5天，1000g离心去除菌体后测定上清液中镉离子含量。镉离子含量测定方法采用水中镉的测定方法GB 7475-1987水质铜、锌、铅、镉的测定原子吸收分光光度法。镉的去除率可达到70-75%，去除效果明显。
[0022](6)对镉具有吸附作用和促进植物生长效应的菌株LY6具有如下特征:
菌落形态特征:菌落圆形，微黄色，表面光滑湿润，半透明，有光泽，边缘整齐。
[0023]菌株形态特征:利用电镜形态鉴定和革兰氏染色分析。特征如下:杆状，直径0.9 μ m?1.2 μ m，长2.5 μ m?4.0 μ m，革兰氏阳性。
[0024]生理生化特征:兼性厌氧，最适pH7.4?7.6。能利用柠檬酸盐和醋酸盐作为唯一碳源，发酵山梨醇、蔗糖、棉子糖、蜜二糖，不发酵肌醇。赖氨酸脱羧酶阴性，鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶均阳性，IMViC实验:-、_、+、+，尿素酶阳性，苯丙氨酸脱氨酶阴性，不产H2S,
(7)菌株LY6的分类鉴定:利用16S rDNA鉴定，即采用细菌16S rDNA通用引物7F(CAGAGTTTGATCCTGGCT)和 1540R (AGGAGGTGATCCAGCCGCA)进行 PCR 扩增其 16S rDNA 并测序，再与国际NCBI GenBank (www.ncb1.nlm.nih.gov)核苷酸数据库比对，核苷酸同源性为99%，结合菌落、菌体形态特征鉴定为肠杆菌sp.、。于2014年8月25日送交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)登记保藏，其保藏号为CGMCCN0.9539。分类命名为:肠杆菌sp.)。
[0025]实施例2:
肠杆菌LY6去除水中镉的效果。
[0026](I)从斜面保藏管接种一环肠杆菌LY6到50 ml有氮基础培养基中，置28°C摇床中，150rpm振荡培养到指数期，作为种子液;培养基配方如下:蔗糖，1g ;K2HP04，2g ；(NH4)2S04，Ig ；MgS04.7Η20，0.5g ;CaC03，0.1g ;酵母膏，0.5g ;NaCl，0.1g ;蒸馏水，1L，pH7.2。
[0027](2)取步骤(I)中得到的种子液，以1%体积的接种量接种到IL新鲜培养基中，加入无菌CdCl2溶液，使Cd 2+终浓度为100mg/L，置于28°C摇床中振荡培养；
(3)每间隔6小时取步骤(2)中得到的培养液10 ml，1000g离心后测定上清液中Cd2+含量及培养液pH值，绘制肠杆菌去除镉离子效果曲线如图1。
[0028]从图1可以看出，经过45-70小时的处理，镉的去除率可达到70_75%，去除效果明显。实际应用中，采用本发明所提供的菌株接种镉污染水体，待菌株生长繁殖吸附镉沉淀后的清水即为净化后的水体。
[0029]实施例3:
肠杆菌LY6 土壤中镉的状态变化
(I)从斜面保藏管接种一环肠杆菌LY6到50ml有氮基础培养基中，置28 °C摇床中150rpm/min振荡培养到指数期，作为种子液；取种子液以1%体积的接种量接种到0.5L新鲜培养基中，置28°C摇床中150rpm/min振荡培养至指数期待用。培养基配方如下:鹿糖，1g ;K2HP04，2g ;(_2S04，lg ;MgS04.7Η20，0.5g ;CaC03，0.1g ;酵母膏，0.5g ;NaCl，0.1g ;蒸馏水，lL，pH 7.2。
[0030](2)取步骤(I)中得到菌液以1%体积的接种量加入到盛有40g镉污染浓度为10mg/kg 土壤的培养皿中，置28°C恒温培养箱中培养待测；
(3)每间隔7天取步骤(2)中培养皿土样测定其不同形态镉的含量。测试方法采用参考文献“刘丽娟等.不同改良剂对污染土壤中Cd形态影响的研宄。农业环境科学学报，2013,32 (9):1778-1785"中公布的方法。接种LY6菌悬液的土壤中可交换态镉(EC)、碳酸盐结合态镉(Ce)、铁锰氧化物结合态镉(FM)、有机质结合态镉(OF)、残渣态镉(0F)的含量如图2所示，图3表示未接种LY6菌悬液的土壤中个相映形态的镉含量水平。
[0031]从图2与图3的比较可以看出，通过接种肠杆菌LY6经过28天(4周)的菌种繁殖，土壤中可交换态镉含量显著降低，与未接种LY6的土壤镉形态相比，接种LY6的土壤有至少50%的镉分别以碳酸盐结合态、铁锰氧化物结合态、有机质结合态等非活性形态被吸附固定，大大降低了土壤中可交换态等有效态镉的含量，减少镉对植物的污染。
[0032]实施例4:
肠杆菌LY6分泌生长素IAA的效应
(I)从斜面保藏管接种一环肠杆菌LY6到50ml培养基中，置28°C摇床中150rpm/min振荡培养到指数期，作为种子液；取种子液以1%体积的接种量接种到0.5L新鲜培养基中，置28°C摇床中150rpm/min振荡培养，取不同时期的培养液测定其生长素(IAA)的含量。
[0033]培养基配方如下:0.5g酵母浸粉，0.5g胰蛋白胨，0.5g酪蛋白氨基酸，0.5g葡萄糖，0.5g可溶性淀粉，0.3g丙酮酸钠，0.3gK2HP04，0.05gMgS04.7Η20，0.5 g L-色氨酸，蒸馏水定容至 1000 mL, pH 为 7.2 ±0.2。
[0034](2) IAA的测定，取步骤(I)中不同培养时期的菌悬液5mL，分别于10，000 g离心1min,取上清液加入等体积Salkowski比色液，避光静置30min，采用分光光度法测定其IAA的含量，具体测定方法参考文献:“姜晓宇等，水稻种子内生细菌多样性及其分泌植物生长素能力的测定，微生物学报，2013，53 (3): 269-275”，测定结果见图4。
[0035]从图4中可以看出，肠杆菌LY6具有较强的分泌植物生长素(IAA)活性，随着菌种快速繁殖，IAA含量逐渐增加，在肠杆菌LY6生长3天(72小时)后达到最大IAA产出量，单位菌悬液中IAA含量达到225mg。
【主权项】
1.对镉具有固定效应，并能促进植物生长的肠杆菌，其特征在于其拉丁文名Enterobacter 5/7，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期:2014 年 8 月 25 日，保藏编号:CGMCC N0.9539。
2.如权利要求1所述的肠杆菌在去除水体镉污染、固定土壤中的镉，降低土壤中有效态锦的含量方面的应用。
3.如权利要求1所述的肠杆菌在促进植物生长方面的应用。
【专利摘要】本发明为对镉具有固定效应，并能促进植物生长的肠杆菌及其应用，解决重金属镉污染的问题及镉污染土壤中植物难以生长的问题。其拉丁文名Eterobacter sp，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年8月25日，保藏编号：CGMCC No.9539。本发明菌株对镉的吸附效应可以聚集水污染环境中镉进而去除，达到净化水体的目的；同时，本发明菌株也可以吸附固定土壤中的重金属镉，降低土壤中有效镉的含量；此外，本发明菌株具有合成分泌生长素IAA的效应，能够促进植物快速生长，在实际生产中有着广泛的应用前景。CGMCC No.953920140825
【IPC分类】B09C1-10, C02F101-22, A01P21-00, C02F3-34, C12N1-20, C12R1-01
【公开号】CN104673715
【申请号】CN201510059908
【发明人】侯勇, 张亮, 夏中梅, 王强峰, 朱彭玲, 黄秀辉, 胡苏 , 王赟, 曾芸, 王兰英, 曾显斌
【申请人】四川省兰月科技有限公司, 四川省农业科学院生物技术核技术研究所
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月5日