一种检测MLL-AF4融合基因的方法与流程

文档序号:21789775发布日期:2020-08-07 20:43阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:按照先后顺序依次包括以下步骤:

步骤一:样本dna的获取:通过提取核酸的试剂对样本进行处理,获得待测样本的dna;

步骤二:pcr反应液的配置:分为阳性对照、样本和阴性对照三管,每个管中的反应体系均为20μl,且用于扩增mll-af4融合基因的引物为:

f:5’-ccgcccaagtatccctgtaaaac-3’;

r:3’-tcgttatgtatgcggatcatgtcg-5’;

步骤三:目的条带扩增:以待测样本的dna为模板,通过设计的引物扩增需要的dna片段;

步骤四:目的dna回收:对上述pcr反应液进行1%琼脂糖凝胶电泳,回收目的条带;

步骤五:对上述步骤中dna片段进行纯化处理;

步骤六:对纯化后的dna进行转化;

步骤七:测序,判断是否为mll-af4融合基因。

2.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述步骤二中引物序列的浓度为700-800nm。

3.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述步骤三中将配好的试剂通过pcr仪中来扩增目的条带,其中pcr仪反应参数为:94℃,3min;进入循环程序,94℃,3s;55℃,45s;72℃,30s,循环次数为30次;72℃,10min。

4.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述步骤一中样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液。

5.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述阳性对照管中样本dna为mll-af4融合基因溶液,且浓度为500拷贝/μl。

6.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述阴性对照管中样本dna为ddh2o。

7.根据权利要求1所述的一种检测mll-af4融合基因的方法,其特征在于:所述步骤二中pcr反应液组成及成分为dna聚合酶(2×taqmix)14-17μl、引物序列f1μl、引物序列r1μl、样本dna1μl、加入ddh2o补至20μl。


技术总结
本发明公开了一种检测MLL‑AF4融合基因的方法,按照先后顺序依次包括以下步骤:步骤一:样本DNA的获取;步骤二:PCR反应液的配置,用于扩增MLL‑AF4融合基因的引物为:F:5’‑CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC‑3’;R:3’‑TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG‑5’;步骤三:目的条带扩增:以待测样本的DNA为模板,通过设计的引物扩增需要的DNA片段;步骤四:目的DNA回收:对上述PCR反应液进行1%琼脂糖凝胶电泳,回收目的条带;步骤五:对上述步骤中DNA片段进行纯化处理;步骤六:对纯化后的DNA进行转化;步骤七:测序,判断是否为MLL‑AF4融合基因。该检测MLL‑AF4融合基因的方法设计了适用于PCR扩增的引物,在检测的过程中具有很高的特异性、准确定和灵敏度,且更加快速和高效的扩增出目的条带,且具有可重复性。

技术研发人员:张鹏;唐春花;邢宽;何志健;谢珍;倪海钰;周权;何贵伦;安雪茹;李平;江晓琴
受保护的技术使用者:南京实践医学检验有限公司
技术研发日:2020.05.06
技术公布日:2020.08.07
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