对比例
一种滑子菇蛋白的提取方法，具体步骤如下：
(1)将滑子菇子实体烘干、粉碎，过80目筛，获得滑子菇子实体粉；
(2)将步骤(1)获得的滑子菇子实体粉与pbs缓冲液按照1：35的比例混合，超声提取，获得滑子菇子实体浸提液；超声频率为20khz，功率为300w，超声5min，期间超声3s，间隔5s；
(3)向步骤(2)获得的滑子菇子实体浸提液中加入饱和硫酸铵溶液至浓度为70％，静置，离心，收集沉淀，获得粗蛋白提取物；
(4)将步骤(3)得到的粗蛋白提取物用浓度为0.014mol/l，ph为7.0-7.5磷酸钠缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，-40℃冷冻干燥，获得滑子菇蛋白。
检测实施例1-3和对比例制备得到的滑子菇蛋白的抗氧化活性。
(1)dpph自由基清除活性：1ml浓度为50μmol/l的dpph溶液含有不同浓度的待测样品，混匀，25℃反应90min，517nm波长处测定吸光值。以不含待测样品为空白对照，丁化羟基苯甲醚(bha)为正对照。清除率的计算公式为：清除率(％)＝(a0-a)/a0×100％，其中a0为空白对照的吸光值，a为待测样品的吸光值。结果见表1。
表1滑子菇蛋白的dpph自由基清除活性
由表1结果可知，在100-500μmol/l的浓度范围内，滑子菇蛋白清除dpph自由基的活性随着浓度的增加而增加；且滑子菇蛋白清除dpph自由基的活性高于bha。
(2)羟基自由基清除活性：3ml浓度为0:.15mmol/l的pbs缓冲液(ph7.4)含有100mmol/lvc，100μmol/lcuso4，10μmol/l细胞色素c和不同浓度的待测样品，混匀，25℃反应90min，550nm波长处测定透光值。以不含待测样品为空白对照，丁化羟基苯甲醚(bha)为正对照。清除率的计算公式为：清除率(％)＝(t0-t)/t0×100％，其中t0为空白对照的透光值，t为待测样品的透光值。结果见表2。
表2滑子菇蛋白的羟基自由基清除活性
由表2结果可知，在100-500μmol/l的浓度范围内，滑子菇蛋白清除羟基自由基的活性随着浓度的增加而增加；且滑子菇蛋白清除羟基自由基的活性高于bha。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。