靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用

1.本发明涉及药物技术领域，具体涉及一种靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用。
技术背景
2.粘着斑激酶(focal adhesion kinase,fak)在肿瘤的侵袭和转移中起着关键作用，是一种细胞质酪氨酸激酶，参与细胞的多种功能，在肿瘤细胞的侵袭、转移、血管生成和信号转导等方面具有重要的作用，并且在各种肿瘤细胞中过表达，并与肿瘤细胞的恶性程度相关，所以可以成为肿瘤诊断的分子标志物，fak位于整合素和受体酪氨酸激酶信号转导交汇点，可以将细胞外基质的信号传递到细胞内，抑制fak的功能可以有效的阻断一些与肿瘤相关的信号通路。fak的过表达可能与其基因扩增有关联，同时也被证明在细胞存活、迁移和侵袭中发挥重要的作用。因此，fak成为肿瘤诊疗的一个重要靶点。


技术实现要素：

3.针对上述存在的技术局限性，本发明提出一种靶向粘着斑激酶的化合物及制备方法和应用。本发明的化合物靶向粘着斑激酶的化合物结构简单，作用效果更好。
4.为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
5.本发明的目的之一是提供一种靶向粘着斑激酶的化合物，所述靶向粘着斑激酶的化合物具有如下式i的结构式：
[0006][0007]
r1选自
[0008]
r2选自氢或
[0009]
所述r3选自烷氧基、烷基被取代的烷氧基、
羟基；
[0010]
所述r1、r2或r3中的r7相同或不同，各自独立地选自c1-c5的烷基；
[0011]
所述r4选自氢、烷氧基、硝基、
[0012]
所述r8选自c1-c5的直链烷基或环烷基；所述r9或r
10
相同或不同，各自独立地选自甲基、含有卤素取代基的杂芳基；所述x选自卤素；
[0013]
所述r5选自卤素或全被卤素取代的烷基。
[0014]
优选地，所述靶向粘着斑激酶的化合物中，
[0015]
所述r1、r2或r3中的r7相同或不同，各自独立地选自c1-c2的烷基；和/或，
[0016]
所述r3或r4中的烷氧基中的烷基选自c1-c2的烷基；
[0017]
所述r3中，烷基被取代的烷氧基具有以下通式：所述r
11
选自卤素、羟基、ots基；所述n选自1-5；
[0018]
所述r8选自c1-c3的烷基或c3-c5的环烷基；
[0019]
所述r9、r
10
独立地选自含f取代的吡唑基或吡啶基。
[0020]
优选地，
[0021]
所述r1、r2或r3中的r7均选自甲基；
[0022]
所述r3或r4中的烷氧基中的烷基选自甲基；
[0023]
所述r5选自溴或cf3；
[0024]
所述r
11
选自f或
18
f；所述n选自1-3；
[0025]
所述r8选自乙基或环丙烷基；
[0026]
所述r9、r
10
独立地选自
[0027]
优选地，所述靶向粘着斑激酶的化合物具有如下结构式：
[0028][0029]
所述n选自1-3。
[0030]
优选地，
[0031]
所述r4选自氢，优选所述r2也选自氢。
[0032]
优选地，所述靶向粘着斑激酶的化合物包括以下化合物中的至少一种：
[0033]
[0034]
[0035]
[0036]
[0037][0038]
本发明的目的之二是提供本发明的目的之一所述的靶向粘着斑激酶的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0039]
(1)中的羟基被r3基团取代；所述r3选自自烷氧基、烷基被取代的烷氧基、任选地羟基；
[0040]
(2)任选地，中的硝基进一步被r4基团取代；所述r4选选硝基被r4基团取代过程包括硝基被还原成氨基然后再发生氨基氢被取代的过程；
[0041]
第二种方法：与通式r
’‑
nh2所示的化合物反应，经对甲苯磺酸催化合成通式(ⅳ)的化合物其中r’选自r
’1选自r3基团或硝基。
[0042]
本发明的靶向粘着斑激酶的化合物的制备方法可根据现有常规的制备方法制备，也看采用本发明给出的方法制备，具体地包括：制备所述的结构如式(
ⅰ‑ⅰ
)所示的化合物时，合成路线大体如下(共有两个方法，记做方法a和方法b)：
[0043]
方法a：
[0044][0045]
方法a具体制备方法包括以下步骤：
[0046]
a1)将5-溴-2,4-二氯嘧啶、2-氨基-n-甲基苯甲酰胺、碳酸钾溶于dmf中，并将此体系置于70℃下反应15小时，即可得到化合物1。
[0047]
a2)将化合物1(1eq)、对甲氧基苯胺(1.2eq)、对甲苯磺酸一水合物(0.4eq)溶于1.4-二氧六环中，将反应体系置于70℃下搅拌过夜，可得化合物2。
[0048]
a3)将化合物2在三溴化硼、二氯甲烷条件下进行脱甲氧基得到化合物3。
[0049]
a4)将化合物3分别和化合物9a-9c在碳酸钾和dmf于70℃反应即可得到化合物4a-4c。
[0050]
a5)将化合物4a-4c在对甲苯磺酰氯、三乙胺、二氯甲烷于室温搅拌下反应可得化合物5a-5c。
[0051]
a6)将化合物5a-5c在tbaf和四氢呋喃条件下加热至50℃可得化合物6a-6c。
[0052]
方法b具体制备方法包括以下步骤：
[0053][0054]
a1)将化合物4-氨基苯酚和化合物9a-9c在碳酸钾和dmf于70℃反应即可得到化合物7a-7c。
[0055]
a2)将化合物7a-7c在氢气、钯碳室温搅拌条件下即可得到化合物8a-8c。
[0056]
a3)制备的目标化合物同方法一步骤a4)一致，与步骤a4方法不同，具体方法如下：将化合物8a-8c和化合物1在对甲苯磺酸一水合物和1.4-二氧六环加热至70℃条件下得到化合物4a-4c。
[0057]
a4)将化合物1和4-氨基苯乙醚在对甲苯磺酸一水合物和1.4-二氧六环加热至70℃条件下得到化合物ly-4。
[0058]
制备所述的结构式(
ⅰ‑ⅱ
)所示的化合物时，本发明的合成路线如下，记做方法c：
[0059]
[0060]
[0061][0062]
方法c具体制备方法包括以下步骤：
[0063]
b1)将5-溴-2,4-二氯嘧啶溶于thf中，缓慢滴加氨水，在室温下搅拌两个小时即可获得化合物10。
[0064]
b2)将化合物10、碳酸钾溶于dmf，然后缓慢加入二硝基氟苯并在70℃下反应5-7小时即可获得化合物11。
[0065]
b3)将化合物11在铁粉氯化铵条件下，将硝基还原为氨基，得到化合物12。
[0066]
b4)将化合物12、乙酰氯在三乙胺做碱，无水二氯甲烷做溶剂，冰浴下搅拌半小时即可获得化合物13。
[0067]
b5)将化合物13、4-甲氧基-3-硝基苯胺在对甲苯磺酸一水合物和1.4-二氧六环于70℃条件下即可获得化合物14。
[0068]
b6)化合物15合成方法同步骤b3。
[0069]
b7)将化合物15、n-乙酰-β-丙胺酸、hatu、dipea、dmf条件下室温搅拌即可获得化合物16。
[0070]
b8)化合物17合成方法同步骤a3。
[0071]
b9)化合物18a-18c、20合成方法同方法一的步骤a4。
[0072]
b10)化合物19a-19c、21合成方法同方法一的步骤a6。
[0073]
b11)化合物22a、22b、24a和24b合成方法同步骤b7。
[0074]
b12)化合物23a和23b合成方法同方法二的步骤a4。
[0075]
b13)化合物26合成方法同步骤方法一的a1。
[0076]
b14)化合物27合成方法同步骤b3。
[0077]
b15)化合物28合成方法同步骤b7。
[0078]
b16)化合物29合成方法同方法二的步骤a1。
[0079]
b17)将化合物二醇在tbscl、咪唑以及二氯甲烷做溶剂室温搅拌条件下得到化合物30a-30c。
[0080]
b18)化合物31a-31c合成方法同方法一的步骤a5。
[0081]
b19)化合物32合成方法同步骤b7。
[0082]
b20)化合物33a-33c合成方法同步骤
[0083]
b21)将化合物33a-33c用四氢呋喃溶解，加入叔丁醇钾，30分钟后加入碘甲烷，搅拌1小时即可获得化合物34a-34c。
[0084]
b22)化合物35a-35c合成方法同方法一的步骤a2。
[0085]
b23)化合物36a-36c合成方法同方法二的步骤a4。
[0086]
b24)将化合物36a-36c溶于乙酸乙酯中，加入盐酸的乙酸乙酯溶液，室温搅拌过夜即可获得化合物37a-37c。
[0087]
b25)化合物38a-38c合成方法同方法一的步骤a5。
[0088]
b26)化合物39a-39c合成方法同方法一的步骤a6。
[0089]
b27)化合物40合成方法同方法一的步骤a4。
[0090]
b28)化合物41合成方法同方法二的步骤a1或者b3。
[0091]
b29)将化合物41与2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶在氯化锌条件下即可得化合物42
[0092]
b30)化合物43合成方法同方法一的步骤a1。
[0093]
b31)化合物44合成方法同步骤b3和b4，共两步反应。
[0094]
化合物ly-47至ly-52合成路线图：
[0095][0096]
原料和反应条件:(a)k2co3,dmf,70℃；(b)h2,10％pd/c,meoh,50℃；(c)k2co3,thf,60℃；(d)1)socl2,dcm,reflux；2)thf,0℃；(e)fe powder:nh4cl＝1:1(n:n),meoh:thf:h2o＝5:5:2(v:v:v).
[0097][0098]
原料和反应条件:(a)isopropanol,p-toluenesulfonic acid monohydrate,90℃；(b)tscl,et3n,anhydrous dcm,rt；(c)k
222
,kf,k2co3,dmf.
[0099]
在本发明中，靶向粘着斑激酶的化合物的制备方法中各物质的加入量无特殊要求，按照本领域类似反应的常规用量或通过常规手段的调整即可，其合成方法上述公开的
合成方法中进行选择，也可以本领域中已公开的相似结构或相似官能团变换的合成方法。
[0100]
本发明的目的之二是提供本发明的目的之一所述的化合物作为标记前体的应用，优选作为放射性标记前体的应用。
[0101]
本发明的目的之三是提供本发明的目的之一所述的化合物在靶向粘着斑激酶中的应用或在制备肿瘤治疗药物中的用途或联合用药治疗肿瘤中的用途或在制备肿瘤诊断显像剂中的用途，优选所述肿瘤选自肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤。
[0102]
本发明还提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的本发明的目的之一所述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂。药物组合物能配制用于特定给药途径，如口服给药、胃肠外给药和直肠该药等。口服，例如片剂、胶囊剂(包括持续释放或定时释放处方)、丸剂、散剂、颗粒剂、弛剂、酊剂、混悬液(包括纳米混悬液、微米混悬液、喷雾干燥分散剂)、糖浆剂和乳剂；舌下给药；含服；胃肠外，例如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内的注射，或输注技术(例如作为无菌可注射水溶液或非水溶液或混悬液)；经鼻，包括对鼻粘膜给药，例如通过吸入喷雾；局部，例如以乳，膏或软膏的形式∶或经直肠，例如以栓剂的形式。它们可单独给药，但通常会与根据所选择的给药途径和标准药学操作选择的药学载体一起给药。
[0103]
与现有技术相比，本发明至少具有以下优点：
[0104]
1)本发明设计并合成出一系列靶向fak的化合物，可以作为抑制肿瘤生长的小分子化合物，同时也可以作为一些罕见病的抑制剂小分子化合物；
[0105]
2)本发明中所述化合物可以用于标记放射性核素f-18，用于肿瘤的诊断，可以作为肿瘤显像剂；
[0106]
3)本发明提出靶向fak小分子化合物在标记制备相关的放射性的药物时，均可以进行一步法标记，标记率高，现有技术本研究团队申请的专利中的化合物大多以两步法标记，标记率很低。
[0107]
4)本发明做了大量的fak抑制剂，通过激酶活性测试发现r4、r2为氢的时候激酶抑制活性普遍偏高，而且从理论模型分析来看此类化合物与蛋白空腔结合的更好。
[0108]
5)本发明的fak抑制剂活性好，以化合物ly-3为例，其激酶抑制活性高于现在的临床二期的fak药物vs-6063，而且通过抑瘤实验发现化合物ly-3抑瘤效果好于vs-6063以及现在上市的肺癌药物埃罗替尼，可见其单一用药效果很好。
[0109]
6)本发明的fak抑制剂可以联合用药，在联合用药方面具有比单一用药更好的抑瘤效果，以化合物ly-21为例其联合埃罗替尼在肺癌小鼠模型中，表现出比单一用药更好的抑瘤效果，而且小鼠的活泼程度也很好，体重也不减少。说明毒性小。能达到1+1大于2的效果。由此可见，联合用药方面具有非常重要的意义。
[0110]
7)本发明的fak抑制剂的放射性标记均可以实现一步法标记，标记率高。而且其肿瘤摄取高，显像清晰，在肿瘤诊断方面具有非常重要的意义。
附图说明
[0111]
图1为ly-21以及现有化合物的抑瘤实验图；
[0112]
图2为ly-21以及现有化合物喂药28天后将肿瘤取出称重的质量图；
[0113]
图3为ly-3以及现有化合物的抑瘤实验图；
[0114]
图4为ly-3以及现有化合物喂药28天后将肿瘤取出称重的质量图；
[0115]
图5为ly-10放射性诊断效果图。
[0116]
附图标记：1-肿瘤部位
具体实施方式
[0117]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。
[0118]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本发明。本文中所使用的试剂和仪器均商购可得，所涉及的表征手段均可参阅现有技术中的相关描述，本文中不再赘述。
[0119]
为了进一步了解本发明，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0120]
实施例1
[0121]
如方法c所示的合成过程，化合物10的合成
[0122]
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(30g，131.65mmol)溶于thf(150ml)中，缓慢滴加氨水(150ml)，在室温下搅拌两个小时，经tlc检测反应完全，加入150ml水，用ea(100ml*3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，即得24.7g白色固体产物，产率：90％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝43.5hz,2h),7.31(s,1h).
[0123]
化合物11的合成
[0124]
将化合物10(20g，95.95mmol)、碳酸钾(15.91g，115.14mmol)加入反应瓶中，加入dmf(150ml)，在室温下搅拌15分钟，然后缓慢加入二硝基氟苯(21.4g，115.14mmol)，将反应体系加热到70℃，五小时后经tlc检测反应完全，将反应体系将至室温，加入20ml水，有黄色固体析出，过滤，用水洗涤滤饼，收集滤饼，用乙酸乙酯石油醚进行重结晶，得到31.19g黄色固体产物，产率：86.8％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.58(s,1h),8.83(s,1h),8.75(s,1h),8.63(d,j＝10.2hz,1h),8.41(d,j＝9.7hz,1h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ160.66,157.77,143.00,140.10,138.46,129.49,126.17,122.03,106.04.ms(esi+):m/z calcd for c
10
h5brcln5o4,372.9213；found,373.9293(m+h+)
[0125]
化合物13的合成
[0126]
将化合物11(20g，53.4mmol)溶于四氢呋喃(150ml)、甲醇(150ml)、水(50ml)中，加入铁粉(7.45g，133.5mmol)、氯化铵(7.14g，133.5mmol)，在70℃下搅拌6小时，经tlc检测反应完全，过滤，浓缩滤液，然后将其溶于四氢呋喃(150ml)中并置于冰水浴中，加入三乙胺(13.5g，133.5mmol)，在冰水浴中搅拌40分钟，然后缓慢滴加乙酰氯(9.22g，117.48mmol)，1小时后，经tlc检测反应完全，缓慢加入水(150ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸镁干燥，浓缩有机相，柱层析(pe:ea＝5:1to 1:1)得到7.66g白色固体，两步产率：36％。
[0127]
化合物25的合成
[0128][0129]
将化合物13(3g,7.56mmol)、对甲苯磺酸(520mg,3.02mmol)、4-氨基-2-硝基苯酚(1.75g,11.34mmol)加入到250ml圆底烧瓶中，加入1,4-二氧六环(100ml)将原料溶解，置换氩气，然后将反应体系置于70℃下搅拌24小时，经tlc检测反应完全，待反应体系将至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，浓缩、重结晶得到3.11g黄色固体产物，产率：79.6％。
[0130]
实施例2
[0131]
化合物26的合成
[0132][0133]
将化合物2-溴-n,n-二甲基乙酰胺(2g,12.05mmol)、碳酸钾(2g,14.46mmol)、碘化钾(200.9mg,1.21mmol)加入到100ml圆底烧瓶中并用dmf(50ml)溶解，将化合物25(6.22g,12.05mmol)溶于dmf(20ml)中缓慢的滴加到上述反应体系中，滴加完毕将其置于50℃下反应4小时，经tlc检测反应完全，将反应将至室温，加入100ml的水即可有黄色固体析出，过滤，用水洗涤滤饼，烘干即得5.8g产物，产率：80％。
[0134]
实施例3
[0135]
化合物ly-23的合成
[0136][0137]
将化合物26(100mg,0.17mmol)、碳酸钾(35.93mg,0.26mmol)、碘化钠(2.5mg,0.017mmol)加入到10ml圆底烧瓶中，加入1mldmf，缓慢的加入对甲苯磺酸2-氟乙酯(74.2mg,0.34mmol)的dmf溶液(1ml)，滴加完毕后将反应体系置于70℃搅拌过夜，将反应将至室温，加入3ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到74.1mg白色固体产物，产率：70.59％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.27(d,j＝28.2hz,2h),8.86(s,1h),8.11(d,j＝8.3hz,2h),7.66(m,1h),7.60(d,j＝8.8hz,1h),7.44(d,j＝8.4hz,1h),6.84(d,j＝8.7hz,1h),6.74(s,1h),6.60(d,j＝8.6hz,1h),5.07(d,j＝6.2hz,1h),4.68(s,2h),4.57(t,j＝5.1hz,1h),4.45(t,j＝5.1hz,1h),3.13(m,2h),2.96(s,3h),2.83(s,3h),2.07(d,j＝9.7hz,6h).13c nmr(101mhz,dmso)δ169.98,168.77,168.23,158.77,157.36,156.86,141.37,138.64,136.92,135.41,131.58,127.58,127.30,116.92,115.40,113.33,107.53,102.59,83.54,81.90,68.10,43.44,36.03,35.44,24.38,23.38.
[0138]
实施例4
[0139]
化合物28的合成
[0140][0141]
冰浴下，将化合物吡唑-3-甲酸(300mg，0.45mmol)、hatu(190.12mg，0.5mmol)溶于2mldmf中，加入dipea(116.3mg，0.9mmol)，将其在冰浴下反应40min，然后将化合物27(285.7mg，0.5mmol)溶于2mldmf中并缓慢滴入到上述反应体系中，滴加完毕后在室温反应过夜，经tlc检测反应完全，加入5ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30:1至15:1)得到101.8mg灰黑色固体产物，产率：34％。ms(esi+):m/z calcd for c
28h29
brn
10
o5,664.1506；found,665.1585(m+h+)。
[0142]
实施例5
[0143]
化合物29(ly-33)的合成
[0144][0145]
合成方法同化合物26，以为化合物28原料，通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝40:1至20:1)得到35mg白色固体，产率66.69％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(d,j＝14.8hz,2h),9.72(s,1h),9.12(s,1h),8.23(s,1h),8.10(s,2h),7.90(s,1h),7.64(s,1h),7.58(s,1h),7.36(s,2h),6.83(s,1h),6.76(s,1h),4.88(s,3h),4.78(s,1h),4.54(s,1h),4.47(s,1h),2.96(s,3h),2.82(s,3h),2.04(d,j＝15.9hz,6h).13c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.06,168.84,168.13,159.38,158.89,157.44,157.07,147.03,146.23,143.49,138.15,136.90,134.77,133.74,131.79,128.51,128.46,127.56,126.01,106.86,106.81,93.37,83.18,81.52,68.45,52.98,35.57,24.50,23.53,21.30.ms(esi+):m/z calcd for c
30h32
brfn
10
o5,710.1725；found,711.1806(m+h+)
[0146]
实施例6
[0147]
化合物14的合成
[0148][0149]
合成方法同化合物25，以为化合物13为原料，反应完毕后通过重结晶得到(5g,黄色固体，产率78.8％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.21(s,1h),10.15(s,1h),9.46(s,1h),8.24(m,1h),8.01(s,1h),7.81(s,1h),7.69(s,1h),7.54(s,1h),7.45(s,1h),7.14(s,1h),3.86(s,3h),2.08(s,6h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.03,168.88,158.40,157.43,146.87,139.21,137.49,134.17,132.33,127.97,127.11,125.40,116.90,115.25,115.07,114.85,94.14,57.24,24.50,23.54.ms(esi+):m/z calcd for c21h20brn7o5,529.0709；found,530.0776(m+h+)。
[0150]
实施例7
[0151]
化合物17的合成
[0152][0153]
将化合物16(2g，3.26mmol)加入到高压分应釜中，加入无水二氯甲烷(15ml)和三溴化硼(1.63g，6.52mmol)，将反应体系加热至60℃反应过夜，待反应体系将至室温，缓慢减压，缓慢的滴加饱和碳酸氢钠溶液至反应体系略显碱性，用二氯甲烷萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到1.17g白色固体产物，产率：59.8％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(d,j＝9.6hz,2h),9.27(s,1h),9.18(s,1h),8.96(s,1h),8.06(d,j＝5.6hz,2h),7.88(s,1h),7.63(d,j＝10.9hz,3h),7.30(d,j＝9.3hz,1h),7.21(d,j＝8.7hz,1h),6.59(d,j＝9.6hz,1h),3.25(s,2h),2.49(s,2h),2.04(d,j＝8.4hz,6h),1.75(s,3h).
[0154]
实施例8
[0155]
化合物20的合成
[0156][0157]
将上述化合物(500mg，0.66mmol)、(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(189mg，0.79mmol)、碳酸钾(109.2mg，0.79mmol)加入到25ml圆底烧瓶中，加入5mldmf将原料溶解后置于70℃下反应过夜，经tlc检测反应完全，加入10ml水，并用乙酸乙酯萃取，收集有机相，干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到400.1mg白色固体产物，产率：80.3％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.02(s,2h),9.08(s,1h),8.73(s,1h),8.11(s,1h),7.90(s,2h),7.62(s,2h),7.42(d,j＝7.2hz,1h),7.34(d,j＝7.4hz,1h),6.79(m,1h),4.00(s,2h),3.92(s,2h),3.28(s,2h),2.49(s,2h),2.07(d,j＝7.3hz,6h),1.78(s,3h),0.87(s,9h),0.06(s,6h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.00,169.93,169.69,169.61,169.52,168.75,168.66,158.87,158.78,157.46,157.06,144.60,136.88,133.87,130.18,127.60,116.78,115.09,113.10,100.00,70.96,62.11,35.63,29.51,26.35,24.47,23.11,18.55,-4.73.ms(esi+):m/z calcd for c33h45brn8o6si,756.2415；found,757.2484(m+h
+
)
[0158][0159]
将上步的产物(400mg，0.53mmol)加入到10ml圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)，在室温下反应5小时，经tlc检测反应完全，浓缩除去溶剂，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到272.6mg白色固体产物，产率：75％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.12(dd,j＝16.5,51.9hz,3h),9.27(d,j＝48.2hz,1h),9.03(d,j＝11.8hz,1h),8.29(s,1h),7.99(s,1h),7.94(s,1h),7.71(s,1h),7.44(d,j＝14.6hz,2h),7.09(s,1h),6.79(s,1h),3.93(s,2h),3.69(s,2h),3.26(s,2h),2.55(s,2h),2.05(s,6h),1.74(s,3h).
[0160]
将上步的产物(200mg，0.3mmol)加入到10ml圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷(3ml)和三乙胺(91.1mg，0.9mmol)，将此体系在超声下超声20分钟，尽量使部分原料溶解，随后加入对甲苯磺酰氯(114.4mg，0.6mmol)在室温下搅拌过夜，浓缩反应液，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到30mg白色固体产物，产率：12.54％。1h nmr(600mhz,methanol-d4)δ8.02(s,2h),7.71(s,2h),7.64(s,1h),7.45(s,1h),7.29(s,2h),7.19(s,1h),6.68(s,1h),4.39(s,2h),4.19(s,2h),3.47(s,2h),2.62(s,2h),2.34(s,3h),2.12(s,6h),1.90(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c34h37brn8o8s,796.1638；found,797.1704(m+h+)。
[0161]
实施例9
[0162]
化合物21(ly-22)的合成
[0163][0164]
将化合物17(60mg，0.1mmol)、1-溴-3-氟丙烷(16.9mg，0.12mmol)、碳酸钾(16.6mg，0.12mmol)溶于dmf(2ml)中，将反应体系加热至70℃反应过夜，经tlc检测反应完全，加水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到40mg白色固体，产率60.65％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.05(m,2h),9.05(s,1h),8.84(s,1h),8.08(s,2h),7.88(s,1h),7.82(s,1h),7.59(s,2h),7.41(s,1h),7.30(s,1h),6.75(s,1h),4.65(s,1h),4.57(s,1h),3.99(s,2h),3.24(s,2h),2.09(s,2h),2.04(s,6h),1.74(s,3h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.00,169.85,169.74,168.84,158.84,157.40,157.16,144.92,137.04,133.84,131.91,127.82,127.53,116.91,115.76,115.29,112.69,100.00,82.14,81.07,65.18,36.69,35.74,30.37,24.47,23.53,23.10.ms(esi+):m/z calcd for c28h32brfn8o5,658.1663；found,659.1724(m+h+)
[0165]
实施例10
[0166]
化合物18b的合成
[0167][0168]
将化合物17(200mg，0.33mmol)溶于2mldmf中，加入二乙二醇双对甲苯磺酸酯(207.2mg，0.5mmol)和碳酸钾(69.1mg，0.5mmol)，将反应体系置于70℃反应10小时，经tlc检测反应完全，待反应体系将至室温，加入4ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝60:1至35:1)得到143.1mg白色固体产物，产率：51.52％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.07(s,2h),9.15(s,1h),8.79(s,1h),8.17(d,j＝16.2hz,1h),7.91(s,2h),7.77(s,2h),7.65(s,2h),7.43(s,3h),7.35(s,1h),6.78(s,1h),4.16(s,2h),3.98(s,2h),3.69(s,4h),3.27(s,2h),2.36(s,3h),2.07(s,6h),1.77(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c36h41brn8o9s,840.1901；found,841.1981(m+h+)。
[0169]
实施例11
[0170]
[0171]
将化合物二乙二醇双对甲苯磺酸酯(2g，4.83mmol)溶于15ml四氢呋喃中，加入5.8mltbaf(1m的四氢呋喃溶液)，将反应体系置于50℃下反应9个小时，经tlc检测反应完全，旋蒸除去溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1至5：1)得到708.2mg无色油状液体，产率：55.9％。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.80(t,j＝6.4hz,2h),7.34(d,j＝6.1hz,2h),4.54(s,1h),4.42(s,1h),4.17(s,2h),3.71(s,3h),3.63(s,1h),2.44(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ144.92,133.08,129.89,128.06,82.49,70.62,70.49,69.23,68.97.ms(esi+):m/z calcd for c11h15fo4s,262.0675；found,285.0583(m+na+)。
[0172]
实施例12
[0173]
化合物19b的合成
[0174][0175]
合成方法同化合物20的合成，以化合物17为原料，通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到36mg白色固体，产率56％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.09(d,j＝18.0hz,2h),9.07(s,1h),8.78(s,1h),8.08(s,2h),7.89(d,j＝11.2hz,2h),7.59(d,j＝12.0hz,2h),7.41(s,1h),7.31(s,1h),6.77(d,j＝9.2hz,1h),4.58(s,1h),4.46(s,1h),4.04(s,2h),3.75(s,3h),3.67(s,1h),3.24(s,2h),2.48(s,2h),2.04(s,6h),1.74(s,3h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.02,169.74,168.85,158.87,157.47,157.10,144.69,137.02,134.28,131.82,130.18,128.09,127.57,116.92,116.65,115.31,113.93,84.16,83.06,70.43,70.30,69.48,36.73,35.71,24.48,23.51,23.10.ms(esi+):m/z calcd for c29h34brfn8o6,688.1769；found,689.1849(m+h+)。
[0176]
实施例13
[0177]
化合物18c的合成
[0178][0179]
合成方法同化合物20的合成，以化合物17为原料，通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到50mg白色固体，产率49％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(s,2h),9.06(s,1h),8.75(s,1h),8.08(s,2h),7.86(d,j＝16.5hz,2h),7.73(t,j＝6.0hz,2h),7.60(s,2h),7.42(d,j＝10.3hz,2h),7.36(d,j＝9.8hz,1h),7.31(d,j＝9.6hz,1h),6.77(d,j＝8.9hz,1h),4.06(s,2h),4.00(s,2h),3.67(s,2h),3.54(s,2h),3.51(s,2h),3.45(s,2h),3.23(d,j＝11.9hz,2h),2.43(s,2h),2.35(s,3h),2.03(d,j＝10.3hz,6h),1.74(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c38h45brn8o10s,884.2163；found,885.2238(m+h+)。
[0180]
实施例14
[0181]
化合物19c的合成
[0182][0183]
合成方法同化合物20的合成，以化合物17为原料，通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到26mg白色固体，产率65％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.26(s,1h),10.16(s,1h),9.06(s,1h),8.81(s,1h),8.08(s,2h),7.90(d,j＝26.0hz,2h),7.60(d,j＝14.3hz,2h),7.44(s,1h),7.30(s,1h),6.78(s,1h),4.52(s,1h),4.40(s,1h),4.02(s,2h),3.71(s,2h),3.64(s,1h),3.57(d,j＝14.0hz,6h),3.25(s,2h),3.12(s,1h),2.04(s,6h),1.74(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c
31h38
brfn8o7,732.2031；found,755.1894(m+na
+
).
[0184]
实施例15
[0185]
化合物ly-14的合成
[0186][0187]
将化合物13(3g，7.53mmol)、对甲氧基苯胺(1.11g，9.04mmol)、对甲苯磺酸一水合物(572.56mg，3.01mmol)加入到100ml圆底烧瓶中，加入40ml异丙醇作为反应溶剂，将反应体系置于90℃下反应过夜，经tlc检测反应完全，将反应体系将至室温，缓慢的倒入200ml乙酸乙酯中，会有固体析出，过滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼，干燥滤饼得2.6g白色固体产物，产率：71.18％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.17(s,1h),10.09(s,1h),9.71(s,1h),8.78(s,1h),8.24(s,1h),7.74(s,1h),7.54(s,1h),7.48(s,1h),7.34(d,j＝9.5hz,2h),6.75(d,j＝6.5hz,2h),3.70(s,3h),2.08(s,6h).ms(esi+):m/z calcd for c
21h21
brn6o3,484.0859；found,485.0935(m+h
+
).
[0188]
实施例16
[0189]
化合物ly-15的合成
[0190][0191]
将原料化合物ly-14(2g，4.12mmol)加入到高压分应釜中，加入无水二氯甲烷(15ml)和三溴化硼(1.55g，6.18mmol)，将反应体系加热至60℃反应过夜，待反应体系将至室温，缓慢减压，缓慢的将反应体系滴加到饱和碳酸氢钠溶液中使最终溶液略显碱性，用二氯甲烷萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至35:1)得到1.23g白色固体产物，产率：63.11％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.10(s,1h),8.94(s,1h),8.09(s,1h),7.73(s,1h),7.64(d,j＝8.9hz,1h),7.39(m,1h),7.30(d,j＝9.9hz,2h),6.54(q,j＝9.1,11.7hz,2h),2.08(s,6h)。
[0192]
实施例17
[0193]
化合物ly-16的合成
[0194][0195]
合成方法同化合物20的合成，以化合物ly-15(1g，2.12mmol)、(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷为原料，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至1:1)得到1.04g白色固体产物，产率：78％。
[0196]
将上步的产物(1.04g，1.65mmol)加入到25ml圆底烧瓶中，分别加入1,4-二氧六环溶液(10ml)和4摩尔的氯化氢-二氧六环溶液(10ml)，然后在室温搅拌6小时，经tlc检测反应完全，过滤，用1,4-二氧六环洗涤滤饼，烘干即得产物(747.3mg，白色固体，产率：88％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.11(s,1h),10.06(s,1h),9.11(s,1h),8.13(s,2h),7.72(s,1h),7.60(d,j＝9.2hz,1h),7.42(d,j＝9.0hz,3h),6.72(m,2h),4.03(m,1h),3.90(s,2h),3.69(s,2h),2.09(s,6h).ms(esi+):m/z calcd for c
22h23
brn6o4,514.0964；found,515.1030(m+h
+
).
[0197]
实施例18
[0198]
化合物ly-17的合成
[0199][0200]
将化合物ly-16(700mg，1.36mmol)加入到10ml圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷(2ml)和无水三乙胺(688.1mg，6.8mmol)，将对甲苯磺酰氯(518.6mg，2.72mmol)溶于无水二氯甲烷(1ml)并缓慢的滴加到反应体系中，滴加完毕后将其在室温下搅拌12小时，经tlc检测反应完全，加入5ml水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，收集有机相，干燥、浓缩、重结晶(甲醇)得到602.6mg白色固体产物，产率：66.18％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.03(m,1h),9.98(s,1h),9.08(s,1h),8.11(s,1h),7.75(s,2h),7.67(s,1h),7.55(s,1h),7.41(s,3h),7.35(s,2h),6.59(s,2h),4.26(s,2h),4.04(s,2h),2.35(s,3h),2.03(s,6h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.01,168.87,158.65,157.52,157.31,152.77,145.53,137.25,134.58,132.70,132.26,130.68,128.16,127.34,120.74,116.72,115.07,114.71,100.00,69.69,65.96,24.52,23.57,21.60.ms(esi+):m/z calcd for c29h29brn6o6s,668.1053；found,669.1119(m+h+).
[0201]
实施例19
[0202]
化合物ly-18的合成
[0203][0204]
向化合物ly-17(200mg,0.3mmol)的dmf(2ml)溶液中，加入碳酸钾(4.1mg,0.03mmol)、k
2.2.2
(112.9mg,0.3mmol)和kf(34.9mg,0.6mmol)，然后将反应体系置于100℃下反应1h。浓缩反应液，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝60:1至30:1)，得到产物(128.2mg,白色固
体，产率82.6％)；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.09(s,1h),10.04(s,1h),9.08(s,1h),8.10(s,2h),7.67(s,1h),7.56(s,1h),7.41(s,3h),6.71(s,2h),4.71(s,1h),4.63(s,1h),4.14(s,1h),4.09(s,1h),2.04(s,6h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.00,168.88,158.72,157.56,157.32,153.29,137.26,134.51,132.21,127.42,120.90,116.78,115.19,114.73,83.32,82.22,67.78,67.66,24.52,23.54.ms(esi+):m/z calcd for c
22h22
brfn6o3,516.0921；found,517.0988(m+h+).
[0205]
实施例19
[0206][0207]
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(15g，65.83mmol)、2-氨基-n-甲基苯甲酰胺(11.86g，79mmol)、碳酸钾(10.92g，79mmol)加入到500ml圆底烧瓶中，加入dmf(200ml)并将此体系置于70℃下反应15小时，经tlc检测反应完全，待反应体系将至室温，加入500ml水，有黄色固体析出，过滤，用水洗涤滤饼，烘干得到黄色固体产物(19.94g，产率：88.68％)。
[0208][0209]
将上步的产物(6g，17.56mmol)、对甲氧基苯胺(2.59g，21.07mmol)、对甲苯磺酸一水合物(1.34g，7.02mmol)加入到250ml圆底烧瓶中，加入100ml异丙醇作为反应溶剂，将反应体系置于90℃下反应过夜，经tlc检测反应完全，将反应体系将至室温，缓慢的倒入到200ml乙酸乙酯中，会有固体析出，过滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼，烘干无需纯化即得6.02g淡黄色固体，将所得滤饼加入到高压反应釜中，加入无水二氯甲烷(40ml)和三溴化硼(5.28g，21.09mmol)，将反应体系置于60℃下反应4小时，待反应釜将至室温，缓慢减压，缓慢的将反应体系滴加饱和碳酸氢钠溶液中并使最终溶液显碱性，用二氯甲烷萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝60:1至35:1)得到2.62g白色固体产物，两步产率：36.02％。，1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.28(s,1h),9.08(s,1h),9.03(s,1h),8.67(s,1h),8.61(s,1h),8.17(s,1h),7.68(s,1h),7.37(s,1h),7.34(s,2h),7.08(s,1h),6.66(s,2h),2.77(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c18h16brn5o2,413.0487；found,414.0557(m+h+).
[0210][0211]
合成方法同化合物20的合成，以上步的产物(2g，4.83mmol)、(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷为原料，通过两步反应，第一步通过柱层析分离纯化得到的白色固体产物，经过第二步反应后，用重结晶方式得到化合物(930.4mg，白色固体，两步产率：42.01％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.32(s,1h),9.22(s,1h),8.68(s,1h),8.61(s,1h),8.20(s,1h),7.69(s,1h),7.47(s,2h),7.41(s,1h),7.08(s,1h),6.82(s,2h),3.95(s,2h),3.87(s,2h),2.77(s,3h),0.84(s,9h),0.04(s,6h).ms(esi+):m/z calcd for c26h34brn5o3si,
571.1614；found,572.1692(m+h+).
[0212]
以上步的产物(800mg，1.75mmol)为原料，通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1至1:2)得到673.8mg白色固体产物，产率63％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.34(s,1h),9.29(s,1h),8.73(s,1h),8.63(s,1h),8.24(s,1h),7.80(m,2h),7.72(d,j＝6.7hz,1h),7.50(d,j＝10.6hz,5h),7.13(d,j＝8.3hz,1h),6.77(t,j＝7.2hz,2h),4.33(s,2h),4.13(s,2h),2.80(s,3h),2.41(s,3h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ169.34,158.86,158.06,156.30,153.48,145.53,139.78,134.27,132.83,131.81,130.70,128.44,128.20,122.48,122.19,122.00,121.64,114.98,114.81,69.76,66.16,26.84,21.63.ms(esi+):m/z calcd for c
27h26
brn5o5s,611.0838；found,612.0916(m+h+).
[0213]
化合物ly-3的合成：
[0214]
合成方法同化合物ly-18的合成。ly-3的核磁数据为1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.34(s,1h),9.29(s,1h),8.73(s,1h),8.65(s,1h),8.25(s,1h),7.72(m,1h),7.54(d,j＝6.6hz,2h),7.48(m,1h),7.13(s,1h),6.91(d,j＝6.2hz,2h),4.80(s,1h),4.68(s,1h),4.24(s,1h),4.16(s,1h),2.81(s,3h).13c nmr(101mhz,dmso-d6)δ169.34,158.88,158.09,156.30,153.93,139.80,134.13,131.85,128.45,122.49,122.18,122.12,121.61,114.91,83.64,81.98,67.79,26.85.ms(esi+):m/z calcd for c
20h19
brfn5o2,459.0706；found,460.0783(m+h+).
[0215]
将化合物1(1g，2.93mmol)、4-氨基苯乙醚(441.7mg，3.22mmol)、对甲苯磺酸一水合物(222.6mg，1.17mmol)加入到反应瓶中，加入异丙醇(20ml)，加热至80℃并搅拌过夜，反应完毕后，将反应液将至室温，缓慢的倒入水(100ml)中，会有白色固体析出，过滤、干燥即可得产物(白色固体，产率：76.65％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.30(s,1h),9.22(s,1h),8.69(s,1h),8.61(s,1h),8.20(s,1h),7.68(s,1h),7.44(d,j＝25.6hz,3h),7.09(s,1h),6.80(s,2h),3.95(s,2h),2.77(s,3h),1.28(s,3h).
[0216]
实施例20
[0217]
将4-硝基苯酚(5g，45.82mmol)、溴乙醇(6.87g，54.98mmol)、碳酸钾(7.6g，54.98mmol)溶于dmf(100ml)中，通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1至2：1)分离纯化得到黄色固体产物6.23g，产率：72％。ms(esi
+
):m/z calcd for c8h9no4,183.0532；found,184.1054(m+h
+
).
[0218][0219]
合成方法同上，以4-硝基苯酚(5g，45.82mmol)原料，通过柱层析(石油醚：乙酸乙
酯＝5:1至2:1)得到6.87g黄色固体产物，产率：66％。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.18(q,j＝10.2,13.6hz,2h),6.98(d,j＝8.3hz,2h),4.22(s,2h),3.89(s,2h),3.76(s,2h),3.67(s,2h).ms(esi+):m/z calcd for c
10h13
no5,227.0794；found,228.1395(m+h+).
[0220][0221]
合成方法同化合物25的合成，以化合物1(1g，2.93mmol)为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到化合物4b(白色固体，产率：59.8％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.33(s,1h),9.27(s,1h),8.72(s,1h),8.64(s,1h),8.24(s,1h),7.73(s,1h),7.51(s,2h),7.48(d,j＝8.9hz,1h),7.13(s,1h),6.87(s,2h),4.60(s,1h),4.06(s,2h),3.73(s,2h),3.51(s,4h),2.81(s,3h).
[0222]
将化合物4b(502.4mg，1mmol)、对甲苯磺酰氯(190.7mg，1mmol)、三乙胺(121.3mg，1.2mmol)加入到反应瓶中，用无水二氯甲烷(6ml)溶解，将反应体系在室温下搅拌16小时，加入15ml水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，收集有机相，干燥、浓缩，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物5b(白色固体，产率：56％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.57(s,1h),8.08(s,1h),7.75(s,2h),7.60(s,1h),7.36(d,j＝24.1hz,5h),7.08(s,1h),6.83(s,2h),4.16(s,2h),4.00(s,2h),3.71(s,4h),2.89(s,3h),2.35(s,3h).13c nmr(101mhz,chloroform-d)δ169.46,156.78,155.19,144.93,139.17,133.04,132.18,131.73,129.91,128.05,126.76,122.94,122.91,122.86,122.14,114.94,100.00,70.03,69.31,69.01,67.85,27.02,21.71.ms(esi+):m/z calcd for c
29h30
brn5o6s,655.1100；found,656.1162(m+h+).
[0223][0224]
合成方法同ly-18的合成，以化合物5b为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝100:1至35:1)即可得到化合物6b(白色固体，产率：70.6％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.29(s,1h),9.22(s,1h),8.67(s,1h),8.61(d,j＝8.4hz,1h),8.20(s,1h),7.68(d,j＝8.5hz,1h),7.48(d,j＝8.6hz,2h),7.42(d,j＝8.2hz,1h),7.08(t,j＝5.8hz,1h),6.84(d,j＝8.7hz,2h),4.57(s,1h),4.45(s,1h),4.04(s,2h),3.73(s,3h),3.65(s,1h),2.77(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ169.34,158.90,158.07,156.29,154.24,139.80,133.87,131.83,128.44,122.46,122.15,121.60,114.83,84.41,82.77,70.33,69.61,67.82,26.84.
[0225]
实施例21
[0226]
[0227]
将硝基化合物(2g，7.37mmol)、铁粉(617.7mg，11.06mmol)、氯化铵(591.63mg，11.06mmol)加入到反应瓶中，加入甲醇(10ml)、水(5ml)、四氢呋喃(10ml)，将反应体系置于73℃下搅拌6小时，经tlc检测反应完全，趁热过滤，浓缩滤液，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1至1:1)即可得到产物(黑色固体，产率：70.5％)。经过硅藻土过滤、浓缩既得产物(黑色固体)，产率：80％。ms(esi+):m/z calcd for c
12h19
no4,241.1314；found,242.1922(m+h
+
).
[0228][0229]
合成方法同化合物4b的合成，以化合物1为起始原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到化合物4c(白色固体，产率：59.8％)。ms(esi+):m/z calcd for c
24h28
brn5o5,545.1274；found,546.1349(m+h
+
).
[0230][0231]
合成方法同化合物5b的合成，以化合物4c为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物(白色固体，产率：60％)。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ10.93(s,1h),8.53(s,1h),8.11(s,1h),7.76(s,2h),7.44(m,1h),7.37(s,2h),7.33(s,1h),7.28(s,3h),7.01(s,1h),6.83(s,2h),6.39(s,1h),4.13(s,2h),4.08(s,2h),3.79(s,2h),3.65(s,4h),3.59(s,2h),2.97(s,3h),2.39(s,3h).
13
c nmr(151mhz,chloroform-d)δ169.61,158.51,156.95,156.57,154.92,144.97,139.52,133.00,132.77,131.58,129.93,128.03,128.01,126.90,122.59,122.38,121.89,114.92,95.03,70.86,70.81,69.94,69.38,68.80,67.87,26.95,21.70.ms(esi+):m/z calcd for c
31h34
brn5o7s,699.1362；found,700.1400(m+h
+
).
[0232][0233]
化合物ly-10的合成方法同化合物6b的合成，以化合物5c为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到白色固体产物，产率：65％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.29(s,1h),9.22(s,1h),8.68(s,1h),8.61(s,1h),8.20(s,1h),7.69(s,1h),7.47(s,2h),7.43(s,1h),7.08(d,j＝7.7hz,1h),6.83(s,2h),4.54(s,1h),4.42(s,1h),4.02(s,2h),3.64(m,8h),2.76(s,3h).
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ169.34,158.89,156.29,154.26,139.80,133.83,131.82,128.43,122.45,122.14,121.60,114.81,84.39,82.75,70.45,70.39,70.14,69.60,67.82,26.84.ms(esi+):m/z calcd for c
24h27
brfn5o4,547.1230；found,548.1299(m+h
+
).
[0234]
实施例21
[0235][0236]
冰浴下，将三乙二醇(10g，66.59mmol)、咪唑(2.72g，39.95mmol)加入到500ml圆底烧瓶中，用无水二氯甲烷(150ml)将原料溶解，缓慢的滴加叔丁基二甲基氯硅烷的二氯甲烷
for c
33h43
brn8o8,758.2387；found,759.2467(m+h+).
[0245][0246]
将化合物37c(100mg，0.13mmol)、对甲苯磺酰氯(30.5mg，0.16mmol)、三乙胺(26.29mg，0.26mmol)溶于无水二氯甲烷(2ml)中，在室温下反应16小时，原料反应完全，浓缩除去溶剂，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20：1)得到化合物38c(白色固体，产率：56％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.02(s,1h),9.95(s,1h),9.22(s,1h),8.18(d,j＝5.8hz,2h),7.77(s,2h),7.70(s,1h),7.54(d,j＝10.9hz,2h),7.46(s,2h),7.38(s,2h),6.91(m,1h),4.09(s,2h),4.04(s,2h),3.65(s,2h),3.55(s,2h),3.48(s,2h),3.44(s,2h),3.36(s,2h),2.93(s,3h),2.55-2.77(s,3h),2.40(s,3h),2.07(s,8h),1.83(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c
40h49
brn8o
10
s,912.2476；found,913.2554(m+h
+
).
[0247][0248]
将化合物38c(40mg，43.77μmol)溶于四氢呋喃(0.5ml)中，加入0.5ml1m的tbaf溶液，将反应体系置于50℃下搅拌过夜，将反应体系降至室温，加入2ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，浓缩，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30:1至15:1)得到化合物39c(白色固体，产率：62％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.98(s,1h),9.91(s,1h),9.18(s,1h),8.14(d,j＝4.6hz,2h),7.66(s,1h),7.47(d,j＝18.3hz,2h),7.37(d,j＝13.0hz,2h),6.89(s,1h),4.52(s,1h),4.40(s,1h),4.03(s,2h),3.64(d,j＝11.7hz,3h),3.53(d,j＝12.1hz,5h),3.33(s,2h),2.90(s,3h),2.64(d,j＝88.9hz,3h),2.04(s,8h),1.80(s,3h).ms(esi
+
):m/z calcd for c
33h42
brfn8o7,760.2344；found,761.2425(m+h
+
).
[0249]
实施例22
[0250][0251]
将化合物32(2g，7.48mmol)、对甲苯磺酸氟乙酯(1.96g，8.98mmol)、碳酸钾(1.24g，8.98mmol)溶于dmf(20ml)中，将反应体系置于70℃下反应6小时，经tlc检测反应完全，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至2:1)得到化合物40(黄色固体，产率：76.5％)。
[0252][0253]
0℃下，将化合物2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(164.9mg，0.76mmol)溶于1,2-二氯乙烷(1.5ml)和叔丁醇(1.5ml)中，加入1m氯化锌的乙醚溶液(1.67ml)然后在此温度下搅拌1
小时，将化合物41(180mg，0.76mmol)加入到反应体系中，将三乙胺(85mg，0.84mmol)溶于1,2-二氯乙烷(0.75ml)和叔丁醇(0.75ml)中并慢慢的加入到反应体系中，滴加完毕后，升至室温，过夜搅拌，经检测原料反应完全，加入水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，干燥有机相、浓缩、柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至1:1)得到产物(白色固体，产率：36.5％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.46(s,1h),9.00(s,1h),8.69(s,1h),8.15(s,1h),7.87(s,1h),7.33(s,1h),7.04(s,1h),4.80(s,1h),4.68(s,1h),4.27(s,1h),4.20(s,1h),3.21(s,2h),1.75(s,3h).ms(esi
+
):m/z calcd for c
18h18
clf4n5o3,463.1034；found,464.3339(m+h
+
).
[0254][0255]
将化合物42(100mg，0.22mmol)、2,4-二硝基苯胺(47.6mg，0.26mmol)、碳酸钾(35.9mg，0.26mmol)溶于dmf(2ml)中，将反应体系置于60℃下反应20小时，加入水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，收集有机相、干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝100:1至40:1)得到产物(黄色固体，产率：26.9％)。
[0256][0257]
将化合物43(100mg，0.16mmol)、铁粉(13.4mg，0.24mmol)、氯化铵(12.7mg，0.24mmol)加入到反应瓶中，加入甲醇(2ml)、水(1ml)、四氢呋喃(2ml)，将反应体系置于70℃下搅拌6小时，经tlc检测反应完全，趁热过滤，浓缩滤液，用无水四氢呋喃溶解并置于冰浴下，加入三乙胺(32.4mg，0.32mmol)，逐滴加入乙酰氯(25.1mg，0.32mmol)，滴加完毕后将反应体系置于室温下搅拌1小时，加入水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，干燥有机相，浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到化合物44(白色固体，两步产率：32.8％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.06(d,j＝22.7hz,2h),9.48(s,1h),8.89(d,j＝24.0hz,1h),8.24(s,1h),8.03(s,1h),7.85(s,2h),7.53(d,j＝30.9hz,2h),7.40(s,1h),7.29(s,1h),6.74(s,1h),4.74(d,j＝24.0hz,2h),4.17(d,j＝29.7hz,2h),3.25(s,2h),2.49(s,2h),2.04(s,3h),2.00(s,3h),1.74(s,3h).ms(esi
+
):m/z calcd for c
28h30
f4n8o5,634.2275；found,635.2350(m+h
+
).
[0258]
实施例23
[0259][0260]
将化合物25(200mg，0.39mmol)、三乙二醇双对甲苯磺酸酯(270.5mg，0.59mmol)、碳酸钾(81.5mg，0.59mmol)溶于dmf(5ml)中，将反应体系置于60℃下反应6小时，经检测原料反应完全，浓缩除去溶剂，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝60:1至30:1)得到化合物ly-19，黄色固体，产率：69％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.03(s,2h),9.46(s,1h),8.22(d,j＝19.4hz,2h),8.01(s,1h),7.75(d,j＝12.7hz,3h),7.70(s,1h),7.52(s,1h),7.45(s,2h),7.38(s,1h),7.13(s,1h),4.16(s,2h),4.09(s,2h),3.69(s,2h),3.56(s,2h),3.52(s,2h),
3.45(s,2h),2.39(s,3h).13c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.04,168.86,158.36,157.47,145.92,145.41,139.74,137.48,134.41,132.91,132.43,130.63,128.08,127.04,125.07,116.81,116.17,115.14,114.79,70.49,70.43,70.20,69.82,69.22,68.41,24.51,23.58,21.59.ms(esi+):m/z calcd for c
33h36
brn7o
10
s,801.1428；found,802.1494(m+h+).
[0261][0262]
合成方法同化合物39c的合成，以化合物ly-19为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产品，黄色固体，产率：66.5％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.01(s,2h),9.42(s,1h),8.17(d,j＝17.5hz,2h),7.96(s,1h),7.69(s,1h),7.66(s,1h),7.48(s,1h),7.34(s,1h),7.09(s,1h),4.49(s,1h),4.41(s,1h),4.14(s,2h),3.69(s,2h),3.62(s,1h),3.56(s,3h),3.52(s,2h),2.03(s,6h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ170.06,168.89,158.36,157.51,145.92,139.77,137.48,134.39,132.42,128.02,127.08,125.08,116.84,116.19,115.19,114.79,84.10,83.00,70.56,70.31,70.21,69.87,69.24,24.48,23.56.ms(esi
+
):m/z calcd for c
26h29
brfn7o7,649.1296；found,650.1373(m+h
+
).
[0263]
实施例24
[0264]
ly-21的合成
[0265][0266]
将化合物6-氟烟酸(141.1mg，1mmol)、hatu(456.29mg，1.2mmol)溶于dmf(2ml)中，加入dipea(155.1mg，1.2mmol)并在室温下反应40分钟，然后将化合物15(500mg，1mmol)加入到反应体系中，并在室温下继续反应10小时，待原料完全反应后，加入5ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，干燥、浓缩、经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物，产率：66.3％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.02(s,1h),9.90(s,1h),9.66(s,1h),9.16(s,1h),8.74(s,1h),8.41(s,1h),8.13(s,1h),8.11(s,1h),7.70(s,1h),7.59(s,2h),7.42(s,1h),7.35(s,1h),7.30(s,1h),6.83(s,1h),3.73(s,3h),2.06(s,3h),1.98(s,3h).ms(esi+):m/z calcd for c
27h24
brfn8o4,622.1088；found,623.1164(m+h
+
).
[0267]
实施例25
[0268][0269]
将3-氰基-2-氟吡啶(10g，81.9mmol)、n-甲基甲磺酰胺(9.83g，90.07mmol)、碳酸钾(22.6g，163.53mmol)加入到500ml圆底烧瓶中，加入dmf(200ml)，将反应体系置于70℃下反应3小时，经tlc检测反应完全，将反应体系将至室温，慢慢的加入到1升水中，静置，有白色固体析出，过滤得到13.89g白色固体产物，产率：80.28％。ms(esi+):m/z calcd for c8h9n3o2s,211.0415；found,212.0424(m+h
+
).
[0270][0271]
将化合物45(8g，37.87mmol)加入到高压反应釜中，加入10％钯碳(4g,3.76mmol)，用甲醇(100ml)溶解，用氮气置换，通入氢气至6mpa，加热至50℃反应3小时，经检测反应完全，过滤掉钯碳，浓缩滤液，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝40：1至15:1)得到产物(7.18g，黑色固体，产率：88.06％)。
[0272][0273]
将化合物46(6g，27.87mmol)、5-溴-2,4-二氯嘧啶(7.62g，33.44mmol)、碳酸钾(4.74g，34.31mmol)加入到250ml圆底烧瓶中，加入四氢呋喃(100ml)，将反应体系置于60℃搅拌，4小时后，经tlc检测反应完全，将反应体系将至室温，加入200ml水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30：1)得到产物(白色固体，产率：87.26％)。ms(esi
+
):m/z calcd for c
12h13
brcln5o2s,404.9662；found,443.9273(m+k
+
)。
[0274][0275]
室温下，将5-硝基水杨酸(10g，54.61mmol)溶于无水二氯甲烷(70ml)中，缓慢滴入二氯亚砜(30ml)，将反应体系置于油浴锅中回流5小时，浓缩溶剂，用无水四氢呋喃(50ml)溶解酰氯并置于0℃下，将1-乙酰哌嗪(7g，54.61mmol)溶于四氢呋喃(50ml)并缓慢的滴加到酰氯中，1小时后，经检测反应完全，将反应体系缓慢加入到200ml水中，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物(14.66g，白色固体，产率：91.54％)。ms(esi+):m/z calcd for c13h15n3o5,293.1012；found,294.1135(m+h+).
[0276][0277]
将化合物48b(10g，34.10mmol)、化合物9c(12.45g，40.92mmol)、碳酸钾(7.07g，51.15mmol)加入到500ml圆底烧瓶中，加入dmf(150ml)溶解原料，并将反应体系置于75℃下搅拌，10小时后检测反应完全，加入300ml水，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝55:1至20:1)得到产物(8.39g，淡黄色油状物，产率：57.83％)。ms(esi+):m/z calcd for c
19h27
n3o8,425.1798；found,426.1847(m+h
+
).
[0278][0279]
合成方法同化合物35c的合成，以化合物49b(7g，16.45mmol)为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物(黑色固体，产率：80％)。ms(esi
+
):m/z calcd for c
19h29
n3o6,395.2056；found,418.2138(m+na
+
).
[0280][0281]
将化合物47(1g，2.46mmol)、50b(1.07g，2.71mmol)、对甲苯磺酸一水合物(186.4mg，0.98mmol)加入到100ml三口烧瓶中，置换氮气，加入异丙醇(20ml)，将反应体系置于90℃下反应，12小时后经tlc检测原料反应完全，将反应体系将至室温，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝40:1至15:1)得到产物(1.15g，白色固体，产率：60.98％)。1h nmr(600mhz,methanol-d4)δ8.44(s,1h),7.99(s,1h),7.79(s,1h),7.70(s,1h),7.46(s,1h),7.38(d,j＝19.6hz,2h),7.22(s,1h),6.95(s,1h),4.18(s,1h),4.10(s,1h),3.80(d,j＝15.4hz,3h),3.63(m,12h),3.52(s,4h),3.41(s,1h),3.21(s,3h),3.11(s,3h),2.11(d,j＝33.8hz,3h).ms(esi+):m/z calcd for c
31h41
brn8o8s,764.1951；found,418.2138(m+h+).
[0282][0283]
冰浴下，将化合物ly-48(500mg，0.65mmol)溶于无水二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(197.3mg，1.95mmol)，在冰浴下搅拌0.5小时，然后缓慢滴加对甲苯磺酰氯(247.8mg，1.3mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)，滴加完毕后将反应体系置于室温下反应20小时，旋蒸除去溶剂，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到产物(358.7mg，白色固体，产率：60％)。ms(esi+):m/z calcd for c
38h47
brn8o
10
s2,918.2040；found,919.2125(m+h+).
[0284][0285]
将化合物ly-50(100mg,0.11mmol)溶于2ml的四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵的1m四氢呋喃溶液(0.17ml，0.17mmol)，然后回流，2小时后经tlc检测反应完全，加入5ml水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)到59mg白色固体，产率：72.72％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.40(s,1h),8.02(s,1h),7.70(s,1h),7.51(s,1h),7.37(s,1h),7.34(s,1h),7.29(s,1h),6.77(s,1h),4.70(s,2h),4.49(s,1h),4.41(s,1h),3.99(s,2h),3.66(s,2h),3.60(s,1h),3.52(m,7h),3.41(d,j＝29.7hz,3h),3.31(d,j＝14.7hz,1h),3.15(s,3h),3.12(m,3h),3.01(d,j＝36.9hz,2h),1.96(d,j＝35.3hz,3h).13c nmr(151mhz,dmso-d6)δ168.84,167.01,166.93,158.96,158.75,156.64,152.83,149.03,147.92,138.17,134.58,125.98,124.62,121.21,119.17,112.94,84.08,82.98,70.41,70.32,70.26,70.14,69.54,68.36,37.82,36.61,25.56,21.72,19.91,14.04.ms(esi+):m/z calcd for c
31h40
brfn8o7s,766.1908；found,767.1995(m+h+).
[0286]
实施例26
[0287][0288]
室温下，将5-硝基水杨酸(10g，54.61mmol)溶于无水二氯甲烷(70ml)中，缓慢滴入二氯亚砜(30ml)，将反应体系置于油浴锅中回流5小时，浓缩溶剂，用无水四氢呋喃(50ml)溶解酰氯并置于0℃下搅拌，将吗啉(4.76g，54.61mmol)溶于四氢呋喃(50ml)并缓慢的滴加到酰氯中，1小时后，经检测反应完全，将反应体系缓慢加入到200ml水中，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至30:1)得到产物(白色固体，产率：90.2％)。
[0289][0290]
合成方法同化合物49b的合成，以化合物48b为原料，经过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到产物(黄色固体，产率：56.2％)。ms(esi
+
):m/z calcd for c
17h24
n2o8,384.1533；found,385.1478(m+h
+
).
[0291][0292]
将化合物49a(1g，2.6mmol)加入100毫升圆底烧瓶中，加入甲醇(10ml)、10％钯碳(0.1g)并置换氢气，将反应体系置于室温下搅拌过夜，经tlc检测反应完全，过滤，浓缩滤液即可得化合物50a，无需纯化直接用于下一步反应，将化合物50a、化合物47(1.06g，2.6mmol)、对甲苯磺酸一水合物(197.8mg，1.04mmol)溶于异丙醇(20ml)中，并将该反应体系置于90℃下反应过夜，待原料反应完全，将反应将至室温，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，干燥、浓缩、柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至20:1)得到产物(白色固体，两步产率：62％)。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.32(s,1h),7.88(s,1h),7.78(s,1h),7.73(s,1h),7.44(s,1h),7.37(s,1h),7.18(s,1h),6.74(s,1h),6.22(s,1h),4.77(s,2h),4.07(s,1h),3.98(s,1h),3.72(d,j＝21.2hz,3h),3.62(d,j＝30.7hz,11h),3.50(s,2h),3.44(s,1h),3.19(s,3h),3.13(s,1h),3.00(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ167.47,158.45,158.34,155.59,152.82,149.81,148.28,139.68,134.03,133.74,125.75,124.41,122.39,120.39,112.79,93.52,72.84,70.89,70.47,69.73,68.43,66.98,66.76,61.63,47.30,42.23,40.48,37.81,35.67.
[0293][0294]
合成方法同化合物ly-50的合成，以化合物ly-47为原料，通过柱层析(二氯甲烷：
甲醇＝50:1至30:1)得到化合物ly-49(白色固体，产率：50.1％)。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.04(s,1h),8.40(s,1h),8.03(s,1h),7.74(s,2h),7.70(d,j＝7.6hz,1h),7.52(s,1h),7.42(s,2h),7.36(dd,j＝6.0,13.5hz,2h),7.29(s,1h),6.76(s,1h),4.71(s,2h),4.07(s,2h),3.97(s,2h),3.63(s,2h),3.50(d,j＝28.6hz,10h),3.43(s,2h),3.35(s,1h),3.00(s,1h),2.36(s,3h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ166.89,158.96,158.76,156.61,152.84,149.03,147.93,145.40,138.18,134.64,134.57,132.97,130.64,128.54,128.13,125.89,124.61,121.18,119.24,112.93,93.07,70.47,70.38,70.35,70.26,69.53,68.47,68.37,66.69,66.53,47.14,42.09,37.83,36.62,21.60.ms(esi+):m/z calcd for c
36h44
brn7o
10
s2,877.1774；found,878.1841(m+h
+
).
[0295][0296]
合成方法同化合物ly-52的合成，以化合物ly-49为原料，通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1至25:1)得到59mg白色固体，产率：72.72％。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.40(s,1h),8.02(s,1h),7.70(s,1h),7.51(s,1h),7.37(s,1h),7.34(s,1h),7.29(s,1h),6.77(s,1h),4.70(s,2h),4.49(s,1h),4.41(s,1h),3.99(s,2h),3.66(s,2h),3.60(s,1h),3.52(m,7h),3.41(d,j＝29.7hz,3h),3.31(d,j＝14.7hz,1h),3.15(s,3h),3.12(m,3h),3.01(d,j＝36.9hz,2h),1.96(d,j＝35.3hz,3h).
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ168.84,167.01,166.93,158.96,158.75,156.64,152.83,149.03,147.92,138.17,134.58,125.98,124.62,121.21,119.17,112.94,84.08,82.98,70.41,70.32,70.26,70.14,69.54,68.36,37.82,36.61,25.56,21.72,19.91,14.04.ms(esi+):m/z calcd for c
31h40
brfn8o7s,766.1908；found,767.1995(m+h
+
).
[0297]
测试方法：
[0298]
本测试使用cisbio公司的均相时间分辨的荧光共轭能量转移(方法)进行活性检测。fak激酶购自carna公司；检测试剂盒购自cisbio公司；检测板和多功能酶标仪购自perkin elmer公司。在检测板中，将酶、生物素标记的多肽底物、atp以及检测化合物混合，孵育反应。化合物共11个浓度，最终体系浓度从10μm至0.17nm。用10μl的缓冲液反应体系(50mm hepes ph 7.5,1mm edta,10mm mgcl2,0.01％brij-35,25nm seb,1mm dtt,0.7nm fak，1μm biotin-tk peptide，25μm atp)在23℃下孵育90分钟。加入10μl的终止溶液(20mm edta，0.67nm tk抗体，50nm xl-665)，在23℃孵育60分钟，envision读数。将仪器读取的数据计算出化合物的抑制率，然后运用idbs的xlfit5中mode 205计算出ic
50
值，具体结果如表1所示。
[0299]
实施例27
[0300]
标记路线：
[0301]
[0302]
用kryptofix-2.2.2.(13mg)的无水乙腈(0.7ml)溶液与k2co3(1mg)的水(0.3ml)溶液的混合液将俘获在qma柱上的
18
f-洗脱至反应瓶中，100℃温度下用氮气流将反应瓶中的溶剂吹干。然后用0.5ml无水乙腈共沸除水，重复3次。将标记前体化合物ly-9(1.5mg)的无水dmso溶液(0.3ml)迅速加入到上述反应瓶中，密封，95℃条件下反应20min。反应结束后，加入蒸馏水(10ml)猝灭反应，用注射器吸取反应液通过提前活化的sep-pak c18固相萃取柱，然后用1ml乙腈将反应产物从该c18小柱上淋洗下来，收集淋洗液。通过radio-hplc(波长为254nm，c18反相半制备柱agela technologies，5μm,10
×
250mm，meoh:h2o＝2.8:1.2，流速4ml/min)液相分离产物。放射性药物的液相保留时间为21分钟，并同化合物ly-10通过液相共注射分析确认了其准确性，标记率15％，放射化学纯度大于95％。
[0303]
本发明下表1中其余化合物也采用相似的方法进行标记，具体的标记率见表1。
[0304]
表1标准品化合物的体外fak酶活性抑制实验结果
[0305]
[0306][0307]
二、本发明的fak抑制剂在联合用药方面的优势，通过与不同药物的联合在治疗肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤等但不限于这几种癌症中取得较好结果，如可以联合埃罗替尼、克唑替尼、恩曲替尼、凡德他尼、达拉非尼、拉罗替尼用于肺癌的治疗；如可以联合紫杉醇或卡铂用于卵巢癌的治疗；如可以联合吉西他滨、卡培他滨、帕博利珠单抗、紫杉醇等用于胰腺癌的治疗；如可以联合紫杉醇、铂类药物等用于食管癌的治疗等但不限于这几种联合方式，其均表现出比单一用药更好的抑瘤效果。例如化合物ly-21在a549异种移植模型中的抑瘤效果如图1和图2所示，可以看出化合物ly-21联合埃罗替尼在肺癌小鼠模型中，表现出比单一用药更好的抑瘤效果，而且小鼠的活泼程度也很好，体重也不减少，说明毒性小，能达到1+1大于2的效果。由此可见，本发明的fak抑制剂在联合用药方面具有非常重要的意义。
[0308]
本发明的fak抑制剂在单独用药方面的优势，包括在治疗肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、脑胶质瘤等但不限于这几种癌症。例如化合物ly-3在a549异种移植模型中的抑瘤效果如图3和图4所示，可以看出在a549异种移植模型中本发明的化合物ly-3在单独用药方面优于fak临床药物vs-6063，且优于当前治疗肺癌上市药物埃罗替尼，其单一用药效果很好。
[0309]
本发明的fak抑制剂具有增加放射性诊断方面的优势，以化合物ly-10为例，在a549肿瘤模型中的显像图如图5所示，可以很清晰的看到我们所标记的fak抑制剂在肿瘤部
位具有较高的摄取，可以很清晰的分辨靶与非靶部位，且在肿瘤部位1具有较好的滞留。
[0310]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。