青冈栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及青R栎的新用途，具体涉及青R栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法。
【背景技术】
[0002]青同栎(Cyclobalanopsisglauca(Thunb.)Oerst)又名铁稠、青栲、栎树等，是壳斗科青同属常绿阔叶树种，为构成我国亚热带森林的主要树种之一，在我国绝大多省份均有分布，生于海拔60?2600米的山坡或沟谷，组成常绿阔叶林或常绿阔叶与落叶，阔叶混交林。
[0003]绿原酸(Chlorogenic acid)是在植物体中经莽草酸途径产生，由咖啡酸与奎尼酸通过酯化反应生成，是自然界中广泛存在的多生物活性物质，主要存在于忍冬科、杜仲科、菊科、茜草科和蔷薇科等植物中，如金银花、杜仲、可可树以及咖啡等植物，是众多药材和中成药抗菌消炎、解毒、利胆的主要有效成分。现代药理学研宄表明，绿原酸具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗辐射、抗诱变、清除自由基、保护心血管、降脂、降糖等药理作用。在医药保健行业、食品行业、日用化学行业、化学工业等领域广泛应用，是目前国际公认的“植物黄金”。
[0004]目前生产药用或者生化级绿原酸主要是从金银花、杜仲叶中提取，由于这两种原料在中成药中广泛利用，可利用提取绿原酸的资源有限，且原料价格高，因此，在植物中寻找新的高含量的绿原酸植物资料就显得颇有意义。公开号为CN1634853A的发明专利公开了一种以烟草为原料提取绿原酸，然目前尚未见有以青同栎叶作为原料提取绿原酸的公开报道。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种青R栎的新用途，具体是青R栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法。
[0006]本发明其中一个技术方案为:青同栎作为制备绿原酸原料的应用。该技术方案中，所述的青R栎是指青R栎的叶或者是青R栎的树皮。
[0007]本发明还包括用青R栎为原料制备绿原酸的方法，具体包括:取青R栎的叶或树皮，加入溶媒进行提取，提取液浓缩，所得浓缩液经分离纯化得到绿原酸。
[0008]上述方法中，作为原料的青R栎的叶或树皮优选是先粉碎后再进行提取，本申请中优选采用青冈栎的叶为原料。
[0009]上述方法中，所述的溶媒可以是现有常规提取绿原酸的溶媒，提取的方式、分离纯化的方式也均与现有技术相同。所述的溶媒可以是水、乙醇或丙酮，其中乙醇或丙酮的浓度通常可以是10?80v/v%，更优选的浓度为40?80v/v% ;所述提取的方式可以是常温浸提、超声提取或加热提取；所述浓缩液采用大孔树脂柱层析的方式进行分离纯化。
[0010]在分离纯化时，所述的大孔树脂柱具体为聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，其型号的选择与现有技术相同，通常为D101、Dia1n HP-20或AB-8等；在浓缩液上柱后，先用水洗脱，然后用10?40V/V%Z醇洗脱(洗脱时采用TLC跟踪检测，通常10?40v/v%乙醇的用量为柱体积的2?5倍)，收集醇洗脱液，回收溶剂后所得浓缩液调pH值至3?6，放置析晶，再重结晶，得到高纯度的绿原酸。通常用有机酸调节回收溶剂后所得浓缩液的PH值，如盐酸、醋酸等；通常采用10?40v/v%Z醇进行重结晶；在收集完醇洗脱液后，可以采用60?100v/v%的乙醇对树脂柱进行再生。采用该方法分离纯化所得的绿原酸的纯度可达90%以上(HPLC^i);提取率可达85%以上。
[0011]与现有技术相比，本发明提供了一种青同栎的新用途，为提取绿原酸开辟了一种新的原料；还提供了用青同栎为原料制备绿原酸的方法，提取率高，所得绿原酸的纯度可达90%以上，原料来源广泛，成本低廉，适于工业化生产，具有良好的社会效益与经济效益。
【具体实施方式】
[0012]以下各实施例中，涉及的干燥的青冈栎叶中绿原酸的含量为2.1% (HPLC法)。
[0013]以下的实施例中，涉及干燥的青冈栎树皮中绿原酸的含量为1.2% (HPLC法)。
[0014]以下各实施例中，乙醇、丙酮的浓度均为体积百分比浓度。
[0015]实施例1
[0016]取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加12倍量的60%乙醇溶液，室温下超声提取I小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加10倍量的60%乙醇溶液，室温下超声提取I小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为D101)吸附，依次用3倍柱体积去离子水、3倍柱体积30%乙醇溶液、3倍柱体积80%乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至3，放置析出晶体，用40%乙醇溶液重结晶2次，得到产品19.2g，纯度为94.8%，提取率为86.7%。
[0017]结构鉴定:通过MSjH-NMR和13C-NMR等谱学数据鉴定化合物，结果与文献报道值进行对比。
[0018]LCIT-TOF-MS:m/z 353.0869 (M-H)(计算值 C16H17O9, 353.0873)。
[0019]1H-NMR (500MHz, CD3OD) δ: 1.92-2.22 (4Η, m, H~2a, H~2h, H-6a, H-6b),3.64 (1H, dd, J = 3.4, 8.5Hz, H_4) , 4.15 (1H, m, H_3), 5.34 (1H, m, H_5), 6.30 (1H, d, J = 15.9Hz, H-8’)，6.76 (1H, d, J = 8.3Hz, H_5’)，6.93 (1H, dd, J =
2.0，8.3Hz, H-6’), 7.03 (1H, d, J = 2.0Hz, H_2’), 7.58 (1H, d, J = 15.9Hz, H_7’)。
[0020]13C-NMR (125MHz, CD3OD) δ: 38.4 (C_6) ,39.5 (C_2) ,71.4 (C_5) , 72.5 (C_4)，73.8 (C-3)，76.9 (C-1) , 115.2 (C_8，) , 115.3 (C_2，) , 116.6 (C_5，) , 123.1 (C_6，)，127.6 (C-l，)，146.7 (C_3，)，147.2 (C_7，)，149.3 (C_4，)，165.8 (C_9，)，173.5 (C_7)。
[0021]上述MS JH-NMR和13C-NMR数据与文献报道基本一致，故鉴定为绿原酸。
[0022]纯度检查:采用HPLC 分析法[色谱柱:Cosmosil 5C18AR II (4.6 X 250mm，5 μ m)；柱温:35°C;流动相:CH3CN-50mM H3PO4,0 ?39 分钟 4-30% CH3CN ;流速:0.8mL/min ;检测波长:325mm]测得制备的绿原酸纯度为94.8%。
[0023]实施例2
[0024]取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加6倍量的40%乙醇溶液，室温下超声提取I小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加6倍量的40%乙醇溶液，室温下超声提取I小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取