一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法及应用与流程

1.本发明涉及开菲尔发酵剂技术领域，具体为一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法及应用。


背景技术：

2.开菲尔是以牛乳、羊乳或山羊乳为原料，添加含有乳酸菌和酵母菌的开菲尔粒发酵剂，经发酵酿制而成的一种传统酒精发酵乳饮料，是一种具有轻微的起泡性和含低度酒精的发酵乳饮料，适合大多数人群饮用。传统的开菲尔，是以牛奶或羊奶为原料，由开菲尔粒或开菲尔粒中必需菌相作发酵剂，制得的一种带有酒味的发酵乳，又称牛奶酒或酸乳酒，有“发酵乳制品中的香槟”之称。开菲尔粒上主要栖息着乳酸菌、酵母菌和醋酸菌等微生物，菌相极为复杂，不同地区和来源的开菲尔粒中所含菌相有一定差异。由于开菲尔粒中多种有益微生物的代谢作用，使得开菲尔酸奶含有比普通酸奶更为丰富的微生物及其代谢产物。但现有开菲尔发酵剂的制备基本上需要使用原有开菲尔粒才能继续扩大培养，在不使用原粒的情况下无法生产新粒，因此产业化难以发酵出和粒子产物一致的功能性饮料。


技术实现要素：

3.(一)解决的技术问题
4.针对现有技术的不足，本发明提供了一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法及应用，用于解决现有开菲尔发酵剂的制备基本上需要使用原有开菲尔粒才能继续扩大培养，在不使用原粒的情况下无法生产新粒，因此产业化难以发酵出和粒子产物一致的功能性饮料的问题。
5.(二)技术方案
6.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法及应用，该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂包括如下等重量份的菌种：布拉迪酵母菌、丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、嗜热链球菌、开菲尔乳杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母和东方醋酸菌；
7.该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法包括如下步骤：
8.步骤s1：将无菌水、培养基a、培养基b、培养基c分别加入4个洗净烘干的三角瓶中，加量到三角瓶的瓶身三分之二，使用三角瓶封口膜封口，放入高压灭菌锅，设置温度115℃，灭菌30～35min，灭菌结束后取出置于4℃冰箱保存待用；
9.步骤s2：将培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d用高压灭菌袋包好，放入高压蒸汽灭菌锅中，设置温度121℃，灭菌20～30min，灭菌结束后取出装有培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d的高压灭菌袋，置于鼓风干燥箱，于70～80℃烘干5～10min，然后使用质量分数为75％的酒精喷洒高压灭菌袋表面，转移至无菌室的无菌操作台，在进入无菌操作台之前再喷洒一次质量分数为75％的酒精，同时将步骤s1置于冰箱保存待用三角瓶取出，瓶身使用质量分数为75％的酒精喷洒灭菌，然后转移至上述无菌操作台；
10.步骤s3：在无菌操作台中打开培养罐a的罐盖，将布拉迪酵母菌、毕赤酵母、酿酒酵母与培养基a加入培养罐a中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐b的罐盖，将丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜热链球菌与培养基b加入培养罐b中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐c的罐盖，将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、开菲尔乳杆菌、东方醋酸菌与培养基c加入培养罐c中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐d的罐盖，将无菌水加入培养罐d中，待用；控制操作后的培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d的质量比为1：1：1：1；
11.步骤s4：打开活化培养设备的紫外灯一与紫外灯二，进行紫外杀菌处理30～45min，关闭紫外灯一与紫外灯二，打开箱门一，将培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d分别加入活化培养设备的四个放罐筒中，关闭箱门一设置温控器一为温度30～37℃，设置转动电机转速为100～180r/min，发酵2～3d，期间换气扇工作进行换气，然后将气缸降下，使离心盘落入离心组件的内部，然后齿轮转动，带动盖板滑动，闭合离心组件，然后启动转动电机，设置转速2000～2500r/min，设置温控器二温度为0～5℃，离心10～15min，然后打开箱门二，齿轮反向转动，打开盖板，然后取出培养罐a、培养罐b、培养罐c，在无菌操作台中将培养罐a、培养罐b、培养罐c中的浓缩菌液取出混合，得到各活化菌株；
12.步骤s5：将原培养罐a、培养罐b、培养罐c中得到的各活化菌株分别加入放有灭菌的培养基a、培养基b、培养基c的发酵罐，均加入细胞保护剂，分别在温度30℃、40℃、37℃条件下放大培养3
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5d，培养结束后取出置于冷冻干燥箱于温度
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50～
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40℃冻干24～36h，然后按等细胞数目混合，即得到一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂，所述培养基a、培养基b、培养基c的体积用量为发酵罐体积的五分之三。
13.进一步地，所述培养基a由如下步骤制成：
14.将土豆去皮切块，置于铁锅中，加入去离子水煮沸，保持20～30min，结束后冷却至室温，使用纱布过滤，补充去离子水，控制最终土豆与去离子水的用量比为2g：10ml；然后加入无水葡萄糖，控制无水葡萄糖与去离子水的用量比为20g：1l；无水葡萄糖完全融化后，加入增殖因子a，即得到培养基a；
15.所述增殖因子a为0.1～0.3mg/ml锌离子、0.04～0.06mg/ml的生物素以及0.05～0.06mg/ml的肌醇混合而得，所述增殖因子a的用量为去离子水体积的1％～3％。
16.进一步地，所述培养基b由如下步骤制成：
17.在烧杯中加入去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠，在温度40～45℃，转速200～600r/min条件下搅拌至胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠完全溶解，然后调节ph至7.0～7.1，加入增殖因子b，即得到培养基b。
18.所述去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠以及增殖因子b的用量比为1l：10g：5g：5g：10～20ml，所述增殖因子b为0.1～0.3mg/ml镁离子、质量分数为10％～20％葡萄糖混合而得。
19.进一步地，所述培养基c由如下步骤制成：
20.在烧杯中加入质量分数为10～15％的脱脂牛奶，加入蛋白水解酶与增殖因子，转速50～150r/min搅拌5～10min，搅拌结束后调节ph至6.5，即得到培养基c；
21.所述蛋白水解酶、脱脂牛奶、增殖因子c的用量比为1000u：1l：10～20ml，所述增殖因子c为0.3～0.5g/l的麦芽汁、0.1g～0.3g/l的酵母粉以及1～5g/l的番茄汁混合而得。
22.进一步地，步骤s3所述培养罐a的罐盖可通气，培养罐b和培养罐c的罐盖为密封设
置。
23.进一步地，所述步骤s4所述活化培养设备包括机箱和底座；
24.所述底座固定设置于机箱底部的四个顶角的位置，所述机箱的正面设有箱门一与箱门二，所述机箱包括培养室与离心室，所述培养室位于离心室的上方，所述培养室与离心室之间设有隔板，且隔板内部开设有孔洞；
25.所述培养室内壁的顶部固定安装有紫外灯一，所述培养室的侧壁设有换气口，所述换气口贯穿培养室的侧壁与培养室的内部连通，所述培养室的内部位于换气口一侧的位置设有换气扇，所述换气扇的中心设有转轴，所述转轴的两端分别与培养室正面的内部和背面的内部转动连接，所述换气扇设有电机，所述培养室内壁的底部位于换气扇下方的位置固定连接有温控器一；
26.进一步地，所述离心室的内部设有离心组件与紫外灯二，所述离心组件包括外壳、内壳、离心盘、气缸、转动轴、稳定座、转动电机、固定柱、温控器二以及盖板，所述外壳位于离心室的内部，所述外壳的底部与离心室内壁的底部固定连接，所述内壳固定连接于外壳的内部，所述气缸位于内壳的内部，所述气缸的底部与稳定座的顶部固定连接，所述气缸的顶部与离心盘的底部中心位置固定连接，所述稳定座的底部与转动轴的顶部固定连接，所述转动轴的底部与转动电机的输出轴通过联轴器固定连接，所述转动电机位于电机框的内部，所述电机框与内壳的底部固定连接，所述固定柱位于内壳的下方，所述固定柱的顶部与内壳的底部固定连接，所述固定柱的底部与外壳内壁的底部固定连接，所述固定柱的内部设有减震弹簧，所述温控器二安装于内壳的底部；
27.所述离心盘包括十字支架、连接件以及放罐筒，所述连接件的上端通过转轴与十字支架的一端转动连接，四个所述放罐筒分别位于十字支架的四个端点下方，且放罐筒顶部与连接件的底部固定连接；
28.所述盖板位于外壳的顶部，所述盖板内部设有滑动板，所述滑动板的底部设有齿牙，所述内壳的内部设有与齿牙相适配的齿轮；
29.所述紫外灯二固定连接于离心室的侧壁。
30.一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂在液体制品和功能性固体饮料制备中的应用。
31.进一步地，所述液体制品由如下步骤制成：将制得的含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂发酵前6h从开始发酵按每隔2h分别接种质量分数为1％、2％、4％、6％的比例接种至灭菌后的鲜牛奶中，同时添加质量分数为2％的白砂糖，在35℃，180r/min条件下连续发酵12h，即得到该液体制品。
32.进一步地，所述功能性固体饮料由如下步骤制成：将等质量的草莓、柠檬、猕猴桃、橙子、石斛、西红柿去皮后使用榨汁机粉碎，进行灭菌处理后在无菌车间加入发酵罐中，然后接种质量分数为6％的含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂，在温度35℃，发酵3
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4d，发酵结束后进行冷冻干燥，冻干后在无菌车间进行粉碎、包装即得到功能性固体饮料。
33.(三)有益效果
34.本发明提供了一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法及应用。与现有技术相比具备以下有益效果：添加了布拉迪酵母菌为真核益生菌，其在起作用时不与抗生素产生不良反应，且可以与肠道黏膜进行信息交流，保护肠道的屏障功能，布拉迪酵母菌在
内腔可以发挥抗毒性作用，可以中和霍乱毒素、酸化大肠杆菌毒素等，还可以使艰难梭菌毒素a&b失活；同时它具有抗菌活性，在胃肠道中可有效改善致病菌的渗透压，或粘附在致病菌表面将其带出体外，可有效阻止致病菌对胃肠道的危害，而对大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌有抑制生长的作用；而且可参与代谢活动，产生重要的短链脂肪酸，其代谢产物可以增加酶活，增加多胺的分泌，增加乳糖酶、蔗糖酶等双糖酶的产量，增加肠道中免疫球蛋白a的分泌。还具有调节肠道菌群的作用，对乳酸杆菌、双歧杆菌有促进增殖的作用，将其添加作为发酵剂的菌种之一不仅具有良好改善肠道的效果，且可以促进其他益生菌在肠道中的增殖与发挥效用，且本发明在发酵过程中制备了一种活化培养设备，在培养之后可以快速的进行离心浓缩，减少了培养之后取出离心浓缩的步骤，减少了染菌的危害，使整个制备过程更加迅速安全，使生产的发酵剂纯度更高，效果更好。
附图说明
35.图1为本发明活化培养设备的主视图；
36.图2为本发明活化培养设备的剖视示意图；
37.图3为本发明图2中a处的放大示意图；
38.图4为本发明活化培养设备的离心组件的结构示意图；
39.图5为本发明活化培养设备的离心组件的俯视示意图。
40.图中，1、机箱；11、箱门一；12、箱门二；13、隔板；14、孔洞；2、底座；3、培养室；31、紫外灯一；32、换气口；33、换气扇；34、温控器一；4、离心室；41、离心组件；42、紫外灯二；43、外壳；44、内壳；45、离心盘；451、十字支架；452、连接件；453、放罐筒；46、气缸；47、转动轴；48、稳定座；49、转动电机；410、固定柱；411、温控器二；412、盖板；413、滑动板；414、齿牙；415、齿轮。
具体实施方式
41.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
42.实施例1
43.请参阅图1
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5所示，一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法，该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂包括如下等重量份的菌种：布拉迪酵母菌、丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、嗜热链球菌、开菲尔乳杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母和东方醋酸菌；
44.该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法包括如下步骤：
45.步骤s1：将无菌水、培养基a、培养基b、培养基c分别加入4个洗净烘干的三角瓶中，加量到三角瓶的瓶身三分之二，使用三角瓶封口膜封口，放入高压灭菌锅，设置温度115℃，灭菌30min，灭菌结束后取出置于4℃冰箱保存待用；
46.步骤s2：将培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d用高压灭菌袋包好，放入高压蒸汽灭菌锅中，设置温度121℃，灭菌20min，灭菌结束后取出装有培养罐a、培养罐b、培养罐c、培
养罐d的高压灭菌袋，置于鼓风干燥箱，于70℃烘干5min，然后使用质量分数为75％的酒精喷洒高压灭菌袋表面，转移至无菌室的无菌操作台，在进入无菌操作台之前再喷洒一次质量分数为75％的酒精，同时将步骤s1置于冰箱保存待用三角瓶取出，瓶身使用质量分数为75％的酒精喷洒灭菌，然后转移至上述无菌操作台；
47.步骤s3：在无菌操作台中打开培养罐a的罐盖，将布拉迪酵母菌、毕赤酵母、酿酒酵母与培养基a加入培养罐a中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐b的罐盖，将丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜热链球菌与培养基b加入培养罐b中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐c的罐盖，将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、开菲尔乳杆菌、东方醋酸菌与培养基c加入培养罐c中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐d的罐盖，将无菌水加入培养罐d中，待用；控制操作后的培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d的质量比为1：1：1：1；
48.步骤s4：打开活化培养设备的紫外灯一31与紫外灯二42，进行紫外杀菌处理30min，关闭紫外灯一31与紫外灯二42，打开箱门一11，将培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d分别加入活化培养设备的四个放罐筒453中，关闭箱门一11设置温控器一34为温度30℃，设置转动电机49转速为100r/min，发酵2d，期间换气扇33工作进行换气，然后将气缸46降下，使离心盘45落入离心组件41的内部，然后齿轮415转动，带动盖板412滑动，闭合离心组件41，然后启动转动电机49，设置转速2000r/min，设置温控器二411温度为0℃，离心10min，然后打开箱门二12，齿轮415反向转动，打开盖板412，然后取出培养罐a、培养罐b、培养罐c，在无菌操作台中将培养罐a、培养罐b、培养罐c中的浓缩菌液取出混合，得到各活化菌株；
49.步骤s5：将原培养罐a、培养罐b、培养罐c中得到的各活化菌株分别加入放有灭菌的培养基a、培养基b、培养基c的发酵罐，均加入细胞保护剂，分别在温度30℃、40℃、37℃条件下放大培养3d，培养结束后取出置于冷冻干燥箱于温度
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50℃冻干24h，然后按等细胞数目混合，即得到一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂，所述培养基a、培养基b、培养基c的体积用量为发酵罐体积的五分之三。
50.所述培养基a由如下步骤制成：
51.将土豆去皮切块，置于铁锅中，加入去离子水煮沸，保持20min，结束后冷却至室温，使用纱布过滤，补充去离子水，控制最终土豆与去离子水的用量比为2g：10ml；然后加入无水葡萄糖，控制无水葡萄糖与去离子水的用量比为20g：1l；无水葡萄糖完全融化后，加入增殖因子a，即得到培养基a；
52.所述增殖因子a为0.1mg/ml锌离子、0.04mg/ml的生物素以及0.05mg/ml的肌醇混合而得，所述增殖因子a的用量为去离子水体积的1％。
53.所述培养基b由如下步骤制成：
54.在烧杯中加入去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠，在温度40℃，转速200r/min条件下搅拌至胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠完全溶解，然后调节ph至7.0，加入增殖因子b，即得到培养基b；
55.所述去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠以及增殖因子b的用量比为1l：10g：5g：5g：10ml，所述增殖因子b为0.1mg/ml镁离子、质量分数为10％％葡萄糖混合而得。
56.所述培养基c由如下步骤制成：
57.在烧杯中加入质量分数为10％的脱脂牛奶，加入蛋白水解酶与增殖因子，转速
50r/min搅拌5min，搅拌结束后调节ph至6.5，即得到培养基c；
58.所述蛋白水解酶、脱脂牛奶、增殖因子c的用量比为1000u：1l：10ml，所述增殖因子c为0.3g/l的麦芽汁、0.1g/l的酵母粉以及1g/l的番茄汁混合而得。
59.实施例2
60.请参阅图1
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5所示，一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法，该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂包括如下等重量份的菌种：布拉迪酵母菌、丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、嗜热链球菌、开菲尔乳杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母和东方醋酸菌；
61.该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法包括如下步骤：
62.步骤s1：将无菌水、培养基a、培养基b、培养基c分别加入4个洗净烘干的三角瓶中，加量到三角瓶的瓶身三分之二，使用三角瓶封口膜封口，放入高压灭菌锅，设置温度115℃，灭菌32.5min，灭菌结束后取出置于4℃冰箱保存待用；
63.步骤s2：将培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d用高压灭菌袋包好，放入高压蒸汽灭菌锅中，设置温度121℃，灭菌25min，灭菌结束后取出装有培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d的高压灭菌袋，置于鼓风干燥箱，于75℃烘干7.5min，然后使用质量分数为75％的酒精喷洒高压灭菌袋表面，转移至无菌室的无菌操作台，在进入无菌操作台之前再喷洒一次质量分数为75％的酒精，同时将步骤s1置于冰箱保存待用三角瓶取出，瓶身使用质量分数为75％的酒精喷洒灭菌，然后转移至上述无菌操作台；
64.步骤s3：在无菌操作台中打开培养罐a的罐盖，将布拉迪酵母菌、毕赤酵母、酿酒酵母与培养基a加入培养罐a中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐b的罐盖，将丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜热链球菌与培养基b加入培养罐b中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐c的罐盖，将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、开菲尔乳杆菌、东方醋酸菌与培养基c加入培养罐c中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐d的罐盖，将无菌水加入培养罐d中，待用；控制操作后的培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d的质量比为1：1：1：1；
65.步骤s4：打开活化培养设备的紫外灯一31与紫外灯二42，进行紫外杀菌处理37.5min，关闭紫外灯一31与紫外灯二42，打开箱门一11，将培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d分别加入活化培养设备的四个放罐筒453中，关闭箱门一11设置温控器一34为温度33.5℃，设置转动电机49转速为140r/min，发酵2.5d，期间换气扇33工作进行换气，然后将气缸46降下，使离心盘45落入离心组件41的内部，然后齿轮415转动，带动盖板412滑动，闭合离心组件41，然后启动转动电机49，设置转速2225r/min，设置温控器二411温度2.5℃，离心12.5min，然后打开箱门二12，齿轮415反向转动，打开盖板412，然后取出培养罐a、培养罐b、培养罐c，在无菌操作台中将培养罐a、培养罐b、培养罐c中的浓缩菌液取出混合，得到各活化菌株；
66.步骤s5：将原培养罐a、培养罐b、培养罐c中得到的各活化菌株分别加入放有灭菌的培养基a、培养基b、培养基c的发酵罐，均加入细胞保护剂，分别在温度30℃、40℃、37℃条件下放大培养3
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5d，培养结束后取出置于冷冻干燥箱于温度
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45℃冻干30h，然后按等细胞数目混合，即得到一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂，所述培养基a、培养基b、培养基c的体积用量为发酵罐体积的五分之三。
67.所述培养基a由如下步骤制成：
68.将土豆去皮切块，置于铁锅中，加入去离子水煮沸，保持25min，结束后冷却至室温，使用纱布过滤，补充去离子水，控制最终土豆与去离子水的用量比为2g：10ml；然后加入无水葡萄糖，控制无水葡萄糖与去离子水的用量比为20g：1l；无水葡萄糖完全融化后，加入增殖因子a，即得到培养基a；
69.所述增殖因子a为0.2mg/ml锌离子、0.05mg/ml的生物素以及0.055mg/ml的肌醇混合而得，所述增殖因子a的用量为去离子水体积的2％。
70.所述培养基b由如下步骤制成：
71.在烧杯中加入去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠，在温度42.5℃，转速400r/min条件下搅拌至胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠完全溶解，然后调节ph至7.05，加入增殖因子b，即得到培养基b；
72.所述去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠以及增殖因子b的用量比为1l：10g：5g：5g：15ml，所述增殖因子b为0.2mg/ml镁离子、质量分数为15％葡萄糖混合而得。
73.所述培养基c由如下步骤制成：
74.在烧杯中加入质量分数为12.5％的脱脂牛奶，加入蛋白水解酶与增殖因子，转速100r/min搅拌7.5min，搅拌结束后调节ph至6.5，即得到培养基c；
75.所述蛋白水解酶、脱脂牛奶、增殖因子c的用量比为1000u：1l：15ml，所述增殖因子c为0.4g/l的麦芽汁、0.2g/l的酵母粉以及3g/l的番茄汁混合而得。
76.实施例3
77.请参阅图1
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5所示，一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法，该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂包括如下等重量份的菌种：布拉迪酵母菌、丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、嗜热链球菌、开菲尔乳杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母和东方醋酸菌；
78.该含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂的制备方法包括如下步骤：
79.步骤s1：将无菌水、培养基a、培养基b、培养基c分别加入4个洗净烘干的三角瓶中，加量到三角瓶的瓶身三分之二，使用三角瓶封口膜封口，放入高压灭菌锅，设置温度115℃，灭菌35min，灭菌结束后取出置于4℃冰箱保存待用；
80.步骤s2：将培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d用高压灭菌袋包好，放入高压蒸汽灭菌锅中，设置温度121℃，灭菌30min，灭菌结束后取出装有培养罐a、培养罐b、培养罐c、培养罐d的高压灭菌袋，置于鼓风干燥箱，于80℃烘干10min，然后使用质量分数为75％的酒精喷洒高压灭菌袋表面，转移至无菌室的无菌操作台，在进入无菌操作台之前再喷洒一次质量分数为75％的酒精，同时将步骤s1置于冰箱保存待用三角瓶取出，瓶身使用质量分数为75％的酒精喷洒灭菌，然后转移至上述无菌操作台；
81.步骤s3：在无菌操作台中打开培养罐a的罐盖，将布拉迪酵母菌、毕赤酵母、酿酒酵母与培养基a加入培养罐a中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐b的罐盖，将丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌、嗜热链球菌与培养基b加入培养罐b中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐c的罐盖，将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌、开菲尔乳杆菌、东方醋酸菌与培养基c加入培养罐c中，关闭罐盖摇匀待用；打开培养罐d的罐盖，将无菌水加入培养罐d中，待用；控制操作后的培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d的质量比为1：1：1：1；
82.步骤s4：打开活化培养设备的紫外灯一31与紫外灯二42，进行紫外杀菌处理
45min，关闭紫外灯一31与紫外灯二42，打开箱门一11，将培养罐a、培养罐b、培养罐c以及培养罐d分别加入活化培养设备的四个放罐筒453中，关闭箱门一11设置温控器一34为温度37℃，设置转动电机49转速为180r/min，发酵3d，期间换气扇33工作进行换气，然后将气缸46降下，使离心盘45落入离心组件41的内部，然后齿轮415转动，带动盖板412滑动，闭合离心组件41，然后启动转动电机49，设置转速2500r/min，设置温控器二411温度为5℃，离心15min，然后打开箱门二12，齿轮415反向转动，打开盖板412，然后取出培养罐a、培养罐b、培养罐c，在无菌操作台中将培养罐a、培养罐b、培养罐c中的浓缩菌液取出混合，得到各活化菌株；
83.步骤s5：将原培养罐a、培养罐b、培养罐c中得到的各活化菌株分别加入放有灭菌的培养基a、培养基b、培养基c的发酵罐，均加入细胞保护剂，分别在温度30℃、40℃、37℃条件下放大培养5d，培养结束后取出置于冷冻干燥箱于温度
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40℃冻干36h，然后按等细胞数目混合，即得到一种含有布拉迪酵母菌的开菲尔发酵剂，所述培养基a、培养基b、培养基c的体积用量为发酵罐体积的五分之三。
84.所述培养基a由如下步骤制成：
85.将土豆去皮切块，置于铁锅中，加入去离子水煮沸，保持30min，结束后冷却至室温，使用纱布过滤，补充去离子水，控制最终土豆与去离子水的用量比为2g：10ml；然后加入无水葡萄糖，控制无水葡萄糖与去离子水的用量比为20g：1l；无水葡萄糖完全融化后，加入增殖因子a，即得到培养基a；
86.所述增殖因子a为0.3mg/ml锌离子、0.06mg/ml的生物素以及0.06mg/ml的肌醇混合而得，所述增殖因子a的用量为去离子水体积的3％。
87.所述培养基b由如下步骤制成：
88.在烧杯中加入去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠，在温度45℃，转速600r/min条件下搅拌至胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠完全溶解，然后调节ph至7.1，加入增殖因子b，即得到培养基b；
89.所述去离子水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠以及增殖因子b的用量比为1l：10g：5g：5g：20ml，所述增殖因子b为0.3mg/ml镁离子、质量分数为20％葡萄糖混合而得。
90.所述培养基c由如下步骤制成：
91.在烧杯中加入质量分数为15％的脱脂牛奶，加入蛋白水解酶与增殖因子，转速150r/min搅拌10min，搅拌结束后调节ph至6.5，即得到培养基c；
92.所述蛋白水解酶、脱脂牛奶、增殖因子c的用量比为1000u：1l：20ml，所述增殖因子c为0.5g/l的麦芽汁、0.3g/l的酵母粉以及5g/l的番茄汁混合而得。
93.对比例：市面所售的普通发酵剂。
94.请参阅图1
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5，实施例1
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3中所述活化培养设备包括机箱1和底座2；
95.所述底座2固定设置于机箱1底部的四个顶角的位置，所述机箱1的正面设有箱门一11与箱门二12，所述机箱1包括培养室3与离心室4，所述培养室3位于离心室4的上方，所述培养室3与离心室4之间设有隔板13，且隔板13内部开设有孔洞14；
96.所述培养室3内壁的顶部固定安装有紫外灯一31，所述培养室3的侧壁设有换气口32，所述换气口32贯穿培养室3的侧壁与培养室3的内部连通，所述培养室3的内部位于换气口32一侧的位置设有换气扇33，所述换气扇33的中心设有转轴，所述转轴的两端分别与培
养室3正面的内部和背面的内部转动连接，所述换气扇33设有电机，所述培养室3内壁的底部位于换气扇33下方的位置固定连接有温控器一34。
97.所述离心室4的内部设有离心组件41与紫外灯二42，所述离心组件41包括外壳43、内壳44、离心盘45、气缸46、转动轴47、稳定座48、转动电机49、固定柱410、温控器二411以及盖板412，所述外壳43位于离心室4的内部，所述外壳43的底部与离心室4内壁的底部固定连接，所述内壳44固定连接于外壳43的内部，所述气缸46位于内壳44的内部，所述气缸46的底部与稳定座48的顶部固定连接，所述气缸46的顶部与离心盘45的底部中心位置固定连接，所述稳定座48的底部与转动轴47的顶部固定连接，所述转动轴47的底部与转动电机49的输出轴通过联轴器固定连接，所述转动电机49位于电机框的内部，所述电机框与内壳44的底部固定连接，所述固定柱410位于内壳44的下方，所述固定柱410的顶部与内壳44的底部固定连接，所述固定柱410的底部与外壳43内壁的底部固定连接，所述固定柱410的内部设有减震弹簧，所述温控器二411安装于内壳44的底部；
98.所述离心盘45包括十字支架451、连接件452以及放罐筒453，所述连接件452的上端通过转轴与十字支架451的一端转动连接，四个所述放罐筒453分别位于十字支架451的四个端点下方，且放罐筒453顶部与连接件452的底部固定连接；
99.所述盖板412位于外壳43的顶部，所述盖板412内部设有滑动板413，所述滑动板413的底部设有齿牙414，所述内壳44的内部设有与齿牙414相适配的齿轮415；
100.所述紫外灯二42固定连接于离心室4的侧壁。
101.将实施例1
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3与对比例的发酵剂应用做成功能性固体饮料，具体步骤如下：
102.将等质量的草莓、柠檬、猕猴桃、橙子、石斛、西红柿去皮后使用榨汁机粉碎，进行灭菌处理后在无菌车间加入4组发酵罐中，然后分别接种质量分数为6％的实施例1
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3与对比例的发酵剂，在温度35℃，发酵3
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4d，发酵结束后进行冷冻干燥，冻干后在无菌车间进行粉碎、包装即得到功能性固体饮料。
103.对实施例1
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3和对比例得到的液体制品和功能性固体饮料进行性能测试，随机选取4组各30名胃肠道功能紊乱的人群进行食用，观察食用后胃肠道功能紊乱的症状变化，得到结果如下表：
104.样品1d3d5d实施例1轻微缓解明显改善不表现紊乱症状实施例1轻微缓解明显改善不表现紊乱症状实施例1轻微缓解明显改善不表现紊乱症状对比例无明显变化轻微缓解轻微缓解
105.从上表可以看出食用实施例1
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3的发酵剂所生产的功能性固体饮料相较于对比例发酵剂所生产的功能性固体饮料可以明显的改善
106.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
107.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。