专利名称：：多粘菌素轭合物的制作方法发明的概述本发明涉及生产多粘菌素B(PMB)或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其盐)的方法、该方法包括在pH9.3左右-10左右(优选约9.5～约9.7)的含水介质中，于约30°-约35℃(优选约32℃)温度下，将多粘菌素B或其盐与葡聚糖反应。一种优选的不同方法是在约32℃温度下，使硫酸多粘菌素B与氧化葡聚糖反应，通过胺键，该多粘菌素B分子与葡聚糖共价连接。本发明方法制备的此种改进轭合物(或其盐)、可容易而又恒定地进行复制，且药理学特性得到明显改善，例如效力更高，其抗内毒素活性也高于非轭合多粘菌素B的抗内毒性活性。本发明也包括含有多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物、比非轭合多粘菌素B具较强抗内毒素活性的轭合物(或其盐)。发明的技术背景对于有效治疗系统性炎性反应综合症(SIRS)及脓毒休克的医药需求，已引起广泛关注，该病患者基数大，在发达国家需要紧急治疗的SIRS脓毒症严重病例超过100000例，而有几乎1百万患者处于脓毒症高危险状况，要通过预防措施使其解脱。根据大量人和动物解体的研究，认识到内毒素在SIRS/脓毒症发病机理中是主要诱因和基本媒介，因此为抗内毒素探讨脓毒症提供一个明确的科学原理。内毒素或脂多糖是Gram氏阴性细菌衍生出的结构分子，当进入血液中时，它们可能影响体温调节，引起发烧。它们也产生毒效应，导致心脏、肺及肾脏衰竭。在加护病房患者中，内毒素相关疾病是死亡的主要原因。PMB中和内毒素的能力在抗生素中是很独特的，它通过结合于内毒素分子的脂A区来完成，来自多粘杆菌(B，硫酸多粘菌)的PMB是高载荷的两亲环肽脂，它也可用于消除各种真菌感染，特别是免疫功能遭致损害的个体中出现的感染。然而，PMB也有某些使它不如理想抗生素之性质。第一，它在体内的半衷期很短，为了产生效果，需重复剂量；第二，当其通过肾脏时可能会引起严重损伤；第三，高剂量时，具神经毒性、会引起呼吸麻痹。以前，有科研人员将PMB与不流动或固定分子轭合，例如Issekutz，J.Immunol.Methods61(1983)275-281，描述了将PMB与琼脂糖结合。而这些轭合物只用于提纯工艺，并不适宜于体内治疗用。为赋予药理学活性，延长持续时间，或降低器官毒性，已经采用的一个方法是将药物与高分子量大分子，例如葡聚糖，聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷等轭合。但是，在这一高聚物轭合领域里的嗜试，仅仅取得了有限的成功。例如，普鲁卡因酰胺(抗心律失常药)的轭合形式活性较低，且比原鲁便卡因酰胺半衰期更短(Schact等人，AnnN.Y.，Acad.Sci.416199-211)。同样，连接于载体上的前列腺素类似物B245，比原分子效果也降低了(降低幅度为几个数量级)(Bamford等人，BiochBiophys.Acta886109-118)。有关激肽释放酶、抑肽酶、缓激肽(Odya等人，Biochem.Pharmacol.27.173-179)、抗肿瘤药物正定霉素(Hurwitz等人，J.Appl.Biochem.225-35)和丝裂霉素C(Takakura等人，CancerRes.442505-2510)的轭合形式，其生物学效力降低也已被披露过，轭合酶也因其空间障碍使得底物不易接近而降低了生物活性(Blomhoff等人，Biochem.Biophys.Acta757202-208；Marshall等人，J.Biol.Chem.251(4)1081-1087；R.L.Foster，Experimentia31(7)772-773；Wileman等人，J.Pharm.Pharmacol.35762-765)。但也有轭合之后循环半衷期得到改善的一些例子(Wileman前述文献；Kaneo，Chem.Pharn.Bull.37(1)218-220)。人们企盼开发出一种能在血液中停留较长时间，和/或以治疗剂量施用不具神经毒性或肾毒性的PMB类型。USP5177059及其在其它国家的相同专利、如EP428486，介绍了多粘菌素B与多糖(如葡聚糖或羟乙基淀粉)、蛋白(如白蛋白)、及高聚物(如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、和聚乙烯醇)轭合。该专利还详细描述了多粘菌素B与葡聚糖化学轭合的方法，即将原料于室温(即25°左右或更低)，pH8.5-9.0条件下反应。该专利所述轭合物比未轭合多粘菌素B的毒性小，并有抗内毒素活性，该活性虽未清楚定义，但看来与未轭合多粘菌素B相等或较小。本发明方法是对上述专利所述方法之改进并提供多粘菌素B或其盐与葡聚糖的轭合物，该轭合物与已知PMB-葡聚糖轭合物相比，其特性得到令人惊异的改善，特别是比未轭合多粘菌素B具较高抗内毒素活性，具较高效力、较好复制性，以及改善了药理学性质。特别令人惊异的是本发明的新型PMB-葡聚糖轭合物(或其盐)，比未轭合PMB有恒定的、可重复的较高抗内毒素活性。虽然该未曾预料到的新特性之分子基础并不清楚，但很可能是本发明制备该轭合物时所用反应条件下，pH值的变化改变了碱性侧链上的质子分布。在高pH值条件下，对于通过还原胺化反应，与葡聚糖的连接作用来说，一个或多个侧链氨基会变得更易利用。每个侧链氨基将有一个特定的pKa值，较高pH值下每次会释放同样胺。如果该胺给出特别有利的连接(从轭合物效力的观点来看)，则产生较好轭合物类型，因为此种特别连接途径对整个结构贡献较大。该结构以恒定可复制方式赋予该轭合物高于原有PMB活性水平之活性水平，例如相当于原有PMB活性的125％或更高。详细说明本发明涉及生产用于治疗真菌和细菌感染以及预防由细菌内毒素引起之疾病的多粘菌素B与葡聚糖之水溶性轭合物(或其盐)的改进方法。具体地说，本发明关系到一种水溶性多粘菌素B/葡聚糖轭合物(或其盐)的生产方法，所述方法包括在含水介质中，pH值约9.3-约10，温度约30°-约35℃条件下，使多粘菌素B或其盐与葡聚糖反应。PMB是一种肽抗生素、是具有一定抗生素活性的得到认可的药剂。在临床上局部使用及肠道外应用已有40年以上。对PMB产生细菌抗性是罕见的。PMB与内毒素结合其亲合力约10-6M，在大量体外及体内模式中，可中和来自所有临床上重要的Gram氏阴性细菌的内毒素之生物效应。在体外，它被用作中和内毒素的标准。而且在体内，PMB对许多动物模式的细菌脓毒症病理学，例如酸中毒、肠细菌感染中的低血压，以及对狗、兔、鼠和小鼠的Gram氏阴性脓毒症致死都有保护作用。在人体中，它对预防烧伤患者之类并发的脓毒症也很有效。用于制备本发明轭合物的PMB是市售的。将多粘杆菌(Prazmowski)Migula发酵可制备PMB。PMB由几种相关的十肽混合物组成。PMB或其药物学上可接受的盐(例如硫酸多粘菌素B等)均可用于本发明。本发明方法中所用葡聚糖，可以是任何常规药物学上可接受的葡聚糖。优选共价结合于肽上的经化学改性之葡聚糖，例如经氧化剂(如高碘酸钠)氧化等。优选葡聚糖重均分子量为约25000-约500000，更优选约50000-约200000，也更优选约63000-约76000。该分子量，例如可以采用凝胶渗透高效液体色谱来测定。最优选的葡聚糖由肠系白联球菌属(NRRLB-512)发酵制备。该葡聚糖由长线性链中α[1-6]连接的葡萄糖单元，带有约5％α[1-3]支链组成。该支链中约85％有1-2个葡萄糖单元，而其余15％平均33个单元。含水介质中制备PMB和葡聚糖轭合物的一般方法在USP5177059中有新介绍，对本发明亦实用。本发明优选实施方案中、部份氧化的葡聚糖通过与高碘酸钠(NaIO4)之类的氧化剂反应而制得。该处理通过葡萄糖单体上的连位二醇氧化裂解而形成醛。当该部份氧化的葡聚糖暴露于PMB或其盐中时，形成Schiff氏碱。本发明范围内的轭合物生产，在PMB和葡聚糖反应期间，尤其是Schiff氏碱形成阶段要求小心控制pH值于约9.3-约10之间，优选约9.5-10，更优选约9.5-约9.7。优选使用硼酸盐缓冲液，特别是含四硼酸钠的缓冲液来保持pH值于该范围内当PMB或其盐与葡聚糖反应时，含水介质的温度也需保持于约30°-约35℃之间，更优选约32℃。随后加入硼氢化钠(NaBH4)还原Schiff氏碱，并且保留的醛给PMB与葡聚糖之间提供稳定的共价连接，优选通过一个或多个胺键进行。优选采用超滤作用，例如使用10000分子量分隔膜，除去残留的PMB、无机副产物(如硼酸盐)，及可能存在的低分子量降解产物。而使该轭合物提纯。提纯之前优选将含水介质的pH值调至5-7。因此本发明方法的优选方案包括a).使葡聚糖与高碘酸钠反应制得部份氧化的葡聚糖；b).在含水介质中，pH值约9.3-约10，温度约30°-约35℃条件下，使多粘菌素B或其盐与所得部份氧化的葡聚糖反应；c).加入硼氢化钠到所得含水介质中；d).提纯所得多粘菌素B-葡聚糖轭合物。本发明也包括多粘菌素B或其药物学上可接受的盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)，该轭合物具有高于未轭合多粘菌素B的抗内毒素活性，用于预防和治疗系统性炎性反应综合症及脓毒性休克。也包括由上面定义的方法可获得的此种轭合物(或其药物学上可接受的盐)，以及由上述方法任何时候获得的此种轭合物(或其药物学上可接受的盐)；本发明还包括含有上面定义的多粘菌素B或其药物学上可接受的盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)，加有至少一种药物学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物；以及包括这些轭合物(或其药物学上可接受的盐)在制备用于预防和治疗系统性炎性反应综合症和脓毒性休克的药物方面之应用。本发明的方法中，以及由此生产的轭合物中，PMB或其盐与葡聚糖的分子比是约1∶15-约200∶1，更优选约1∶2-约1∶5，最优选约1.5∶5。优选多粘菌素B的盐是PMB的药物学上可接受的盐。如果该轭合物在20℃时，于水中有约25mg/ml或更高的溶解度，则认为它是水溶性的，优选约50mg/ml或更高，更优选约60mg/ml或更高、最优选约65mg/ml或更高(20℃)。本发明制备的PMB-葡聚糖(和其盐)，可以以同PMB本身相一致的应用方式使用，即它们可以单独使用，例如作为抗生素治疗细菌或真菌感染，或者与其它杀菌剂和/或抗炎剂结合使用。它们可按原有PMB的常规给药方式，以任何形式给药，例如肌内给药，静脉内给药、鞘内给药、结膜下给药以及外部给药。肌内注射剂一般于无菌水、生理盐水或约1％盐酸普鲁卡因中含有效量PMB-葡聚糖轭合物(或其药物学上可接受的盐)。静脉内制剂一般于5％葡萄糖和无菌水中含有效量轭合物。鞘内制剂一般于生理盐水中含有效量轭合物。对于眼内局部使用，有效量轭合物可与水或生理盐水(也可加有甘油)、硫酸铜混合配成滴眼药水、或可以制成眼药膏或悬浮液。外部使用的乳霜，特别是用于烧伤面的，一般是在惰性基质成份、例如液体凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯，和乳化石蜡等中，含有有效量PMB-葡聚糖轭合物(或其药物学上可接受的盐)。提纯的本发明PMB-葡聚糖轭合物(或其药物学上可接受的盐)基本上无毒。本发明轭合物用量，可根据给具体患者开据的原有PMB用量处方来确定，要考虑所治患者的症状、病人的年龄和体重，所用具体轭合物的活性等因素。由于轭合物提高了有效活性、降低了毒性，及增加了活性持久性，因此可以推断比起原有PMB其剂量可降低一半或更多。本发明轭合物的分子量，可以使用分子量分级排斥高效液体色谱(SEC-HPLC，TSK-GELG4000PW×1，用pH4.4的40mM磷酸盐缓冲液洗脱、用低角度激光扫描检测)、参照重均分子量(MW)为79800的葡聚糖标准物来测定。本发明轭合物优选重均分子量为约55000-约80000，更优选约60000-约80000，最优选约63000-约76000。本发明改进的轭合物有超过现有技术轭合物的较好复制性、以及具高于未轭合多粘菌素B的抗内毒素活性，本发明轭合物具改善的抗内毒素活性、也就是说，未轭合多粘菌素B的IC50与本发明轭合物的IC50之比大于1.0，优选大于约1.25、或1.3，更优选大于约1.4。正如本文中所采用的，IC50意指当用羰花青染料试验测试时，在有0.05mg来自埃希氏大肠杆菌的内毒素存在下，要使450nm波长处羰花青染料的吸收偏移消除50％所需的多粘菌素B之浓度。如本文所采用的，活性比(％)定义如下所述羰花青染料试验，是用于测定多粘菌素B和本发明轭合物抗内毒素性质的体外生物化学试验。该试验对从前的文献报导加以修改(Ogawa和Kanoh，Microbiol.Immunol.281313-1323；Zey和Jackson，AppliedMicrobiol.26129-133)、并最适宜于微滴平板使用。该试验中，轭合物或未轭合物PMB(阳性对照物)为结合内毒素，而与羰花青染料(一种小分子阳离子化合物，当与内毒素结合时、能改变分光光度吸收)竞争。进行羰花青染料试验的试剂配制如下1).配制0.15M乙酸钠溶液和0.15M乙酸溶液，将两溶液合并(40.2ml0.15M乙酸钠与159.8ml0.15M乙酸)制得0.03M乙酸盐缓冲液；2).将8.0mg羰花青染料溶于12.5ml乙醇中。用37.5ml乙酸盐缓冲液将其稀释。该最终染料溶液是25％乙醇中含量为160μg/ml。将其置于冰上，于暗室中混合至少30分钟；3).在40mM磷酸盐缓冲液中(pH＝7.4)配制PMB或各轭合物的系列稀释液，各稀释液比其最终试验浓度高6倍；4).经声波处理后，将埃希氏大肠杆菌0111B4内毒素，从原先配制的冷冻贮存浓度1.0mg/ml(0.9％盐水中)稀释为0.5mg/ml(0.9％盐水中)。准备好平板、试验进行如下，从加入样品或缓冲液于微滴小井中开始a).空白100μl盐水和50μl40mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，一式三份；b).阳性对照物100μl内毒素和50μl40mM磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，一式三份；c).PMB样品100μl内毒素和50μlPMB样品，一式三份；d).阴性对照物100μl盐水和50μl轭合物样品，一式三份；e).实验物100μl内毒素和50μl轭合物样品，一式三份。将该板转动几分钟，各小井中加入150μl染料、将该板用薄膜包裹并置于冰上，黑暗中放置60分钟。用多通道移液管将小井混合，并于微滴平板阅读器上，450nm波长处立即读数以Reed-Muench计算法估算IC50。由下面的非限制性实施例对本发明举例说明，所用温度均为摄氏度。实施例1A)葡聚糖的氧化在5L4颈圆底烧瓶中加入2.31L注射用水和150g葡聚糖。以约140rpm转速，21°-24°下搅拌该混合物使充分溶解。加入3.9g高碘酸钠在60ml注射用水中的溶液(慢慢升温约1°)。用30ml注射用水涮洗加料漏斗。所得混合物于21°-24°贮存1小时。该溶液通过0.22μCorning醋酸纤维素90mm膜滤器真空过滤，并加热至30°-32°，维持该温度。B)制备硫酸多粘菌素B/硼酸盐缓冲溶液该制备从上述步骤A)葡聚糖氧化过滤和升温完成以前45分钟时开始。在12L4颈圆底烧瓶中加入3.00LpH9.7硼酸盐缓冲液，该缓冲液温度调至32°。然后加入45g硫酸多粘菌素B，所得悬浮液于32°搅拌45分钟。测定该混合物的pH值(原为9.4)，并于32°下、加入30ml5NNaOH，将pH值调到9.7。硼酸盐缓冲液配制如下在热处理5L4颈圆底烧瓶中加入114.3g四硼酸钠十水合物和2.906L(2.90kg)注射用水。将该溶液加热至32℃，并加入37ml5NNaOH将pH调至9.7(原为9.3)。通过无菌0.22μCommg醋酸纤维素90mm膜滤器真空过滤该溶液并贮存。C)硫酸多粘菌素B与氧化葡聚糖的反应于32°下，尽可能快地将预热(30°-32°)氧化葡聚糖溶液(来自A部份)加入到硼酸盐缓冲液的硫酸多粘菌素B的搅拌混合物(来自B部份)中。加完之后测定该混合物pH值(原为9.5)，并加入18ml5NNaOH调节至9.7。该混合物于32℃搅拌1小时，该多相混合物中加入3.6g硼氢化钠在50ml注射用水中的溶液。于32°将该混合物搅拌2小时，再加入另一新鲜配制的3.6g硼氢化钠在50ml注射用水中的溶液，再于32°搅拌2小时。该混合物再中再加入3.6g硼氢化钠在50ml水中的溶液。除去热源，搅拌下在超过14小时期间使该反应混合物冷至室温。测定该反应混合物的pH值(10.0)，加入1.27L1NHCl将pH调至3∶7。酸化之后搅拌所得混合物10分钟，通过无菌0.22μCorning乙酸纤维素膜滤器真空过滤，得到6.81L多粘菌素B-葡聚糖轭合物的溶液，待进行提纯。D).超滤提纯使用带有S1Y10膜滤筒的预处理AmiconCH2PRS超滤装置提纯多粘菌素B-葡聚糖轭合物溶液(来自C部份)。将该纯化产物从超滤器中移出，于-25°冷冻贮存。分析所得轭合物表明该产物有下述特性IC50＝16.8μg/ml比活性＝124.7％葡聚糖含量＝65.37mg/ml总多粘菌素B含量＝2.47mg/ml游离多粘菌素B含量＝0.65％PMB葡聚糖的比例＝37.71mgPMB/g葡聚糖看来在反应温度32°和pH9.5条件下，所得产物其活性为未轭合PMB活性的约125％。实施例2重复实施例1的方法，得到有下面特性的多粘菌素B-葡聚糖轭合物IC50＝16.4μg/ml比活性＝125.8％葡聚糖含量＝65.30mg/ml总多粘菌素B含量＝2.49mg/ml游离多粘菌素B含量＝0.67％PMB葡聚糖的比例＝38.06mgPMB/g葡聚糖再一次表明，在反应温度32°和pH9.5条件下，所得轭合物与未轭合物PMB相比其活性为126％左右。实施例3根据实施例1的方法(除了指出的不同处外)制备多粘菌素B/葡聚糖轭合物，测定pH9.7条件下，温度对PMB与葡聚糖之间反应的影响。测定有效载荷(mgPMB/g葡聚糖)、平均IC50(μg/ml)和比活性(％)，所得结果列于表1表1pH9.7条件下温度的影响(10gPMB；0.65gNaIO4；50g葡聚糖)</tables>从实施例3很明显看出，在pH9.7条件下，当反应温度降低到10°时，所得产物活性降低。实施例4根据实施例1的方法(除指明的不同之处外)制备多粘菌素B/葡聚糖轭合物，测定pH值对PMB与葡聚糖之间反应的影响。如实施例3所示测定有效载荷(mgPMB/g葡聚糖)，平均IC50(μg/ml)和比活性(％)，所得结果列于表2表232°温度下pH的影响(15gPMB；1.3gNaIO4；50g葡聚糖乙酸盐缓冲液；b)磷酸盐缓冲液；c)硼酸盐缓冲液；ND未测定(样品太稀无法测定该参数)。表2数据表明，降低温度至32°，而使用9.5-9.7之间的pH值时，仍然能产生其活性优于未结合PMB的轭合物(例4l，4n和4o)但若进一步提高pH值到10，便不特别有利了(例4p)。实施例5按实施例1(除了指明的不同外)制备多粘菌素B/葡聚糖轭合物，并测定其抗内毒素活性比，所得结果列于表3表3PMB量的影响(1.3gNaIO4；pH9.7；32°)</tables>从表3结果进一步证实了最佳条件仍然是反应温度约32°，pH值约9.5-约9.7。因此，总的来说实施例1-5的数据表明，使用反应温度约30°-35°，优选32°左右，pH值约9.3-约10，优选约9.5-约9.7便产生本发明改善的轭合物。权利要求1.含多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其盐)，该轭合物具有比未轭合多粘菌素B更高的抗内毒素活性，即未轭合多粘菌素B的IC50与所述轭合物的IC50之比大于1.0。2.权利要求1的轭合物(或其盐)，其中所述比值大于约1.25或1.3。3.权利要求1的轭合物(或其盐)，其中所述比值大于约1.4。4.权利要求1的轭合物(或其盐)，其中抗内毒素活性采用羰花青染料试验法测定，该试验中，所述轭合物的IC50作为在每毫升0.9％盐水中存在0.05mg来自埃希氏大肠杆菌的内毒素条件下，使450nm波长处该羰花青染料的吸收偏移消除50％所需的该轭合物浓度而测定出。5.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中多粘菌素B或其盐与葡聚糖之分子比是约1∶15-约200∶1。6.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中所述多粘菌素B或其盐与葡聚糖之分子比是约1∶2-约1∶5。7.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中所述葡聚糖的重均分子量为约25000-约500000。8.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中所述葡聚糖的重均分子量为约50000-约200000。9.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中所述葡聚糖的重均分子量为约63000-约76000。10.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，该轭合物重均分子量为约55000-约80000。11.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，所述重均分子量为约60000-约80000。12.权利要求1-4的任意一项的轭合物(或其盐)，其中所述重均分子量为约63000-约76000。13.生产多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其盐)的方法，该方法包括在pH值为约9.3-约10范围内，温度约30°-35℃条件下，使多粘菌素B或其盐在含水介质中与葡聚糖反应。14.权利要求13的方法，其中pH值是约9.5-约9.7。15.权利要求13的方法，其中温度是约32°。16.权利要求13的方法，其中多粘菌素B或其盐与葡聚糖的反应包括多粘菌素B或其盐通过一个或多个胺键与葡聚糖共价连接。17.权利要求13的方法，其中多粘菌素B盐是硫酸多粘菌素B。18.权利要求13的方法，其中多粘菌素B或其盐与葡聚糖之分子比是约1∶15-约200∶1。19.权利要求13的方法，其中多粘菌素B或其盐与葡聚糖之分子比是约1∶2-约1∶5。20.权利要求13的方法，其中多粘菌素B或其盐与葡聚糖之分子比是约1.5∶5。21.权利要求13的方法，其中葡聚糖的重均分子量为约25000-约500000。22.权利要求13的方法，其中葡聚糖的重均分子量是约50000-约200000。23.权利要求13的方法，其中葡聚糖的重均分子量为约43000-约76000。24.权利要求13的方法，其中葡聚糖被部份氧化。25.权利要求24的方法，其中葡聚糖使用高碘酸钠部份氧化。26.权利要求13的方法，其中使用硼酸盐缓冲液来保持pH值。27.权利要求26的方法，其中硼酸盐缓冲液含有四硼酸钠。28.权利要求13的方法，包括随后与硼氢化钠反应。29.权利要求13的方法，还包括然后调节含水介质的pH值到5-7，并提纯所得轭合物。30.权利要求29的方法，其中所述轭合物通过超滤提纯。31.按照权利要求13生产多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其盐)的方法，包括a)将葡聚糖与高碘酸钠反应，制得部份氧化的葡聚糖；b)在含水介质中，pH值约9.3-约10范围内、温度约30°-约35°条件下，使多粘菌素B或其盐与所得部份氧化的葡聚糖反应；c)所得含水介质中加入硼氢化钠；d)提纯所得轭合物。32.含有多粘菌素B或其药物学上可接受的盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)的药物组合物，其中所述轭合物具有权利要求1所定义的抗内毒素活性，所述组合物还含有至少一种药物学上可接受的载体或稀释剂。33.多粘菌素B或其药物学上可接受的盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)，所述轭合物具有权利要求1所定义的抗内毒素活性，用于预防或治疗系统性炎性反应综合症或脓毒性休克。34.由权利要求13或31的方法获得的、如权利要求1所定义的多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)。35.如权利要求1定义的、由权利要求13或31的方法任何时候获得的多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)。36.多粘菌素B或其药物学上可接受的盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其药物学上可接受的盐)之应用，所述轭合物(或其盐)具有如权利要求1所定义的抗内毒素活性，所述应用指配制用于预防或治疗系统性炎性反应综合症或脓毒性休克的药物。全文摘要具有比未轭合多粘菌素B较高抗内毒素活性的水溶性多粘菌素B/葡聚糖的轭合物(或其盐)。该轭合物是在含水介质中、pH值约9.3－约10,温度约30°－约35℃条件下,使多粘菌素B或其盐与葡聚糖反应制备的。文档编号A61P31/00GK1185115SQ96194171公开日1998年6月17日申请日期1996年5月24日优先权日1995年5月25日发明者P·K·卡帕,G·卡尔达思,A·库瑟罗维,P·拉克,P·G·马特内尔,R·C·佩特尔,M·普拉沙德,S·沙尔马申请人:诺瓦蒂斯有限公司