在螯合剂存在下具有可增强稳定性的突变的α-淀粉酶的制作方法

文档序号:26003654发布日期:2021-07-23 21:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种亲本家族13α-淀粉酶的重组变体,其中所述变体(i)在不是钙或钠离子配体的氨基酸残基的侧链中具有突变,(ii)其中所述突变能够改变围绕ca2+-na+-ca2+位点的主链环的构象自由度、氢键结合相互作用、pi叠加相互作用或范德华相互作用,和(iii)其中与缺乏所述突变的亲本家族13α-淀粉酶相比,所述变体在预定量的螯合剂的存在下具有增加的稳定性。

2.如权利要求1所述的变体,其中所述突变位于如下氨基酸位置,所述氨基酸位置选自由以下组成的组:

(i)e190、v206、h210、s244和f245,使用seqidno:1进行编号,或

(ii)e187、i203、h207、s241、和f242,使用seqidno:2进行编号。

3.如权利要求2所述的变体,其中所述突变是如下取代,所述取代选自由以下组成的组:

(i)e190p、v206t、v206y、h210q、s244c、s244d、s244h、s244n、s244e、s244f、s244v、s244l、s244q和f245e,使用seqidno:1进行编号,或

(ii)e187p、i203t、i203y、h207q、s241c、s241d、s241h、s241n、s241e、s241f、s241v、s241l、s241q和f242e,使用seqidno:2进行编号。

4.如权利要求1-3中任一项所述的变体,所述变体进一步包含:

(i)在对应于seqidno:1的氨基酸序列中的位置181、182、183和/或184的一个或多个残基处的缺失或取代;

(ii)对应于seqidno:1的氨基酸序列的残基181和182或183和184的缺失;

(iii)对应于seqidno:2的氨基酸序列的残基178和179或180和181的缺失;

(iv)先前在家族13α-淀粉酶中描述的任何单个、多个或组合突变;和/或

(v)n-末端和/或c-末端截短。

5.如权利要求1-4中任一项所述的变体,其中所述变体与seqidno:1和/或seqidno:2的氨基酸序列具有至少60%、70%、80%或90%的氨基酸序列同一性。

6.一种洗涤剂组合物,所述洗涤剂组合物包含如权利要求1-5中任一项所述的变体淀粉酶,所述洗涤剂组合物进一步包含螯合剂。

7.一种用于液化淀粉的组合物,所述组合物包含如权利要求1-5中任一项所述的变体,所述组合物进一步包含螯合剂。

8.一种用于纺织品脱浆的组合物,所述组合物包含如权利要求1-5中任一项所述的变体,所述组合物进一步包含螯合剂。

9.一种用于酿造或烘焙的组合物,所述组合物包含如权利要求1-5中任一项所述的变体,所述组合物进一步包含螯合剂。

10.一种在螯合剂存在下增强家族13α-淀粉酶的稳定性的方法,所述方法包括(i)在不是钙或钠离子配体的氨基酸残基的侧链中向亲本家族13α-淀粉酶引入突变,(ii)其中所述突变能够改变围绕ca2+-na+-ca2+位点的主链环的构象自由度、氢键结合相互作用、pi叠加相互作用或范德华相互作用,和(iii)其中与缺乏所述突变的亲本家族13α-淀粉酶相比,所述变体在预定量的螯合剂的存在下具有增加的稳定性。

11.如权利要求10所述的方法,其中所述突变位于如下氨基酸位置,所述氨基酸位置选自由以下组成的组:

(i)e190、v206、h210、s244和f245,使用seqidno:1进行编号,或

(ii)e187、i203、h207、s241、和f242,使用seqidno:2进行编号。

12.如权利要求11所述的方法,其中所述突变是如下取代,所述取代选自由以下组成的组:

(i)e190p、v206t、v206y、h210q、s244c、s244d、s244h、s244n、s244e、s244f、s244v、s244l、s244q和f245e,使用seqidno:1进行编号,或

(ii)e187p、i203t、i203y、h207q、s241c、s241d、s241h、s241n、s241e、s241f、s241v、s241l、s241q和f242e,使用seqidno:2进行编号。

13.如权利要求10-12中任一项所述的方法,其中所述变体进一步包含:

(i)在对应于seqidno:1的氨基酸序列中的位置181、182、183和/或184的一个或多个残基处的缺失或取代;

(ii)对应于seqidno:1的氨基酸序列的残基181和182或183和184的缺失;

(iii)对应于seqidno:2的氨基酸序列的残基178和179或180和181的缺失;

(iv)先前在家族13α-淀粉酶中描述的任何单个、多个或组合突变;和/或

(v)n-末端和/或c-末端截短。

14.如权利要求10-13中任一项所述的方法,其中所述变体与seqidno:1和/或seqidno:2的氨基酸序列具有至少60%、70%、80%或90%的氨基酸序列同一性。

15.一种用于将淀粉转化为寡糖的方法,所述方法包括使淀粉与有效量的如权利要求1-5中任一项所述的变体α-淀粉酶接触。

16.一种用于从表面除去淀粉污渍或污垢的方法,所述方法包括使所述表面与有效量的如权利要求1-5中任一项所述的变体α-淀粉酶或权利要求7所述的组合物接触,并且允许所述多肽水解存在于所述淀粉污渍中的淀粉组分以产生溶解于水性组合物中的较小的衍生自淀粉的分子,从而从所述表面除去所述淀粉污渍。


技术总结
本发明披露了在螯合剂存在下具有增强酶稳定性的突变的变体α‑淀粉酶、设计此类变体的方法和由此产生的变体的使用方法。所述变体α‑淀粉酶对在包括大量螯合剂的清洁和脱浆组合物中使用是特别有用的。

技术研发人员:J·拉西拉
受保护的技术使用者:丹尼斯科美国公司
技术研发日:2019.10.14
技术公布日:2021.07.23
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