专利名称：阴离子型或阳离子型树枝状聚合物抗微生物或抗寄生物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及抑制微生物和寄生物剂的方法，且更具体地说，本发明涉及树枝状聚合物作为由诸如细菌、真菌或寄生物导致的人体和非人体的动物体患者感染的抑制剂的用途。
国际专利申请号PCT/AU95/00350(WO 95/34595)和PCT/AU97/00447(WO 98/03573)中公开了诸如带有多个端基的聚酰氨基胺或聚赖氨酸树枝状聚合物这样的树枝状聚合物，其中至少一个端基带有与之结合或连接的含阴离子或阳离子的部分。将这些公开的国际专利申请的内容引入本文作为参考。
本发明提供了树枝状聚合物在抑制包括细菌和真菌病原体在内的微生物剂和寄生物剂中的用途。
发明概括本发明提供了一种预防性或治疗性抑制人体或非人体的动物体患者体内微生物或寄生物剂的方法，该方法包括对所述患者给予有效量的带有多个端基的树枝状聚合物的步骤，其中至少一个所述端基带有与之结合或连接的含阴离子或阳离子的部分。
用于本发明方法的特别优选的化合物是带有下列与其端基连接的部分的树枝状聚合物含磺酸的部分、含羧酸的部分、含磷酸和膦酸的部分、含硼酸的部分、含神经氨酸或唾液酸的部分或含神经氨酸或唾液酸的部分；含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分；含鈲盐的部分；含脒鎓(amidinium)的部分；含苯酚的部分；具有酸性或碱性氢的杂环；含两性离子的部分或上述部分的混合物。
将用于本发明方法的化合物在本文中称作聚离子型树枝状聚合物并将该术语在本说明书的上下文和权利要求中使用，它不仅包括树枝状聚合物本身，而且包括其药物上或兽药上可接受的盐，例如诸如钠、钾或钙盐这样的碱金属盐或碱土金属盐以及诸如氟离子、氯离子、溴离子、碘离子、柠檬酸根、乙酸根、对甲苯磺酸根等这样的药物上可接受的阴离子。发明详述用于本发明的优选化合物包括通式Ⅰ的聚离子型树枝状聚合物 其中I是引发剂核；Z是内部支化单元；n是代表树枝状聚合物代数的整数；且
A是可以通过任选的连接基团X与内部支化单元Z连接的含阴离子或阳离子的部分。
树枝状聚合物是大分子的多支化合物，它通过从最初的核分子开始经添加连续“代(generation)”的连续层或阶段的重迭代反应顺序来构成三维高度有序的聚合物化合物。树枝状聚合物具有下列特征ⅰ引发剂核(Ⅰ)可以带有一个或多个反应部位并且是点样或显著大小以便获得最终的树枝状聚合物拓扑结构；ⅱ支化重复单元(Z)层与引发剂核连接；ⅲ官能端基(诸如A部分)任选地通过连接基团(诸如连接基团X)与树枝状聚合物表面结合。本发明使用树枝状结构作为连接离子部分的构架；本发明并不限于本文具体描述的球形树枝状聚合物，而可以以任意树枝状结构为基础。各种形状或结构的树枝状聚合物对本领域技术人员来说是众所周知的。
树枝状聚合物的制备方法是众所周知的且例如通过美国专利4289872和4410688(描述以多层赖氨酸单元为基础的树枝状聚合物)以及美国专利4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329(描述以包括聚酰氨基胺或PAMAM树枝状聚合物在内的其它单元为基础的树枝状聚合物)来描述。这些美国专利中所公开的树枝状聚合物被描述为适用于在制备纸中作为诸如作为表面修饰剂、作为金属螯合剂、作为反乳化剂或油/水乳剂、湿强度剂和适用于作为改变诸如漆这样的含水剂粘度的试剂。在美国专利4,289,872和4,410,688中还提示了可以将以赖氨酸单元为基础的树枝状聚合物用作制备药物剂型的基质。
国际专利公开号WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180公开了将树枝状聚合物与另一种诸如携带的药物或农业物质这样的物质接合或连接的接合物。此外，国际专利公开号WO95/24221公开了由至少一种与可以是生物反应修饰剂的载体物质连接的树枝状聚合物和任选的靶物定向剂组成的树枝状聚合物接合物。这些专利公开以及上述美国专利中包括广泛公开的各种树枝状聚合物及其制备方法并将这些公开文献中每一篇的内容均引入本文作为参考。
在最广义的意义上理解本文所用的术语“树枝状聚合物”且在其范围内包括如专利公开号WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180中所公开的这些树枝状聚合物的所有形式和组合物。该术语还包括在这些专利公开文献中所公开的连接或桥连的树枝状聚合物。
本发明优选的树枝状聚合物包括与至少两个树枝状分支共价结合的多价核且优选通过至少两代扩展。特别优选的树枝状聚合物是聚酰氨基胺(PAMAM)树枝状聚合物、PAMAM(EDA)树枝状聚合物、聚(丙烯亚胺)(poly(propyleneimine)(PPI))树枝状聚合物和聚赖氨酸树枝状聚合物。
根据本发明，树枝状聚合物表面上端基中的至少一个且优选显著数量的端基带有与之结合的含阴离子或阳离子的部分。树枝状聚合物的分支可以在氨基或其它反应性官能基诸如OH、SH等上封端，随后这些基团与阴离子或阳离子部分反应。如果树枝状聚合物的端基是胺基，那么含阴离子或阳离子的部分可以通过包括酰胺和硫脲键在内的各种官能基与该树枝状聚合物连接。可以与树枝状聚合物端基结合的优选的含阴离子或阳离子的部分包括含磺酸的部分、含羧酸的部分(包括含神经氨酸和唾液酸的部分和含修饰的神经氨酸和唾液酸的部分)、含硼酸的部分、含磷酸和膦酸的部分(包括含酯化的磷酸和膦酸的部分)和含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分、含鈲盐的部分、含脒鎓的部分、含苯酚的部分、具有酸性或碱性氢的杂环、含两性离子的部分或上述部分的混合物。
可以与氨基或其它端基结合或连接的合适的含阴离子和阳离子的部分包括例如下列基团(其中n是0或正整数，更具体地说，n是0或1-20的整数)-NH(CH2)nSO3--(CH2)nSO3--Ar(SO3-)n-CH2CH(SO3-)COOH -CH(SO3)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3-X=O,S,NH -ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基，H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)X=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基，H,Na R2,R3=基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]n R=烷基，芳基，H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3 R=烷基或芳烷基；R1、R2、R3(可以相同或不同)=烷基或芳烷基 除上述之外，各种含神经氨酸或唾液酸的部分或含修饰的神经氨酸或唾液酸的部分可以与本发明的树枝状聚合物结合或连接。这些部分包括各种N-和O-取代的神经氨酸衍生物，特别是诸如N-乙酰基、O-乙酰基和N-乙醇酰衍生物这样的N-和O-酰基衍生物以及神经氨酸基被修饰的部分。适当修饰的神经氨酸基团包括4-位上被氨基、酰氨基、氰基、叠氮基或胍基所取代的基团以及不饱和神经氨酸基团。这些部分可以通过2-、7-、9-或5-NAc位与树枝状聚合物连接。
优选的情况是，在通式Ⅰ的聚离子型树枝状聚合物中，n是1-20或以上的整数；更优选1-10。另外优选的情况是，树枝状聚合物至少包括3个或更多个端基。
可以起树枝状聚合物与A部分之间间隔基作用的任选的连接基团可以由烷基链(任选地被取代或分支)、烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基链(可以被取代或不被取代)或链烯基、多个链烯基、炔基或多个炔基链(可以被取代或不被取代)组成。合适的间隔基链包括式-(CH2)m-Z-(CH2)m-的基团，其中Z是-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-O-或-S-，且m是1-15的整数。
通过本领域技术人员众所周知的标准化学方法可以制备本发明的阴离子型或阳离子型树枝状聚合物。合适的方法例如下列实施例中的描述。
如上所述，已经发现本发明的阴离子型或阳离子型树枝状聚合物可抑制微生物或寄生物剂。本文所用的术语“微生物剂”用来指细菌和酵母或真菌剂，特别是细菌和酵母或真菌的病原体。因此，该术语包括但不限于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌诸如大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌以及链球菌属、葡萄球菌属、志贺氏菌属、假单胞菌属、梭状芽孢杆菌属、奈瑟氏球菌属和肺炎球菌属的种。此外，该术语包括诸如假丝酵母属这样的酵母病原体和诸如烟曲霉这样的真菌病原体。
本文所用的术语“寄生物剂”特别指的是寄生性病原体，包括但不限于诸如疟原虫属、锥虫属和利什曼虫属(Leischmania)的种类、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)和Cryptosporidium parvum这样的寄生物剂。
本文所用的术语“抑制”在最广泛的意义上包括对人体或非人体的动物体患者体内由微生物或寄生物病原体导致感染的完全或部分抑制或压制作用或对这类由微生物或寄生物病原体导致患者的感染的病原性作用完全或部分抑制或压制作用。该术语还用于包括预防性和治疗性的治疗。
因此，本发明在另一个方面中提供了一种用于预防性或治疗性抑制人体或非人体的动物体患者体内微生物或寄生物剂的药物组合物或兽药组合物，它包括如上述概括的树枝状聚合物以及至少一种药物上或兽药上可接受的载体或稀释剂。
这类组合物的制剂对本领域技术人员来说是众所周知的。合适的药物上可接受的载体和/或稀释剂包括任意和所有的常用溶剂、分散介质、填充剂、固体载体、水溶液、包衣材料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和延缓吸收剂等。这类介质和试剂在活性物质中的应用在本领域中是众所周知的且通过《Remington氏药物科学》(Remington’sPharmaceutical Sciences)第18版，Mack Publishing Company,Pennsylvania,USA中的实例来描述。除任意常用介质或试剂与活性组分不相容外，所关注的是它们在本发明药物组合物中的应用。还可以将补充的活性组分混入组合物。
特别有利的是配制给药方便和剂量均匀的单位剂型形式的组合物。本文所用的单位剂型指的是适合作为所治疗的人受治疗者的单位剂型的物理上可分散的剂型；含有预定量活性组分与所需药物上可接受载体和/或稀释剂的各剂型适合于产生所需的治疗作用。对本发明新型单位剂型的说明由下列因素来决定并直接取决于下列因素(a)活性组分的独特特性和所获得的特定治疗作用和(b)化合这类用于特定疗法的活性组分的领域中固有的限制。
在另一个方面中，本发明提供了如上述概括的有效量的树枝状聚合物通过抑制微生物或寄生物而预防性或治疗性治疗人体或非人体的动物体患者或在制备用于预防性或治疗性治疗人体或非人体的动物体患者的药剂中的用途。
可利用各种给药途径。当然，所选择的特殊方式取决于所治疗的特定疾病和达到治疗功效所需的剂量。一般来说，使用医疗上可接受的任意给药方式、即产生本发明活性成分的治疗水平而不会导致临床上不可接受的不良反应的任意方式可以实施本发明的方法。这类给药方式包括口服、直肠、局部、鼻部、吸入、经皮或非肠道(例如皮下、肌内和静脉内)途径。用于口服给药的制剂包括诸如胶囊、片剂、锭剂等这样的分散单位。其它途径包括直接进入脊髓液的鞘内给药、诸如通过本领域技术人员众所周知的导管和气囊血管成形术装置直接导入和经实质内注入靶向区域。
可以方便地将所述的组合物制成单位剂型且可以通过药物学领域中众所周知的任意方法来制备它们。这类方法包括使活性成分结合入构成一种或多种辅助组分的载体的步骤。一般来说，通过均匀而紧密地使活性成分结合入液体载体、粉碎的固体载体或两者中且然后如果需要使产物成形来制备所述的组合物。
可以将适合于口服给药的本发明组合物制成诸如胶囊、扁囊剂、片剂或锭剂这样的分散单位、在脂质体中含有预定量活性成分的各种剂型或制成诸如糖浆、酏剂或乳剂这样的含水液体或非水液体形式的混悬液。
便于非肠道给药的组合物包括优选与受体血液等渗的活性成分的无菌含水制剂。可以使用那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂、按照公知的方法来配制这种含水制剂。这种无菌注射剂也可以是无菌注射用无毒性非肠道可接受稀释剂或溶剂的溶液或混悬液，例如制成聚乙二醇的溶液。在可接受的载体和溶剂中，可以使用水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，可便利地将无菌固定油用作溶剂或悬浮介质。为了这一目的，可以使用任意缓和的固定油包括合成的单或二酸甘油酯类。此外，诸如油酸这样的脂肪酸类应用于制备注射剂。
还可以将活性成分配制成用于通过鼻内或通过吸入给予活性成分的转运系统，例如制成含有活性成分的精细分散的气溶胶喷雾剂。
其它转运系统可以包括缓释转运系统。优选的缓释转运系统是那些可以以缓释丸粒或胶囊形式释放本发明活性成分的系统。可以利用许多类型的缓释转运系统。它们包括但不限于(a)活性成分包含在基质内的浸蚀性系统；和(b)活性成分以受控速率透过聚合物的扩散系统。此外，可以使用以泵为基础的金属构件转运系统，它们中的某些适用于移植。
以预防或治疗有效量给予活性成分。预防或治疗有效量指的是至少部分获得所需作用或延缓所治疗特定疾病的发作或发展发作、抑制它们发展或使两者均停止所必需的量。当然，这样的量取决于所治疗的特定疾病、所述疾病的严重程度和包括年龄、身体情况、高矮、体重和同时进行的疗法在内的个体患者参数。这些因素对本领域技术人员来说是众所周知的且仅根据常规实验就可以确定它们。一般优选使用最大剂量，即根据声音医疗判断的最高安全剂量。然而，本领域技术人员可以理解可以因医疗因素、心理因素或实际上任意其它因素而给予较低的剂量或耐受性剂量。
一般来说，活性成分的每日口服剂量约为0.01mg/kg/天-1000mg/kg/天。开始可以给予小剂量(0.01-1mg)，随后使剂量增加到约1000mg/kg/天。在这种受治疗者在该剂量下的反应不充分的情况中，甚至可以将剂量使用到患者耐受性所允许的较高的程度(或通过不同的更加集中的转运途径的较高有效剂量)。所关注的是用于获得化合物的合适全身浓度的每日多重剂量。
本发明的活性成分还可以制成适用于兽药组合物的形式，例如，可以通过本领域中常用的方法来制备它们。这类兽药组合物的实例包括适合于下述给药的组合物(a)口服给药、外用，例如浸渍液(例如含水或非水溶液或混悬液)；片剂或药丸；用于含有饲料的混合物的粉剂、颗粒或丸粒；施用于舌头的膏剂；(b)例如通过皮下、肌内或静脉内注射的非肠道给药，例如制成无菌溶液或混悬液；或(如果合适)通过乳房内注射给药，其中将混悬液或溶液经乳头导入乳房；(c)局部施用，例如制成施用于皮肤的霜剂、软骨或喷雾剂；或(d)阴道内给药，例如制成阴道栓、霜剂或泡沫。
除非上下文中另有说明，将贯穿于本说明书和权利要求中的术语“包括”或诸如“包括”或“含有”这样的变化术语理解为包括所述的整体或整体组，但不排除任何其它的整体或整体组。
附图2表示BRI6741对体外人红细胞中恶性疟原虫生长的作用。
附图3表示BRI2998对体外人红细胞中恶性疟原虫生长的作用。
附图4表示BRI7011对体外人红细胞中恶性疟原虫生长的作用。
附图5表示BRI6181对体外人红细胞中恶性疟原虫生长的作用。
从下列为例举而包括但并不用来限定本发明的实施例中可以明显得出本发明的进一步特征。在下列实施例中，PAMAM树枝状聚合物指的是以美国专利4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329中具体描述的氨核为基础的聚酰氨基胺树枝状聚合物；PAMAM(EDM)树枝状聚合物指的是以乙二胺核为基础的聚酰氨基胺树枝状聚合物；且BHAlysxlysylysz树枝状聚合物指的是以如美国专利4,289,872和4,410,688中所述的二苯甲基胺核和赖氨酸支化单元为基础的不对称聚赖氨酸树枝状聚合物。如美国专利4289872、4410688、4507466、4558120、4568737和4587329以及国际专利公开号WO88/01178、WO88/01179、WO88/01180和WO95/24221中所述制备的聚酰氨基胺树枝状聚合物PAMAM1.0、PAMAM2.0、PAMAM3.0、PAMAM4.0、PAMAM5.0或更高的代、PAMAM4.0(EDA)以及聚赖氨酸树枝状聚合物BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4、BHAlyslys2lys4lys8和BHAlyslys2lys4lys8lys16、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64或更高的。
实施例1树枝状聚合物与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应生成磺酸封端的树枝状聚合物A PAMAM1.0将固体碳酸钠(0.13g；1.0mmol)缓慢加入搅拌的2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(0.41g；2.0mmol)的水(3ml)溶液中。在气体停止放出后，该溶液的pH为8.0。然后将PAMAM 1.0(0.12g；0.33mmol)的水(1ml)溶液加入到上述溶液中，随后加入4滴40％的苄基三甲基氢氧化铵水溶液。接着在60℃下和氮气环境中将该溶液加热3天且然后浓缩。使残余物通过凝胶过滤(Sephadex G10；水)纯化且然后冻干至得到磺酸化的PAMAM1.0树枝状聚合物、为一种灰白色固体(0.51g)。1H和13Cnmr光谱证实是二烷基化和一烷基化的PAMAM1.0树枝状聚合物(约70∶30)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.6,51.5,53.1,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.3,179.0,179.8.B PAMAM2.0如上所述使PAMAM2.0与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。使粗产物通过凝胶过滤(Sephadex G10；水)纯化且然后冻干至得到一种灰白色固体(0.51g)。1H和13C nmr光谱证实是二烷基化和一烷基化的PAMAM 2.0树枝状聚合物(约65∶35)的混合物。
13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.7,51.5,53.4,55.6,56.2,5.6,56.2,61.2,61.5,178.4,179.0,179.1,179.6.
当重复上述反应时，略去苄基三甲基氢氧化铵获得了类似的结果。C PAMAM3.0BRI2783除使用稍过量的碳酸钠且不使用苄基三甲基氢氧化铵外，如上所述使PAMAM3.0与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。1H和13Cnmr光谱证实是二烷基化和一烷基化的PAMAM3.0树枝状聚合物(约50:50)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.4,41.1,48.6,51.5,53.4,55.7,56.2,61.1,61.5,178.2,178.9,179.0,179.8.D PAMAM4.0BRI2784如对PAMAM3.0所述使PAMAM4.0与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。1H和13Cnmr光谱证实是二烷基化和一烷基化的PAMAM4.0树枝状聚合物(约35∶65)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.3,41.1,48.5,51.5,53.5,55.7,56.2,61.1,61.5,178.1,178.9,179.0,179.8实施例2磺基乙酰胺钠封端的树枝状聚合物的制备A PAMAM1.0将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.40g；1.5mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入搅拌的PAMAM 1.0(0.18g；0.5mmol)的DMF(3ml)溶液中。当茚三酮试验为阴性时,将所得的黄色溶液在室温下搅拌20分钟。将该溶液浓缩(30°/0.1mmHg)至得到黄色油。使该油分配在水与氯仿之间并分离出水层且用氯仿(2X)洗涤并且最后用乙酸乙酯洗涤。将该水溶液浓缩(35°/25mmHg)至得到溴乙酰化的PAMAM1.0树枝状聚合物、为一种黄色油(0.36g；100％)。13Cnmr(D2O):δ32.8,33.3,43.0,43.5,54.4,174.5,176.4.
将亚硫酸钠(0.2g；1.6mmol)的水(1ml)溶液加入到上述溴乙酰化的PAMAM1.0树枝状聚合物(0.36g；0.5mmol)的水(5ml)溶液中并在室温下使该溶液保持稳定11天。将黄色溶液浓缩至得到一种淡黄色固体(0.60g)。13C nmr(D2O):δ34.4,43.1,43.4,54.0,61.7,171.3,177.2.
通过简单地将亚硫酸钠溶液加入到获自第一次反应的水的粗提取物中可以进行上述反应过程而不需分离溴乙酰化的树枝状聚合物。B PAMAM2.0方法1将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.18g；0.7mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入搅拌的PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)的DMF(3ml)溶液中。当茚三酮试验为阴性时，将所得的黄色溶液在室温下搅拌20小时。然后在涡旋条件下将该溶液加入水(150ml)中并用氯仿(3X)和乙酸乙酯提取该混合物。将亚硫酸钠(0.1g；0.8mmol)的水(1ml)溶液加入到粗溴乙酰化的树枝状聚合物溶液中并在室温下使该混合物保持稳定3天。接着将淡黄色溶液浓缩至得到黄色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到磺基乙酰胺钠封端的PAMAM2.0树枝状聚合物(103mg)。13C nmr(D2O):δ33.0,35.7,36.0,37.7,40.3,43.0,43.2,53.4,53.7,56.0,61.6,171.2,174.6,178.5.方法2将固体乙酰硫乙酸琥珀酰亚胺酯(67mg；0.33mmol)加入到PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)的无水DMF(2ml)溶液中并将所得的溶液在室温下搅拌2天。然后将该混合物浓缩(30°/10-3mmHg)至得到一种油状残余物。使该残余物分配在水和氯仿之间并分离出水层且浓缩至得到粘性油(117mg)。1H和13C nmr证实所述的油是乙酰化树枝状聚合物和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物。凝胶过滤(Sephadex G10；水)产生了乙酰硫基乙酰胺封端的PAMAM2.0树枝状聚合物的纯样品(29mg)。13C nmr(D2O):δ34.0,34.2,37.3,43.0,43.1,43.3,53.5,54.0,56.3,175.4,177.2,177.5.
然后将上述官能化的树枝状聚合物溶于40％水性甲酸(7ml)所得到的溶液加入到新近制备的冰冷的过甲酸(1.6mmol)的甲酸(2ml)溶液中。在0°下将该混合物搅拌1小时且然后在室温下搅拌20小时。接着加入少量活性炭以便分解任何过量的过酸，将该混合物搅拌30分钟且然后过滤并浓缩至得到一种粘性油。
将粗产物溶于水、用碳酸氢钠水溶液将pH调节至9.0并通过Sephadex G10柱使该物质脱盐。在冻干后获得一种白色固体(20mg)，使其进行基本上与方法1获得的物质相同的分光光度法。13C nmr(D2O):δ33.0,38.7,42.9,43.0,43.1,53.9,54.3,56.5,61.6,171.2,176.4,177.0.
实施例3磺基琥珀酰胺酸钠封端的树枝状聚合物的制备A PAMAM1.0将固体马来酐(0.11g；1.1mmol)加入到搅拌的PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的无水DMF(3ml)溶液中。该混合物变成稍温和浅棕色溶解的酸酐并将所得的溶液在室温下搅拌过夜。然后将该溶液浓缩(30°/10-4mmHg)至得到一种粘性油。1H和13C nmr(D2O)证实PAMAM1.0完全转化成三酰胺以及一些马来酸。13C nmr(D2O):δ33.1,42.8,43.1,54.3,135.0,137.1,169.1,171.9,173.3.
然后将三酰胺粗品溶于水(4ml)并加入固体亚硫酸钠(0.20g；1.6mmol)。使所得的溶液在室温下保持稳定4天且然后浓缩。1H和13CnmR(D2O)证实是1:1的区域异构体磺基琥珀酰胺酸钠封端的PAMAM1.0树枝状聚合物与一些磺基琥珀酸的混合物。使粗产物通过凝胶过滤(SephadexG10；水)纯化而得到磺基琥珀酰胺酸钠封端的PAMAM1.0树枝状聚合物样品(107mg)。13C nmr(D2O):δ33.3,39.6,40.0,42.9,43.1,54.0,67.9,69.4,173.8,176.3,177.6,181.8.B PAMAM2.0
如上所述制备区域异构体磺基琥珀酰胺酸钠封端的PAMAM2.0树枝状聚合物的混合物。13C nmr PAMAM2.0马来酰胺酸衍生物(D2O):δ32.8,33.0,38.7,42.9,53.8,54.3,56.5,135.2,136.8,169.2,171.9,173.5,174.6.
13C nmr PAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸钠衍生物(D2O):δ37.0,40.1,41.1,43.0,43.2,43.9,53.0,53.3,55.5,68.0,69.4,173.8,177.6,179.1,179.5,179.8,182.3.C PAMAM4.0BRI6038将固体马来酐(60mg；0.6mmol)加入到搅拌的PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的无水DMF(2ml)溶液中。开始该混合物变浑浊，而不久即得到澄清溶液，将其在室温下搅拌过夜。然后将该溶液浓缩(35°/10-4mmHg)至得到一种粘性油。1H和13C nmr(D2O)证实PAMAM4.0完全转化成聚酰胺以及一些马来酸。然后将聚酰胺粗品溶于水(2ml)并加入亚硫酸钠(126mg；1.0mmol)的水(2ml)溶液。使所得的溶液在室温下保持稳定2天且然后浓缩。1H和13Cnmr(D2O)证实是区域异构体磺基琥珀酰胺酸钠封端的PAMAM4.0树枝状聚合物与一些磺基琥珀酸的混合物。使粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到由24个位置异构的磺基琥珀酰胺酸基团封端的PAMAM4.0树枝状聚合物样品(90mg)。1H nmr(D2O):δ2.4-2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0.13C nmr(D2O):δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3.
实施例4N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺钠封端的树枝状聚合物的制备a N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁铵的制备将固体琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入到搅拌的2-氨乙基磺酸四丁铵(1.83g；5.0mmol)的无水二氯甲烷(30ml)溶液中。琥珀酐缓慢溶解并将所得的浑浊溶液在室温下搅拌过夜。将所得的混合物过滤并将滤液浓缩至得到一种粘性油(2.41g)。13Cnmr证实完全转化成所需的单胺以及少量琥珀酸。通过将二氯甲烷溶液逐滴加入到大量过量的乙醚来重复沉淀产物而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵、为一种白色固体(1.762g；76％),mp125-127℃。1H nmr(CDCl3):δ0.86(t,12h,4xCH3),1.28(m,8H,4xCH2),1.50(m,8H,4xCH2),2.33(m,2H,CH2COOH),2.44(m,2H,CH2CONH),2.76(m,2H,CH2NHCO),3.12(m,8H,4xCH2N),3.50(m,2H,CH2SO3-),7.53(brt,1H,NH).13C nmr(CDCl3):δ13.5,19.5,23.8,30.1,30.9,35.6,50.0,58.5,172.0,174.1.b 4-硝基苯基N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁铵的制备将二环己基碳化二亚胺(45mg；0.22mmol)的无水二氯甲烷(1ml)溶液加入到搅拌的N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(94mg；0.20mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中并将该混合物在室温下搅拌过夜。将所得的混悬液过滤并将滤液浓缩至得到活性酯的粗品，不需进一步纯化而使用它。A N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺钠封端的PAMAM树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI2786将粗品4-硝基苯基N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(0.30mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入到搅拌的PAMAM 4.0(51.5mg；0.01mmol)溶于50％DMF水溶液(3ml)所得到的溶液中并将所得的黄色溶液在室温下搅拌过夜。然后该将该混合物浓缩(35°/10-5mmHg)并使黄色残余物分配在水与氯仿之间。分离出水层、用氯仿(2X)和乙酸乙酯洗涤且然后浓缩至得到黄色油(134mg)。将粗产物通过Amberlite IR 120(Na)柱转化成钠盐而得到85mg的物质。将该物质进一步通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)过滤而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠封端的PAMAM 4.0树枝状聚合物(45mg)。13C nmr(D2O):δ33.2,33.6,35.5,39.0,39.5,42.8,43.2,53.8,54.1,54.4,56.6,176.5,176.9,177.2,178.9,179.4.
按照类似方法制备相应的用N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺钠基团封端的PAMAM1.0和PAMAM3.0(BRI2785)树枝状聚合物。13C nmr PAMAM3.0衍生物(D2O):δ33.4,35.5,39.0,39.5,42.9,43.2,53.8,54.1,54.3,56.5,176.4,176.9,177.4,178.9,179.4.13C nmr PAMAM1.0衍生物(D2O):δ34.9,35.5,39.5,42.9,43.1,53.7,54.1,179.0,179.1,179.3.B N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺钠封端的聚赖氨酸树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2789将三氟乙酸(1ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(36.5mg；5.0μmol)的无水二氯甲烷(1ml)混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩。将残余物溶于无水DMSO(2ml)并用三乙胺将pH调节至8.5。接着逐滴加入粗品4-硝基苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(约0.2mmol)的DMSO(1ml)黄色溶液并在室温下将该混合物搅拌过夜。然后将黄色溶液浓缩(50°/10-5mmHg)并使黄色残余物分配在水和氯仿之间。分离出水层、用氯仿(3X)和乙酸乙酯洗涤且然后浓缩至得到一种油(99mg)。将粗产物通过Amberlite IR 120(Na)柱转化成钠盐而得到81mg的物质。将该物质进一步通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16树枝状聚合物(39mg)。13C nmr(D2O):δ27.0,32.3,35.2,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.5,132.0,133.3,145.1,177.8,178.0,178.4,178.8,178.9,179.2,179.7,179.8.
按照类似方法制备相应的用N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺钠基团封端的BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4(BRI2787)、BHAlyslys2lys4lys8(BRI2788)。13C nmr BHAlyslys2lys4lysx衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.6,131.9,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.2,177.2,177.8,177.9,178.0,178.2,178.3,178.6,178.7,178.8,178.9,179.2,179.3,179.7,179.8.13C nmr BHAlyslys2lys4衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.4,35.7,35.8,39.5,43.5,54.1,58.5,61.8,131.7,132.0,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.1,177.3,178.0,178.3.178.4,178.7,178.9,179.0,179.3,179.7,179.8.13C nmr BHAlyslys2衍生物(D2O):δ26.9,27.1,32.2,32.3,34.7,34.8,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.4,54.1,58.6,61.8,131.7,131.9,132.2,132.3,133.3,144.9,145.0,177.7,178.4,178.8,179.0,179.3,180.0.
实施例54-磺基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备A PAMAM4.0BRU2791将固体4-磺基苯基异硫氰酸钠一水合物(500mg；1.96mmol)加入到PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)的水(10ml)溶液中并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使黄色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并冻干至得到4-磺基苯基硫脲钠封端的PAMAM4.0树枝状聚合物、为一种松散的白色固体(370mg)。
1H nmr(D2O):δ2.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4.
按照类似方法制备相应的分别用3、6、12和48个4-磺基苯基硫脲钠基团封端的PAMAM1.0、PAMAM2.0(BRU2790)、PAMAM3.0和PAMAM5.0(BRU2991)树枝状聚合物。B PAMAM4.0(EDA)BRU6045将固体4-磺基苯基异硫氰酸钠一水合物(130mg；0.5mmol)加入到PAMAM 4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并冻干至得到用32个4-磺基苯基硫脲钠基团封端的PAMAM4.0、为一种松散的白色固体(136mg)。1H nmr(D2O):δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；178.5；179.0；184.5.C BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2792在氮气环境中将三氟乙酸(4ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(0.73g；0.1mmol)的无水二氯甲烷(4ml)混悬液中。观察到有短时间的剧烈的气体放出并将所得溶液在室温下搅拌2小时且然后浓缩。将残余的糖浆状物溶于水(5ml)、使该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并将滤液浓缩至得到BHAlyslys2lys4lys8lys16、为一种粘性油(0.49g)。将该油重新溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙基胺缓冲液(pH9.5；3ml)。然后加入固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(1.30g；5.1mmol)并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使浅棕色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分、过Amberlite IR 120(Na)柱并冻干至得到4-磺基苯基硫脲钠封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16树枝状聚合物、为一种松散的白色固体(374mg)。1H nmr(D2O):δ1.40；1.72；3.08；3.42；4.24；4.60；7.30；7.40(d,J=9Hz)；7.78(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ27.3；32.5；35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；185.2.
按照类似方法制备相应的分别用16、64和128个4-磺基苯基硫脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32(BRI2992)和BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64(BRI2993)树枝状聚合物。
实施例63,6-二磺基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备A PAMAM4.0BRI2923将固体3,6-二磺基萘基异硫氰酸钠(160mg；0.41mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使棕色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并浓缩至得到3,6-二磺基萘基硫脲钠封端的PAMAM4.0树枝状聚合物、为一种棕色固体(73mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28.13C nmr(D2O):δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4；128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5.
按照类似方法制备相应的用3,6-二磺基萘基硫脲钠基团封端的PAMAM2.0树枝状聚合物。B PAMAM4.0(EDA)BRI6046将固体3,6-二磺基萘基异硫氰酸钠(220mg；0.57mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使浅棕色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并浓缩至得到用32个3,6-二磺基萘基硫脲钠基团封端的PAMAM4.0、为一种褐色固体(148mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25.13C nmr(D2O):δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；145.5；146.0；178.2；1 85.6.C BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2999在氮气环境中将三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(73mg；0.01mmol)的无水二氯甲烷(2ml)混悬液中。观察到有短时间的剧烈的气体放出并将所得溶液在室温下搅拌2小时且然后浓缩。将残余的糖浆状物溶于水(5ml)、使该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并将滤液浓缩至得到BHAlyslys2lys4lys8lys16、为一种粘性油。将该油重新溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙基胺缓冲液(pH9.5；3ml)。然后加入固体3,6-二磺基萘基异硫氰酸钠(234mg；0.60mmol)并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使浅棕色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分、过Amberlite IR120(Na)柱并冻干至得到用32个3,6-二磺基萘基硫脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16、为一种松散的灰白色固体(119mg)。1H nmr(D2O):δ1.0-2.0；3.18；3.43；4.31；7.22；7.80；7.89；8.25.13C nmr(D2O):δ 27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；186.7.
实施例74-磺基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI2997将固体4-磺基萘基异硫氰酸钠(180mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中并将该混合物在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。在减压条件下从所得的混悬液中蒸馏出水并使黄白色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并冻干至得到4-磺基萘基硫脲钠封端的PAMAM4.0树枝状聚合物、为一种松散的白色固体(60mg)。1Hnmr(D2O):δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d,J=6Hz)；8.56(d,J=6Hz).13C nmr(D2O):δ35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4.
实施例83,5-二磺基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6039将固体3,5-二磺基苯基异硫氰酸钠(110mg；0.32mmol)加入到PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)的水(3ml)溶液中并将所得溶液在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该溶液浓缩并使浅棕色固体残余物通过凝胶过滤(Sephadex G25；水)纯化。合并纯的级分并浓缩至得到用24个3,5-二磺基苯基硫脲钠基团封端的PAMAM4.0、为一种灰白色固体(110mg)。1H nmr(D2O):δ2.53；3.08；3.36；3.66；7.90；7.95.13C nmr(D2O):δ34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；143.5；148.8；177.6；185.0.
实施例93,6,8-三磺基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI2998将固体3,6,8-三磺基萘基异硫氰酸钠(250mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N,N-二甲基-N-烯丙基胺缓冲液(pH9.5；1ml)的水(2ml)溶液中并将该混合物在53°下和氮气环境中加热2小时且然后冷却。将该混合物在减压条件下浓缩至得到橙色固体。将残余的固体溶于水(2ml)并使其通过Amberlite IR-120(Na)的短柱。然后将滤液浓缩并使残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化。合并纯的级分并冻干至得到3,6,8-三磺基萘基硫脲钠封端的PAMAM4.0树枝状聚合物、为一种灰白色固体(102mg)。
1H nmr(D2O):δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67.13C nmr(D2O):δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0.
按照类似方法制备相应的3,6,8-三磺基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物BHAlys.lys2lys4lys8lys16BRI7011。
实施例104-(磺基甲基)苯甲酰胺钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6040将固体4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(200mg；0.68mmol)加入到搅拌的PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)的无水DMSO(4ml)溶液中并将所得的黄色溶液在室温下搅拌2小时。然后将该溶液浓缩(10-4mmHg；40°)并用水和二氯甲烷(1∶1)的混合物提取残余物。将剩余的固体物质溶于DMSO(5ml)并加入亚硫酸钠(130mg；1mmol)的水(3ml)溶液。使所得的轻度浑浊的混合物保持稳定4天，此后添加过量的水(2ml)而导致形成澄清均匀的黄色溶液。然后将该溶液首先在25mmHg和40°、接着在10-4mmHg和50°下浓缩至得到粗产物。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex G25；水)纯化而得到用24个4-(磺基甲基)苯甲酰胺钠基团封端的PAMAM4.0(24mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.66；3.08； 3.20；3J3；3.38；4.01；7.40(brd)；7.62(br d).13C nmr(D2O):δ36.7；40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2.
实施例114-磺基苯甲酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6116将固体N-羟基琥珀酰亚胺基4-磺基苯甲酸钾(100mg；0.3mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol)溶于0.1M、pH8.5的硼酸盐缓冲液(5ml)所得到的溶液中并将该溶液在室温下搅拌2小时。在该阶段产生的乳白色溶液具有的pH为4.5。然后加入1M碳酸钠溶液(1ml)而得到一种澄清溶液，将该溶液浓缩至得到粗产物、为一种白色固体。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex G25；水)纯化而得到用32个4-磺基苯甲酰胺钠基团封端的PAMAM4.0(EDA)(47mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.42；2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d,J=8Hz)；7.78(d,J=8Hz).13C nmr(D2O):δ 36.0；40.4；43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5.
实施例12N-(4-磺基苯基)丙酰胺钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6117将固体N-(4-磺基苯基)丙烯酰胺钠(250mg；1mmol)和固体碳酸钠(106mg；1mmol)依次加入到搅拌的PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)的水(4ml)溶液中。在所得溶液在氮气环境中搅拌4天且然后冻干至得到一种松散的白色固体。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个N-(4-磺基苯基)丙酰胺钠基团封端的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。13C nmr证实了有极微量转化成了一烷基化的末端氨基。1H nmr(D2O):δ2.10；2.48；2.58；2.79；3.20；7.42(d,J=7Hz)；7.65(d,J=7Hz).13C nmr(D2O):δ36.5；37.9；41.1；53.4；55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5.
实施例134-磺基苯基脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6115将磺胺酸钠(195mg；1mmol)的无水DMSO(3ml)溶液逐滴加入到N,N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(530mg；2mmol)的无水DMSO(4ml)溶液中并将所得的浅棕色溶液在室温下搅拌20小时。加入PAMAM4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)的无水DMSO(1ml)溶液并将该溶液进一步搅拌18小时。然后在高度真空(10-5mmHg；35°)下将该溶液浓缩至得到一种浅黄色半固体。将该粗产物溶于DMSO(4ml)并将该溶液加入到200ml的经充分搅拌的乙酸乙酯中。通过过滤收集沉淀的白色固体并用乙酸乙酯(2X)和乙醚(2X)洗涤，然后干燥至得到一种白色粉末(275mg)。使该物质进一步通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用32个4-磺基苯基脲钠基团封端的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。lH nmr(D2O):δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d,J=9Hz)；7.63(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；140.9；146.0；161.4；178.2；178.6.
实施例14N,N,N-三甲基甘氨酰胺氯化物封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2922将三氟乙酸(4ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(220mg；30μmmol)的无水二氯甲烷(2ml)混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后冷却。将残余物溶于无水DMSO(5ml)并用三乙胺将pH调节至8.5。然后加入固体4-硝基苯基N,N,N-三甲基甘氨酸氯化物(0.50g；1.8mmol)并将该混合物在室温下搅拌过夜。接着浓缩浑浊的溶液(50°/10-5mmHg)并使残余物分配在水与二氯甲烷之间。分离出水层、用二氯甲烷(3X)和乙酸乙酯洗涤且然后浓缩至得到一种油(1.128g)。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到N,N,N-三甲基甘氨酰胺封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16树枝状聚合物(116mg)。13C nmr(D2O):δ25.5,30.5,30.8,33.4,42.1,56.5,57.1,67.5,68.1,166.7,167.0,167.1,176.0,176.2.
实施例154-三甲铵苯甲酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6043将1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入到4-三甲铵苯甲酸碘化物(154mg；0.5mmol)的无水DMF(4ml)溶液中并将所得混合物在室温下和氩气环境中搅拌2小时。在此期间，从该溶液中析出白色固体。然后加入PAMAM4.0(58；0.011mmol)的无水DMF(2ml)溶液并将该混合物在室温下搅拌过夜。此后大部分沉淀已经溶解且溶液的茚三酮试验呈阴性。将该混合物浓缩(10-4mmHg；30°)至得到一种白色固体残余物。使该粗产物进一步通过凝胶过滤(Sephadex LH20；10％AcOH)纯化而得到用24个4-三甲铵苯甲酰胺基团封端的PAMAM4.0、为乙酸盐(89mg)。1H nmr(D2O):δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92.13C nmr(D2O):δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6.
按照类似方法制备相应的用6个4-三甲铵苯甲酰胺基团封端的PAMAM2.0树枝状聚合物。
实施例164-(三甲铵甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6044将固体4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(150mg；0.5mmol)加入到搅拌的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)的无水DMSO(3ml)溶液中。当茚三酮试验呈阴性(pH约为8.5)时，将所得的黄色溶液在室温下搅拌20小时。然后浓缩该溶液(10-5mmHg；40°)并将残余物与水和二氯甲烷(1∶1)的混合物一起振摇。通过过滤收集不溶性的凝胶样物质、用水(2X)和二氯甲烷(2X)洗涤且然后风无水。将4-(氯甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物粗品溶于25％的三乙胺水溶液(20ml)并使黄色溶液保持稳定过夜。然后将该溶液浓缩、将残余物溶于水(5ml)并使该溶液过Amberlite IRA-401(OH)柱。将无色滤液浓缩至得到一种粘性油，使其通过凝胶过滤(Sephadex G10；10％AcOH)纯化而得到用24个4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺基团封端的PAMAM4.0(90mg)。1H nmr(D2O):δ1.88；2.65-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(brd,J=9Hz)；7.72(brd,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6.
实施例17N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0将固体1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入到溴化N-(2-乙酰氧基乙基)-N-(羧甲基)-N,N-二甲铵(135mg；0.5mmol)的无水DMF(3ml)溶液中并将所得溶液在氮气环境中搅拌2小时。然后加入PAMAM4.0(60mg；0.012mmol)的DMF(2ml)溶液中，该过程瞬间形成可缓慢再溶解的絮状沉淀。将该混合物搅拌2天且然后浓缩(10-4mmHg；40°)至得到一种粘性油。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex G10；10％AcOH)纯化而得到用24个N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺基团封端的PAMAM4.0(64mg)。1Hnmr(D2O):δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m).13C nmr(D2O):δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；176.4；176.8；177.3；183.2.
实施例18胍基封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6042将PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和硫酸甲硫假脲酯(170mg；0.61mmol)的水(5ml)溶液(pH 10.5)在80°和氮气环境中加热2小时。然后将该溶液浓缩并使残余物通过凝胶过滤(Sephadex G10；10％AcOH)纯化而得到用24个胍基基团封端的PAMAM4.0、为乙酸盐(107mg)。1H nmr(D2O):δ2.00；2.80(brt)；3.09(brt)；3.32；3.45(brt)；3.60(brt)13C nmr(D20):δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6.
按照类似方法制备相应的用6个胍基基团封端的PAMAM2.0树枝状聚合物。
实施例194-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0BRI6041在室温下使1-(4-羧苯基)甲基-1,4,8,11-四氮杂环十四烷四盐酸盐(120mg；0.25mmol)、N-羟基琥珀酰亚胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(250mg；1.3mmol)溶于pH为7的磷酸盐缓冲液(10ml)所得到的溶液在室温下保持稳定1小时且然后加入PAMAM4.0(32mg；0.006mmol)溶于pH7的磷酸盐缓冲液(10ml)所得到的溶液。使该混合物保持稳定2天且然后浓缩。使残余物通过凝胶过滤(Sephadex G10；10％AcOH)纯化而得到如1H和13C nmr所测定的用约12个4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺基团封端的PAMAM4.0(80mg)。接着将该产物溶于水并过Amberlite IRA-401(Cl)树脂柱且然后浓缩。将残余物溶于水(1ml)、加入浓HCl(1ml)并用乙醇(30ml)稀释该溶液而沉淀出一种白色固体。通过过滤收集该固体。1H和13C nmr再次证实末端氨基基团中约50％官能化。1H nmr(D2O):δ2.17；2.36；2.50；2.78；2.85；3.25；3.40；3.50；3.60；3.62；4.49；7.63(br d)；7.78(br d).13Cnmr(D2O):δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5.
实施例204-羧基-3-羟基苄胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6119将氰基硼氢化钠(32mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)、4-甲酰基-2-羟基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和碳酸氢钠(42mg；0.5mmol)的水(4ml)混合物中。将不均匀的橙色混合物在室温下搅拌4小时。在此期间它变均匀。然后将该橙色溶液浓缩并使残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用约32个4-羧基-3-羟基苄胺基团封端的PAMAM4.0(EDA)(91mg)。1H和13C nmr(D2O)证实末端氨基中大部分一烷基化而某些二烷基化，两种光谱均显示出宽峰。13C nmr(D2O):δ37.0；41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；163.5；163.7；169.0；178.6；179.3.1H nmr(D2O):δ 2.20；2.35；2.60；3.1 5；3.30；3.55；4.25；6.68；7.12；7.55.
实施例214-羧基苯基酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-羧苯基异硫氰酸酯(86mg；0.48mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。用饱和NaHCO3将所得浑浊溶液的pH调节至9并在室温下持续搅拌24小时。然后将反应混合物过滤将滤液浓缩至得到一种白色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化且然后冻干至得到白色松散固体产物(68mg)。
实施例223,5-二羧基苯基酰胺封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体3,5二羧苯基异硫氰酸酯(112mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。用1MNa2CO3溶液将所得浑浊溶液的pH调节至10并在53°下和氮气环境中加热2小时。然后将反应混合物过滤将滤液浓缩至得到一种浅棕色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化且然后冻干至得到浅棕色松散固体产物(112mg)。
实施例234-膦酰基氧基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-膦酰基氧基苯基异硫氰酸钠(251mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。将所得溶液(pH9)在室温下和氮气环境中搅拌24小时。然后将反应混合物浓缩至得到一种白色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH0；水)纯化且然后冻干至得到白色松散固体产物(86mg)。
实施例244-(膦酰基甲基)苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-(膦酰基甲基)苯基异硫氰酸钠(97mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(30ml)溶液中。将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌3天，通过定期添加饱和NaHCO3溶液将pH维持在8。然后将反应混合物浓缩至得到一种白色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化且然后冻干至得到白色松散固体产物(102mg)。
实施例25乙基4-(膦酰基甲基)苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体乙基4-(膦酰基甲基)苯基硫脲异硫氰酸钠(109mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的DMF(30ml)溶液中。将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌17小时，通过定期添加饱和NaHCO3溶液将pH维持在8。然后将反应混合物浓缩至得到一种白色固体残余物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化且然后冻干至得到白色松散固体产物(30mg)。
实施例26Cn-烷基连接的2-硫代唾液酸糖苷(thiosialoside)封端的树枝状聚合物的制备通过下列步骤制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸(α-D-galacto-2-nonulopyranosid)onate)甲酯。
向5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖酸(α-D-galacto-2-nonulopyranosonate)甲酯(Hasegawa等，1986)(100mg)的无水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入8-溴辛酸(41mg)和二乙胺(280mg)并将该溶液在20℃下搅拌17小时。在真空中除去溶剂并使残余物分配在乙酸乙酯和5％冰冷的盐酸之间。将有机层用水洗涤、用硫酸钠干燥并蒸发至得到残余物(130mg)。将其溶于乙酸乙酯(5ml)并加入N-羟基琥珀酰亚胺(26mg)和二环己基碳化二亚胺(46mg)。将该混合物在20℃下搅拌17小时，然后过滤出白色沉淀。浓缩滤液并通过使用乙酸乙酯洗脱的硅胶闪蒸色谱法纯化。合并含有产物的级分并蒸发至得到97mg、71％的白色泡沫。
以类似方式制备下列物质[(11-十一酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(乙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(4-丁酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(4-甲基苯甲酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯。A PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸(2-nonulopyranosidoic acid)]32BRI6112在惰性气体环境中向PAMAM[EDA]4.0(50mg)的无水二甲亚砜(4ml)溶液中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(300mg)并将该溶液在20℃下搅拌60小时。在真空中除去溶剂并将残余物溶于甲醇(2ml)。将该溶液在Sephadex LH20上进行大小排阻层析、用甲醇洗脱。在蒸发溶剂时，获得182mg、93％的产物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32、为一种白色粉末。
通过下列方法将其转化成游离的唾液酸糖苷(sialoside)在20℃下和氩气环境中向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32(182mg)的无水甲醇(3ml)溶液中加入新近制备的0.19M甲醇钠的甲醇(7ml)溶液并将该混合物搅拌2.5小时。蒸发溶剂并将残余物溶于水(10ml)且搅拌3小时。将该溶液在Sephadex LH20上进行大小排阻层析、用水洗脱。在冻干时，获得110mg、77％的产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、为一种浅柠檬色粉末。
通过类似步骤制备下列物质PAMAM[EDA]4.0[(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6147；PAMAM[EDA]4.0[(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6121；PAMAM[EDA]4.0[(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6120；BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6169。
在20℃下，将BHAlyslys2lys4lys8lys16(t-Boc)32(20.3mg)溶于三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)混合物所得到的溶液搅拌2小时，然后在真空中除去溶剂。将残余物溶于无水二甲亚砜(1ml)并加入二异丙基乙胺(25mg)和[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(78mg)。在20℃下和氩气环境中将该混合物搅拌60小时，然后在真空中除去溶剂。将残余物溶于新近制备的0.1M甲醇钠的甲醇(2.5ml)溶液并在20℃下和氩气环境中将该混合物搅拌3小时。蒸发溶剂并将残余物溶于水(1ml)并搅拌17小时。将该溶液在Sephadex LH20上进行大小排阻层析、用水洗脱。在冻干后，获得44mg、86％的产物BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、为一种白色粉末。
实施例27唾液酸4-位上修饰的树枝状唾液酸糖苷(sialoside)的制备通过下列步骤制备4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5,-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸甲酯。向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-氯-3,4,5,-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酮酸甲酯(Sabesan,1994)(5g)的无水二氯甲烷(150ml)溶液中加入细粉状的硫羟乙酸钾(5.8g)并在20℃下将该混悬液剧烈搅拌48小时。将该混合物过滤并蒸发至得到浅棕色泡沫(5.2)。通过制备型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]分离所需产物、为一种白色泡沫(3.9g,72％)。
通过下列步骤制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯。
向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5,-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸甲酯(300mg)的无水二甲基甲酰胺(3.5ml)溶液中加入8-溴辛酸(155mg)和二乙胺(1.26ml)并在20℃下将该溶液搅拌17小时。在真空中除去溶剂并使残余物分配在乙酸乙酯和10％冰冷的盐酸之间。将有机层用水洗涤、用硫酸钠干燥并蒸发至得到一种黄色泡沫(385mg)。将其溶于乙酸乙酯(20ml)并加入N-羟基琥珀酰亚胺(95mg)和二环己基碳化二亚胺(175mg)。在20℃下将该混合物搅拌17小时，然后过滤出白色沉淀。将滤液浓缩并通过制备型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]纯化而得到一种白色泡沫(340mg,83％)。A PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6146在惰性气体环境中向PAMAM[EDA]4.0(72mg)的无水二甲亚砜(5ml)溶液中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(318mg)并将该溶液在20℃下搅拌60小时。在真空中除去溶剂并将残余物溶于甲醇(2ml)。将该溶液在Sephadex LH20上进行大小排阻层析、用甲醇洗脱。在蒸发溶剂时，获得225mg、81％的产物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32、为一种白色泡沫。
通过下列方法获得游离的唾液酸糖苷(sialoside)在20℃下和氩气环境中向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32(215mg)的无水甲醇(1ml)溶液中加入新近制备的1M甲醇钠的甲醇(1ml)溶液并将该混合物搅拌3小时。蒸发溶剂并将残余物溶于水(2ml)且搅拌17小时。将该溶液在Sephadex LH20上进行大小排阻层析、用水洗脱。在冻干时，获得160mg、90％的产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、为一种松散的白色粉末。B PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6149在20℃下使硫化氢气流缓慢通过PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32(25mg)溶于吡啶(40ml)和水(20ml)的混合物所得到的溶液中5天。然后用氮气使该溶液发泡2小时以便除去过量的硫化氢。将该溶液蒸发至无水并将残余物溶于水(5ml)且通过0.45μm的滤膜过滤以除去硫。在冻干时，获得23mg、96％的产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、为一种松散的白色粉末。
实施例28硼酸封端的树枝状聚合物的制备4-羧基苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯向-羧苯基硼酸(500mg)的无水二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(380mg)和二环己基甲酰胺(680mg)。在20℃下将该混合物搅拌64小时，然后过滤出白色沉淀。在真空中除去溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯(100ml)。将该溶液用水洗涤、用硫酸钠干燥并蒸发至得到一种白色固体，使其从乙腈/水中结晶、为细针状体(730mg,92％)。PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32BRI6160在惰性气体环境中向PAMAM[EDA]4.0(69mg)的无水二甲亚砜(5ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(130mg)并将该溶液在20℃下搅拌65小时。向该浑浊的淤浆中加入1M碳酸钠溶液(1ml)并将澄清溶液再搅拌24小时。在真空中除去溶剂并将残余物溶于10％的氨溶液(5ml)。将该溶液在Sephadex LH20柱上进行大小排阻层析，用10％氨溶液洗脱。在蒸发溶剂时，获得110mg、94％的产物PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32、为一种白色松散固体。
实施例293,6-二磺基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg)的无水二氯甲烷(2ml)搅拌的混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺缓冲液(pH9.5；5ml)且然后加入固体异硫氰酸3,6-二磺基萘基酯(400mg)。接着通过加入1M碳酸钠将该混合物的pH调节至9.5并在53℃下和氮气环境中将该溶液加热3小时。并将该反应混合物浓缩并将残余物重新溶于水且使该溶液过Amberlite IR120(Na)柱。将滤液浓缩至得到粗产物，使其通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个3,6-二磺基萘基硫脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、为一种白色松散固体(175mg)。
实施例303,5-二磺基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(3ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02ml)的无水二氯甲烷(3ml)搅拌的混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩。将残余物溶于水并使该溶液过Amberlite IR401(OH)柱并将滤液浓缩至得到一种粘性油(187mg)。将该油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)并加入异硫氰酸3,5-二磺苯基酯(680mg；2mmol)。将所得溶液在53℃下和氮气环境中加热3小时。然后将该溶液浓缩至得到一种白色固体残余物。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个3,6-二磺基苯基硫脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、为一种白色松散固体。
实施例313,5-二羧基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6741将三氟乙酸(3ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02ml)的无水二氯甲烷(3ml)搅拌的混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩。将残余物溶于水并使该溶液过Amberlite IR401(OH)柱并将滤液浓缩至得到一种粘性油(186mg)。将该油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)并加入异硫氰酸3,5-二羧苯基酯(450mg；2mmol)。将所得溶液在53℃下和氮气环境中加热13小时。然后将该溶液浓缩至得到一种白色固体残余物。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个3,6-二羧基苯基脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、为一种白色松散固体。
以类似方式制备3,5-二羧基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物PAMAM4.0(EDA)BRI6195。
实施例324-膦酰基氧基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6181将三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01ml)的无水二氯甲烷(2ml)搅拌的混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩至得到一种粘性油。将该油溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺(pH9.5；5ml)并加入固体异硫氰酸4-膦酰基氧基苯基酯(250mg)。用1M碳酸钠将该所得溶液的pH调节至10并在53℃下和氮气环境中将该溶液加热3小时。然后将该溶液浓缩至得到一种白色固体残余物。将该残余物重新溶于水并使该溶液过Amberlite IR120(Na)柱且浓缩滤液。然后使该残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个4-膦酰基氧基苯基脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、为一种白色松散固体(150mg)。
实施例334-膦酰基苯基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01ml)的无水二氯甲烷(2ml)搅拌的混悬液中并将所得溶液在室温下和氮气环境中搅拌2小时且然后浓缩至得到一种粘性油。将该油溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺(pH9.5；5ml)并加入固体异硫氰酸4-膦酰基苯基酯(250mg)。用饱和碳酸氢钠溶液将该所得溶液的pH调节至9并在53℃下和氮气环境中将该溶液加热3小时。然后将该溶液浓缩至得到一种白色固体残余物。将该残余物重新溶于水并使该溶液过Amberlite IR120(Na)柱且浓缩滤液。然后使残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用64个4-膦酰基苯基脲钠基团封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6196,在冻干后得到一种白色松散固体(152mg)。
实施例344,6-二膦酰基萘基硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0将异硫氰酸4,6-二膦酰基萘基酯(165mg)的水(2ml)溶液加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。用饱和碳酸氢钠溶液将该混合物的pH调节至9.5并将该混合物在室温下剧烈搅拌1小时且然后在53℃下和氮气环境中加热3小时。接着将该混合物过滤并将滤液浓缩至得到一种棕色固体残余物。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex G25；水)纯化而得到用24个4,6-二膦酰基萘基硫脲钠基团封端的PAMAM4.0，在冻干后得到一种棕色固体(81mg)。
实施例35荧光素硫脲封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体异硫氰酸荧光素酯(188mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中。加入饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至9并将所得的均匀溶液在室温下搅拌过夜且然后浓缩。使橙色残余物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用21个荧光素硫脲基团封端的PAMAM4.0(EDA)，在冻干后得到一种松散的橙色固体(193mg)。
实施例36(苯基-3-硼酸)硫脲钠封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体(苯基-3-硼酸)异硫氰酸酯(100mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。将1M碳酸钠加入到溶解的异硫氰酸酯中(pH约为10)。然后在53℃下和氮气环境中将该混合物加热2小时、接着过滤并将滤液浓缩至得到一种浅棕色固体残余物。使该粗产物通过凝胶过滤(Sephadex LH20；水)纯化而得到用32个(苯基-3-硼酸)硫脲基团封端的PAMAM4.0(EDA)，在冻干后得到一种白色松散固体(87mg)。
实施例37吡啶鎓十二烷基羧酰氨基-(Pyridinium dodecyl carboxamido-)封端的树枝状聚合物的制备PAMAM2.0树枝状聚合物BRI-6807从0.5ml的MeOH溶液中蒸发出PAMAM2.0代的核(0.0479mmol；50mg)且然后将其重新溶于10ml的水。向该溶液中加入1-N-吡啶鎓12-十二酸溴化物(0.14g；0.384mmol)、N-羟基苯并三唑水合物[HOBT](52mg；0.384mmol)、三乙胺(53μl；0.384mmol)和盐酸1-(3-二乙氨基丙基-3-乙基)碳化二亚胺[EDC](74mg；0.384mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下使体积减少至三分之一并使该溶液在LH20柱上进行层析，用水作洗脱剂。收集含有产物的级分并通过冻干分离出吡啶鎓十二烷基羧酰胺PAMAM2.0溴化物、为一种松散的白色固体。1H nmr(D2O):δ1.15,1.45,1.9,2.15,2.75,2.8,3.15,3.35,3.5,4.55,8.05,8.5,8,8.PAMAM4.0树枝状聚合物BRI-6809从1.0ml的MeOH溶液中蒸发出PAMAM4.0代的核(0.05mmol；69mg)且然后将其重新溶于15ml的水。向该溶液中加入1-N-吡啶鎓12-十二酸溴化物(0.143g；0.4mmol)、N-羟基苯并三唑水合物[HOBT](77mg；0.4mmol)、三乙胺(56μl；0.4mmol)和盐酸1-(3-二乙氨基丙基-3-乙基)碳化二亚胺[EDC](77mg；0.4mmol)。
将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压条件下使体积减少至三分之一并使该溶液在LH20柱上进行层析，用1％的三乙胺水溶液作洗脱剂。收集含有产物的级分并通过冻干分离出吡啶鎓十二烷基羧酰胺PAMAM溴化物4.0、为一种松散的白色固体。使少量产物与乙酐反应而证实该树枝状聚合物核的NH2端基被完全封端。1H nmr(D2O):δ1.10,1.45,1.9,2.1,2.30,2.5,2.7,3.2,4.5,8.00,8.45,8.80.
实施例38糖精封端的树枝状聚合物的制备PAMAM4.0树枝状聚合物BRI-6157向乙二胺核PAMAM4.0树枝状聚合物核(275mg；39.8μM)的无水二甲基甲酰胺(25ml)溶液中加入6-(苯并硫酰亚氨基)异硫氰酸酯(400mg；1.67mM)并将该混合物在室温下搅拌24小时。通过用碳酸钠溶液将pH调节至pH10-10.5而使浑浊溶液澄清。将该溶液再搅拌24小时并在旋转蒸发器上除去挥发性物质。将该溶液在大SephadexLH20柱上进行层析并收集前面的级分。收集剩余的级分并重新在小柱上进行层析。蒸发合并的前面的级分并冻干至得到糖精封端的树枝状聚合物产物(450mg；78％)、为一种松散的白色固体。1H nmr(D2O):δ2.20,2.50 3.23,3.46,3.63,7.52,7.87.
按照类似方式制备糖精封端的BHA.lys.lys2lys4.lys8.lys16.lys32…树枝状聚合物BRI-6189。
实施例39体外抗寄生物试验I进行下列试验作为体外试验以用于测试抑制锥虫的作用。A 材料和方法培养基Balz-MEM”+10％加热失活的马血清锥虫菌株 STB900(克隆自STIB704的T.b.rhodesiense)STB920(克隆自STIB348的T.b.brucei)STB930(克隆自STIB754的T.b.gambiense)标准药物 硫胂密胺(Arsobal,Specia,France)，喷他脒(Pentacarinat,Rhone-Poulenc),苏拉明(Germanin,Bayer,Germany)培养条件 在37℃下和5％CO2的湿润环境中72小时。测试系统 96孔微量滴定平板；100μl/孔；200-1000个锥虫/孔(根据菌株来决定)并使用两个终点读数进行评估评估 a．通过MIC的显微测定b．在添加BCECF/AM后进行荧光读取或使用Coulter计数器或CASY进行计数药物制备液10mM 10％溶剂(DMSO、乙醇等)的储备溶液，最高药物浓度为50μM。
具体测试步骤本试验基于LILIT低接种物浓度和长培养期试验(Brun和Lun Vet《寄生物》(Par.)52(1994)37-46)1.将50μl的完全培养基加入到横行B-H、纵行2-10的96孔平板(标记的孔)中；2．将75μl的含有两次最高测试用药物浓度的培养基加入到B-D(D1)和F-H(D2)11号纵行的孔中；3．使用多用移液管通过将来自11号孔的25μl转入10号孔制备系列稀释液并通过吸取和最少10次分配培养基进行混合。
4．从左至右方向连续稀释，直到将25μl从5号孔加至4号孔为止。在混合后，弃去剩余的25μl。将每横行中的2号和3号孔用作不含药物的对照孔。
5．以4×103/ml的接种密度将50μl锥虫混悬液加入到所述平板的2-11号孔的B、C和F、G孔(制成200/孔)。将不含锥虫的50μl Balz培养基加入到2-11号孔的D和E横行中作为用于荧光试验的背景对照。
6．在37℃、5％CO2下培养平板。
7．在反向显微镜下观察以便用显微镜测定MIC(最低抑制浓度)可以观察到最低药物浓度，在此浓度下，与对照孔相比没有正常形态和游动的锥虫或在此浓度下没有锥虫存活。
8．通过在添加BCECF/AM后的荧光读数或通过用Coulter计数器的生长抑制评价可以进一步评估本试验。B．结果测试下列树枝状聚合物。
(ⅰ)在72小时荧光试验中测试4种化合物在体外对T.b.rhodesiense(SYIB900)的活性。以4mg/ml的浓度将所有化合物溶于蒸馏水且然后稀释至在完全培养基中的所需浓度。
MIC=最低抑制浓度(没有锥虫存活)MIC=最高耐受浓度(没有药物效应)(ⅱ)在72小时荧光试验中测试5种化合物在体外对T.b.rhodesiense(SYIB900)的活性。以20μg/ml的浓度将所有化合物溶于蒸馏水且然后按1∶10稀释入完全培养基(BMEM+10％HI马)。
Ⅱ在用于测试抑制锥虫属(T)和疟原虫属(P)种类的体外试验中获得下列试验结果。测试下列化合物
使用下列菌株进行测试寄生物 菌株 阶段 标准药物T.b.rhodesiense STIB900锥鞭毛体硫胂密胺恶性疟原虫NF54 所有阶段 氯喹结果(所有值均为μg/ml)
实施例40抗菌活性的测定本试验中所用的细菌是金黄色葡萄球菌(ATCC29213)粪肠球菌(ATCC29212)大肠杆菌(ATCC25922)通过使用2-5×104cfu(对数期)接种物在阳离子调节的Mueller-Hinton肉汤(pH7)中进行微量肉汤稀释(NCCLS-M7A3 1993)并在35℃和需氧条件下培养24和48小时来测定最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。将MBC看作表示接种物减少3log的滴度。将测定的结果列在下表中(所有单位均以μg/ml计)。
MIC=最低抑制浓度(MBC)=最低杀菌浓度实施例41树枝状聚合物对体外人红细胞中人疟原虫恶性疟原虫的侵入和生长的作用的定量方法疟原虫.3D7是体外充分表征化的恶性疟原虫的适应培养系。使寄生物在人红细胞内的生长和复制进行重复循环。各循环的期限是从寄生物的幼环状体期开始的48小时，所述的寄生物通过染色的滋养体(在循环的第一个24小时过程中)至分裂以释放快速侵害新鲜红细胞的感染性裂殖子的分裂的裂殖体而成熟。
寄生物培养和生长试验.使用充分公开的技术在新近收集的人红细胞的同步型体外培养物中维持恶性疟原虫(3D7系)寄生物。为进行侵害试验，通过凝胶飘浮法纯化含有成熟的染色滋养体的红细胞，然后将其悬浮于新鲜的人红细胞中，使得每200个红细胞中约有1个含寄生物(5％的寄生物血症)。接着加入新鲜培养基以便使最终红细胞浓度为2×108个红细胞/ml。
将红细胞悬浮液的等分试样(各95μl)分配入96孔平板、一式两份。将含有测试化合物(BRI 2999；BRI6741；BRI2998；BRI7011；BRI6181)或PBS(对照)的5μl寄生物培养基加入适宜的孔中并在37℃和1％O2下培养平板。立即(时间=0)、随后在24、48和72小时培养后制作来自各孔的薄涂片。在pH7.2下用吉姆萨染色后通过对涂片进行显微镜检验来对各涂片进行寄生物血症和寄生物成熟阶段进行定量。这使得侵害的寄生物发育且随后对再侵害进行定量。在各取样时间点处，完全替换剩余孔中的培养基(含或不含化合物)。
首先将测试化合物以20mg/ml溶于无菌等渗磷酸盐缓冲盐水(pH7.2)，然后进一步稀释成1mg/ml-200μg/ml范围的浓储备溶液。将储备溶液在整个试验期间内保存在4℃下并在需要时适当稀释入寄生物培养基。结果对各化合物进行各自的侵入/生长实验并以图解方式将结果列在附
图1-5中。在10、25和50μg/ml的终浓度下测试各化合物的作用。5种化合物中的每一种均显示出对寄生物侵入、生长和复制的浓度依赖性抑制作用；就任意给定的浓度而言，绝对抑制水平实际上在不同化合物之间是不同的。在所有测试浓度(达到且包括50μg/ml)下，5种测试化合物中没有一种对红细胞形态有任何不利作用。在测试BRI7011和BRI6181的实验中(附图4和5)，在72小时时，在对照孔中的寄生物侵入水平低于在正常情况下所观察到的。这是由于在48小时培养后寄生物生长某一段时间中的表观阻滞而使得在72小时时，较大比例的裂殖体尚未突发释放侵入的裂殖子所导致的。
权利要求
1．一种预防性或治疗性抑制人或非人的动物患者体内微生物或寄生物剂的方法，该方法包括对所述患者给予有效量的带有多个端基的树枝状聚合物，其中至少一个所述端基带有与之结合或连接的含阴离子或阳离子的部分。
2．一种根据权利要求1所述的方法，其中所述的化合物是树枝状聚合物，它包括与至少两个树枝状分支共价结合的多价核并通过至少两代扩展。
3．一种根据权利要求2所述的方法，其中所述的树枝状聚合物是基于氨核的聚酰氨基胺树枝状聚合物。
4．一种根据权利要求2所述的方法，其中所述的树枝状聚合物是基于乙二胺核的聚酰氨基胺树枝状聚合物。
5．一种根据权利要求2所述的方法，其中所述的树枝状聚合物是基于二苯甲基胺核或其它合适核的聚赖氨酸树枝状聚合物。
6．一种根据权利要求2所述的方法，其中所述的树枝状聚合物是聚(丙烯亚胺)树枝状聚合物。
7．一种根据权利要求2所述的方法，其中所述的化合物是下列通式Ⅰ的聚离子型树 其中I是引发剂核；Z是内部支化单元；n是代表所述树枝状聚合物代数的整数；且A是可以通过任选的连接基团X与内部支化单元Z连接的含阴离子或阳离子的部分。
8．一种根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中在所述的化合物中，所述含阴离子或阳离子的部分或多个部分通过酰胺或硫脲键与胺、硫氢基、羟基或其它反应性端基结合。
9．一种根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中在所述的化合物中，所述含阴离子或阳离子的部分选自下列部分组成的组含磺酸的部分、含羧酸的部分(包括含神经氨酸和唾液酸的部分和含修饰的神经氨酸和唾液酸的部分)、含硼酸的部分、含磷酸和膦酸的部分(包括含酯化的磷酸和膦酸的部分)、含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分、含鈲盐的部分、含脒鎓的部分、含苯酚的部分、具有酸性或碱性氢的杂环和含两性离子的部分。
10．一种根据权利要求1-9中任意一项所述的方法，其中在所述的化合物中，与树枝状聚合物的氨基或其它反应性端基结合的部分或多个部分选自下列基团，其中n是0或正整数-NH(CH2)nSO3--(CH2)nSO3--Ar(SO3-)n-CH2CH(SO3-)COOH -CH(SO3-)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3-X=O.S,NH -ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基，H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3) X=O, CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基，H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基，H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3 R=烷基或芳烷基；R1、R2、R3(可以相同或不同)=烷基或芳烷基
11．一种根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述的化合物选自下列物质组成的组ⅰ．烷基磺酸封端的树枝状聚合物；ⅱ．磺基乙酰胺封端的树枝状聚合物；ⅲ．磺基琥珀酰胺酸封端的树枝状聚合物；ⅳ．N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺封端的树枝状聚合物；ⅴ．4-磺基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅵ．3,6-二-磺基萘基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅶ．4-磺基萘基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅷ．3,5-二-磺基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅸ．3,6,8-三-磺基萘基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹ．4-(磺基甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅰ．4-磺基苯甲酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅱ．N-(4-磺基苯基)丙酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅲ．4-磺基苯基脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅳ．N,N,N-三-甲基甘氨酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅴ．4-三甲基铵苯甲酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅵ．4-(三甲基铵甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅶ．N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲基铵)甲基-羧酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅷ．胍基封端的树枝状聚合物；ⅹⅸ．4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅹ．4-羧基-3-羟基-苄胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅰ．4-羧基苯基酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅱ．3,5-二羧基苯基酰胺封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅲ．4-膦酰基氧基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅳ.4-(膦酰基甲基)苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅴ．乙基-4-(膦酰基甲基)苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅵ．(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅶ．(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅷ．(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅸ．(4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹ．(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-双脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅰ．(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅱ．(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅲ．4-苯甲酰氨基硼酸封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅳ．3,5-二羧基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅴ．4-膦酰基氧基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅵ．4-膦酰基苯基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅶ．4,6-二膦酰基萘基硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅷ．荧光素硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹⅹⅹⅸ．(苯基-3-硼酸)-硫脲封端的树枝状聚合物；ⅹl．十二烷基羧酰胺吡啶鎓封端的树枝状聚合物；和ⅹll．糖精封端的树枝状聚合物。
12．一种根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其中所述的治疗包括抑制细菌、酵母或真菌病原体或寄生物病原体。
13．一种用于预防性或治疗性抑制人或非人的动物体内微生物或寄生物剂的药物组合物或兽药组合物，它包括如权利要求1-11中任意一项所定义的阴离子或阳离子树枝状聚合物以及至少一种药物上或兽药上可接受的载体或稀释剂。
14．如权利要求1-11中任意一项所定义的阴离子或阳离子树枝状聚合物在预防性或治疗性抑制人或非人的动物体内微生物或寄生物剂中的用途，或制备用于预防性或治疗性抑制人或非人的动物体内微生物或寄生物剂的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种预防性或治疗性抑制人或非人的动物患者体内微生物或寄生物剂的方法,该方法包括对所述患者给予有效量的带有多个端基的树枝状聚合物的步骤,其中至少一个端基带有与之结合或连接的阴离子或阳离子部分。
文档编号C08G69/48GK1323214SQ99812270
公开日2001年11月21日 申请日期1999年9月13日 优先权日1998年9月14日
发明者B·R·马休斯, G·霍兰 申请人:星药有限公司