从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然产物提取技术领域，主要涉及一种从独角仙提取降崁酮衍生物和 嘌呤类生物碱化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 药用昆虫由于资源丰富，且活性较强，在新药开发方面有巨大的潜力。独角仙 Allomyrina dichotoma (Linnaeus),又称双叉犀金龟，为昆虫纲-鞘翅目-犀金龟科甲 虫。全世界具有大型犄角的独角仙目前约有60种，其他犄角较小或不明显的种类约有 一千三百多种。中药上又叫独角螂虫，主要有镇惊、破瘀止痛、攻毒及通便等药用功效。独角 仙有很高的药用价值。中医药选用其雄虫入药，夏季捕捉，用开水烫死后晾干或烘干备用。 现代医药研究发现，该节肢动物昆虫还具有治疗白血病和抗癌功效。如1976年有报道从独 角仙提取到独角仙素"dicotastin"，体外研究发现，该物质对实体瘤W-256疡瘤有很高活 性，对P-388淋巴白血病有边缘活性。综上所述，独角仙作为我国传统中药应用，历史悠久， 资源丰富；另一方面，其活性和药用物质基础研究仍然十分匮乏。因此，挖掘和利用这一天 然药用资源，研究其成药规律是十分重要的。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的 方法，该方法首次从独角仙中提取出3个新化合物，分别被鉴定为1个新降崁酮衍生物和2 个新嘌呤类生物碱化合物，提取的化合物具有一定的抗菌活性。
[0004] 本发明实现上述技术目的采用的技术方案是：从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤 类生物碱化合物的方法，包括以下步骤： 步骤一、取独角仙成虫，用清水洗净后晾干，然后置于30-65°C的烘箱中干燥至恒重，取 出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22-26°C条件下，用独角仙粉重量5-15倍的 二氯甲烷浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤，向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重 量5-15倍的二氯甲烷，在22-26°C条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后 过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用； 步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26°C条件下浸 泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集 滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量5-15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在 22-26°C条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次 滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在_20°C条件下冷冻 成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用； 步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解 完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量 20-30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯 仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、 7:3、1:1、3:7和1:9,采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用； 步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比 为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其 中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到 浅黄色固体粉末，即化合物I ; 步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为 甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏 分，备用； 将第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物 用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物II ; 将第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体化合物 用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物III ; 所述的化合物I、II和III的结构式分别为：
【主权项】
1.从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其特征在于：包括以下 步骤： 步骤一、取独角仙成虫，用清水洗净后晾干，然后置于30-65°C的烘箱中干燥至恒重，取 出并粉碎，得到独角仙粉，备用；将独角仙粉在22-26°C条件下，用独角仙粉重量5-15倍的 二氯甲烷浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，过滤；向得到的滤渣中再次加入独角仙粉重 量5-15倍的二氯甲烷，在22-26°C条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后 过滤，将得到的滤渣置于通风处常温风干，得到虫渣，备用； 步骤二、向步骤一得到的虫渣中加入其重量5-15倍的甲醇溶液，在22-26°C条件下浸 泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，甲醇溶液的质量百分数为70%，提取后过滤，分别收集 滤液和滤渣，然后向滤渣中再次加入虫渣重量5-15倍质量百分数为70%的甲醇溶液，在 22-26°C条件下浸泡，浸泡过程中用超声波辅助提取，提取结束后过滤，收集滤液，并将两次 滤液合并，浓缩，得到独角仙提取浓缩液，备用；将独角仙提取浓缩液在-20°C条件下冷冻 成冰状，取出，置于冷冻干燥器中干燥至恒重，得到独角仙提取浸膏，备用； 步骤三、向步骤二得到的独角仙提取浸膏中加入质量百分数为70%的甲醇溶液，溶解 完全后加入硅胶拌样，研磨均匀后室温干燥，得到拌料样品，备用；然后将拌料样品重量 20-30倍的硅胶用氯仿拌样后湿法上柱，并在硅胶柱中加入拌料样品，再用不同体积比的氯 仿甲醇混合溶液进行梯度洗脱，其中所用的氯仿甲醇混合溶液中两者的体积比依次为9:1、 7:3、1:1、3:7和1:9,采用TLC检测分析，合并相似馏分，使之形成16个馏分段，备用； 步骤四、将步骤三得到的第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，洗脱剂为体积比 为7:3的氯仿甲醇溶液，洗脱过程中收集馏分，合并相似馏分，使之形成10个馏分，并将其 中的第5个馏分用半制备型HPLC分离纯化，洗脱液为质量百分数为65%的甲醇溶液，得到 浅黄色固体粉末，即化合物I; 步骤五、将步骤三得到的第11和12馏分段合并，用聚酰胺柱色谱进行分离，洗脱剂为 甲醇水溶液，其中甲醇体积百分比为80-100%，水的体积百分比为0-20%，洗脱得到7个馏 分，备用； 将其中的第3个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体 化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物II; 将其中的第4个馏分在室温下静置，有固体析出，过滤，得到固体化合物，然后将固体 化合物用氯仿甲醇溶液重结晶，得到白色固体粉末，得到化合物III; 所述的化合物I、II和III的结构式分别为：
化合物I
化合物III。
2. 如权利要求1所述的从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其 特征在于：步骤一所述的采用二氯甲烷浸泡和步骤二所述的甲醇浸泡的时间均为40-48h。
3. 如权利要求1所述的从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，其 特征在于：步骤三所述的洗脱过程中每个梯度的洗脱量为2倍柱体积。
【专利摘要】本发明公开一种从独角仙提取降崁酮衍生物和嘌呤类生物碱化合物的方法，包括以下步骤：步骤一、将独角仙粉用二氯甲烷浸泡，过滤，得虫渣；步骤二、向虫渣中加入质量百分数为70%甲醇溶液提取，浓缩，将浓缩液冷冻成冰状，干燥得到独角仙提取浸膏；步骤三、独角仙提取浸膏用70%甲醇溶液溶解，硅胶柱洗脱，合并相似馏分；步骤四、将第6个馏分段采用凝胶柱色谱法进行分离，得到化合物Ⅰ；步骤五、将馏分段11、12合并，用聚酰胺柱色谱分离；将第3个馏分重结晶，得到化合物Ⅱ；将第4个馏分重结晶，得到化合物Ⅲ。本发明首次从独角仙中提取分离到3个化合物，分别被鉴定为1个新降崁酮衍生物和2个新嘌呤类生物碱化合物。
【IPC分类】C07C67-48, C07C67-56, C07C69-74, C07D473-34
【公开号】CN104557548
【申请号】CN201510029454
【发明人】尹卫平, 牛兰岚, 刘军娜, 高嘉屿, 李海迪, 刘华清, 李文亮
【申请人】河南科技大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月21日