技术特征：
1.一种质粒，其包括：编码温度敏感元件的基因；位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元；位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因。2.根据权利要求1所述的质粒，其中，能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元是指当温度升高到给定温度时，所述温度敏感元件失活从而操纵单元启动表达目标蛋白；以及当温度低于给定温度时，所述温度敏感元件抑制操纵单元启动表达目标蛋白，优选给定温度为37-40℃。3.根据权利要求1或2所述的质粒，其特征在于，所述温度敏感元件和所述操纵单元配合使用，所述温度敏感元件和所述操纵单元选自噬菌体λ阻遏ci-pr-pl启动子、tlpa蛋白-tlpa启动子、大肠杆菌阻遏蛋白tetr温敏变体-tet操作子、大肠杆菌阻遏蛋白laci(ts)-laco位点+laci启动子或大肠杆菌热休克蛋白-phsp启动子中任意一种，优选，所述温度敏感元件和所述操纵单元选自噬菌体λ阻遏ci-pr-pl启动子。4.根据权利要求1-3任一项所述的质粒，其特征在于，用于构建所述质粒的初始质粒选自psb3k3质粒、pet系列质粒、pgex系列质粒、pmal系列质粒、pqe-1质粒、pqe-60质粒、pgs-21a质粒、pcdfduet-1质粒、prsfduet-1质粒或pbluescriptii系列质粒中任意一种，优选为psb3k3质粒。5.根据权利要求1-4任一项所述的质粒，其特征在于，所述目标蛋白选自荧光蛋白、疫苗蛋白、抗体蛋白、生物催化酶、膜蛋白、多肽、细胞因子蛋白、激素蛋白或补体蛋白中的任意一种或两种以上。6.根据权利要求5所述的质粒，其特征在于，所述荧光蛋白为选自红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、橙色荧光蛋白或黄色荧光蛋白中的任意一种或两种以上。7.根据权利要求1-6的任一项所述的质粒在无细胞反应体系中用于合成目标蛋白的用途。8.一种脂质体药物递送体系，其包括：如权利要求1-4任一项所述的质粒，其中的目标蛋白是药物蛋白；原核细胞或真核细胞的无细胞提取物；以及温度敏感蛋白。9.一种温控无细胞反应体系的构建方法，该方法包括下述步骤：-提供细胞提取物；-使所述细胞提取物与下述质粒混合以形成温控无细胞反应体系，该质粒包括编码温度敏感元件的基因和位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元以及位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因；-任选：向所述温控无细胞反应体系中添加能量源物质和氨基酸混合液，无机盐，转录翻译辅助物质；-任选：向所述温控无细胞反应体系中添加氧化物质和还原物质；-在给定温度下在反应体系中表达所述目标蛋白。10.一种温控无细胞反应体系的构建方法，该方法包括下述步骤：-提供包含温度敏感元件的细胞提取物与不包含温度敏感元件的细胞提取物的细胞提
取物混合物；-使所述细胞提取物混合物与下述质粒混合以形成温控无细胞反应体系，该质粒包括能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元以及位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因；-任选：向所述温控无细胞反应体系中添加能量源物质和氨基酸混合液，无机盐，转录翻译辅助物质；-任选：向所述温控无细胞反应体系中添加氧化物质和还原物质；-在给定温度下在反应体系中表达所述目标蛋白。
技术总结
本发明涉及一种质粒，其包括：编码温度敏感元件的基因；位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元；位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因。本发明的质粒能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元调控目标蛋白的表达，当温度升高到给定温度时，所述温度敏感元件失活从而操纵单元启动表达目标蛋白，当温度低于给定温度时，所述温度敏感元件抑制操纵单元启动表达目标蛋白。本发明通过所述质粒进一步提供了一种温控无细胞合成体系的构建方法，实现了在无细胞体系中通过温度调控其中目标蛋白的表达。表达。
技术研发人员：卢元 杨俊祝 汪琛
受保护的技术使用者：清华大学
技术研发日：2022.01.06
技术公布日：2022/6/28