技术特征：
1.一种用于无细胞体外制造具有多价螯合末端的单链核酸构建体的核酸模板，所述核酸模板包括从5'到3'的编码以下元件的序列：i)第一加工基序，所述第一加工基序与第一构象基序相邻；ii)所述第一构象基序；iii)所关注序列；iv)第二构象基序，所述第二构象基序与第二加工基序相邻；v)所述第二加工基序，其中加工基序包含能够形成碱基配对部分的序列，所述碱基配对部分包含核酸内切酶的识别位点和相关切割位点，并且其中所述构象基序包含能够形成分子内氢键的至少一个序列。2.根据权利要求1所述的核酸模板，其中加工基序内的所述切割位点与构象基序相邻。3.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中加工基序内的所述核酸内切酶的所述切割位点位于所述碱基配对部分的末端碱基对处。4.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中构象基序包含能够形成分子内氢键的序列，所述分子内氢键用于固定所述单链核酸构建体的末端处的末端核苷酸。5.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中所述单链核酸构建体包含以下中的任何一种或多种：i)适配体；ii)核酸酶；iii)用于基因编辑的向导序列。6.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中所述分子内氢键在所述构象基序的序列中的核苷酸碱基之间形成，并且任选地允许所述构象基序呈现构象。7.根据权利要求6所述的核酸模板，其中所述核苷酸碱基之间的所述分子内氢键涉及沃森
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克里克碱基对(watson
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crick base pair)、胡斯坦碱基对(hoogsteen base
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pair)或非规范碱基配对。8.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中构象基序可以是能够呈现以下构象中的一种或者两种或更多种的组合的序列：i)四链体；ii)发夹；iii)十字形；iv)茎环；和/或v)假结。9.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中所述多价螯合末端涉及所述末端核苷酸的分子内碱基配对。10.根据前述权利要求中任一项所述的核酸模板，其中所述多价螯合末端涉及在具有双链d区的itr结构中包含所述末端核苷酸。11.一种制造具有多价螯合末端的单链核酸分子的方法，所述方法包括：(a)使用能够进行滚环扩增的聚合酶扩增环状模板，其中所述模板包括编码以下元件的序列：
i)第一加工基序，所述第一加工基序与第一构象基序相邻；ii)所述第一构象基序；iii)所关注序列；iv)第二构象基序，所述第二构象基序与第二加工基序相邻；v)所述第二加工基序，其中加工基序包含能够形成碱基配对部分的序列，所述碱基配对部分包含含有切割位点的核酸内切酶的识别位点，并且其中所述构象基序包含能够形成分子内氢键的至少一个序列，所述扩增产生核酸多联体，以及(b)使用识别所述加工基序中的一个或多个加工基序中的所述切割位点的一种或多种核酸内切酶加工所述核酸多联体。12.根据权利要求11所述的制造具有多价螯合末端的单链核酸分子的方法，其中所述模板是如根据权利要求1到10中任一项所述的模板。13.一种具有序列单元的两个或更多个重复序列的单链核酸多联体，所述序列单元包括以下元件：i)第一加工基序，所述第一加工基序与第一构象基序相邻；ii)所述第一构象基序；iii)所关注序列；iv)第二构象基序，所述第二构象基序与第二加工基序相邻；v)所述第二加工基序，其中加工基序包含能够形成碱基配对部分的序列，所述碱基配对部分包含核酸内切酶的识别位点和相关切割位点，并且其中所述构象基序包含能够形成分子内氢键的至少一个序列。14.一种具有多价螯合末端的单链线性核酸分子，其中至少一个多价螯合末端形成g四链体。15.一种具有多价螯合末端的单链线性核酸分子，其中至少一个多价螯合末端形成具有双链d部分的itr结构。
技术总结
本发明涉及可以用于许多应用中的新型人工合成的单链核酸分子以及用于制备所述单链核酸分子的模板和方法。单链核酸分子有许多用途，包含但不限于用于递送序列(例如，基因序列，或用于基因编辑、基因敲入或敲低的模板)的载体或用于生物工程中，例如用于从纳米颗粒结构单元构建高度有序的材料。构单元构建高度有序的材料。构单元构建高度有序的材料。
技术研发人员：T
受保护的技术使用者：莱特比奥有限公司
技术研发日：2020.04.23
技术公布日：2021/12/30