一种硫酸粘菌素的纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物的分离纯化领域，尤其涉及一种硫酸粘菌素的纯化方法。
【背景技术】
[0002]硫酸粘菌素为白色或类白色粉末，味苦，有引湿性。难溶于甲醇或乙醇中，几乎不溶于醚和氯仿中。硫酸粘菌素是多粘菌素的硫酸盐，耐热，消化道不易吸收，排泄迅速，毒性小，无副作用，不易产生耐药菌株，是最安全的畜禽促生长抗生素之一。硫酸粘菌素是碱性多肽类抗生素，主要用于防治敏感菌的感染和促进畜禽生长，对革兰氏阴性菌(尤其大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、嗜血杆菌和变形杆菌等)有强抑制作用，对革兰氏阳性菌(如金黄葡萄球菌和溶血性链球菌外)有抑制作用。
[0003]多粘菌素的分离目前以离子交换法应用最广(参见顾觉奋主编分离纯化工艺原理.中国医药科技出版社，199，296-300)。离子交换法是利用多粘菌素为高价碱性化合物的性质，可用羧基阳离子交换树脂(Na型)进行提取。但是从纯化结果来看，离子交换法生产的硫酸粘菌素，其纯度不高，HPLC归一化法测总组分含量，一般只有70-75%，而欧洲药典EP6.0的标准为总组分含量不低于79%。
[0004]
【发明内容】
本发明的目的是提供一种硫酸粘菌素的高效液相色谱系统纯化方法。
[0005]本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下:一种硫酸粘菌素的纯化方法，其特征在于以反相C18为固定相，用盐溶液、乙腈为流动相，用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备出硫酸粘菌素，包括以下步骤:
(1)将硫酸粘菌素粗品溶于流动相中，浓度为:1(T200mg/ml ；
(2)用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备硫酸粘菌素；
(3)纳滤脱盐。
[0006]本发明具有以下技术效果:本发明采用半制备型高效液相色谱系统，制备出高纯度的硫酸粘菌素，工艺简单，产品质量稳定，可回收利用，无污染，实现清洁生产。
[0007]【具体实施方式】:
实施例1
样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量40 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度> 98.7%。
[0008]实施例2
样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量50 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度> 98.3%。
[0009]实施例3
样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量80 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=82/18。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度> 98.0%。
【主权项】
1.一种硫酸粘菌素的纯化方法，包括以下步骤: (1)将硫酸粘菌素粗品溶于流动相中，浓度为:1(T200mg/ml ； (2)用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备硫酸粘菌素； (3)纳滤脱盐。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备硫酸粘菌素，具体方法为:以盐溶液、乙腈的混合物为流动相进行洗脱，色谱柱填料为反相C18填料，填料粒度5?15 um，系统温度为15?40°C。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的洗脱为等度洗脱。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的系统温度的最适宜温度为25°C。
【专利摘要】本发明公开了一种纯化硫酸粘菌素的方法。本发明采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以反相C18为填料，以盐溶液、乙腈为流动相。采用本发明制备硫酸粘菌素，操作简单，实验步骤少，成本低，周期短，纯度可达98.0%以上。
【IPC分类】C07K7-62, C07K1-20
【公开号】CN104672309
【申请号】CN201310618243
【发明人】陈锐, 金新亮, 李胜迎
【申请人】江苏汉邦科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年11月29日