一种卷枝毛霉dk1菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物纺织技术领域，特别涉及一种卷枝毛霉DKl菌株及其应用。
【背景技术】
[0002] 卷枝毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。在高温、高湿度以及通风不良 的条件下生长良好。卷枝毛霉的用途很广，可以产生果胶酶、木聚糖酶、漆酶、凝乳酶等。常 用的毛霉主要有鲁氏毛霉和总状毛霉。腐生，广泛分布于植物残体、腐败有机物、动物粪便 和土壤中。
[0003] 在麻的初加工中，需要通过一种怄麻过程来预先处理部分胶质（主要是果胶和半 纤维素）。怄麻过程实际上应用了传统的微生物技术，它是通过微生物和酶的协同作用缓慢 地去除附着在纤维表面非纤维素胶质的过程。怄麻过程对麻纤维质量影响很大，常用的怄 麻方式有雨露怄麻和酶法怄麻。
[0004] 此外，纺织加工中，必须进一步经过煮炼脱胶，即去除果胶、半纤维素和木质素等 非纤维素物质（统称为胶质），才能获得用于轻纺的纤维，实现其使用价值。目前，麻行业常 用的煮练方法主要是化学方法和酶法脱胶，化学脱胶工艺耗能大，设备损耗大，且排放的废 水无法循环利用，污染问题严重。酶法脱胶就是将脱胶菌培养到菌生长的衰老期后进行过 滤或离心等处理，再用得到的粗酶液浸渍原麻。粗酶液可以将麻纤维中的果胶、半纤维素、 木质素等物质分解转化为简单的低分子物质，从而完成麻纤维的脱胶过程。酶法脱胶工艺 无需专用设备，快速高效，无污染，生产的精干麻质量好。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种卷枝毛霉DKl菌株及其应用，该菌株生长 周期短，菌种不易被污染，处理成本低，处理后纤维质量好，处理环境温和，耐热性能好，无 环境污染等优点；能够直接用于亚麻、黄麻、红麻和竹纤维脱胶，具有脱胶周期短，纤维分散 率高，脱胶效率高。
[0006] 本发明的一种卷枝毛霉DKl菌株，其ITS序列如SEQ ID NO: 1所示。
[0007] 根据ITS测序Blast及聚类分析结果，该菌与卷枝毛霉相似性为99%，结合生理 生化试验结果和镜检分析，命名此菌株为卷枝毛霉（Mucor circinelloides)DKl菌株。ITS 测序中，所采用的正向引物为：ITSl(5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）、反向引物为ITS4(5' -T CCTCCGCTTATTGATATGC-3'），均为国际通用引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合 成。
[0008] 本发明所采用的卷枝毛霉（Mucor circinelloides)DKl菌株，保藏单位名称： CGMCC中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号中国科学院微生物研宄所，保藏号为CGMCC NO. 10143,保藏日期为2014年12 月15日。建议分类命名为：卷枝毛霉（Mucor circinelloides)。
[0009] 本发明的一种卷枝毛霉DKl菌株的应用，所述菌株应用于怄麻制备亚麻、黄麻、红 麻或竹纤维。
[0010] 所述具体怄麻工艺包括：
[0011] ⑴卷枝毛霉DKl菌株保存于PDA培养基，添加冻存缓冲液；
[0012] (2)在灭菌冷却后的PDA培养基中，接入步骤⑴所得的菌一环，在转速200~ 400rpm，30~40°C下摇瓶培养24~36小时；
[0013] (3)将摇瓶培养后的PDA培养基接种入亚麻、黄麻、红麻原麻或竹纤维发酵培养 基，在转速200r/min、温度30°C条件下摇瓶培养24小时得到发酵菌液；
[0014] (4)准备怄麻池；
[0015] (5)将制备的发酵菌液使用喷淋法喷洒到亚麻、黄麻、红麻原麻或竹纤维上做怄麻 处理，怄麻后制得供纺织制品用亚麻、黄麻、红麻或竹纤维，怄麻条件为自然温度，PH自然； 喷淋法的工艺具体为每48小时向怄麻区域喷洒菌液8ml。
[0016] 所述步骤（1)中的冻存缓冲液每100mL的配方为：磷酸二氢钾0. lg，磷酸氢二钾 0. 02g，柠檬酸钠0. 06g，七水合硫酸镁0. 03g，甘油12ml，加水定容至100ml，制得。
[0017] 所述步骤（3)中的亚麻、黄麻、红麻原麻或竹纤维发酵培养基配方为：亚麻、黄麻、 红麻原麻或竹纤维25g，以亚麻、黄麻、红麻原麻或竹纤维的质量为基准，氯化钾的质量分数 为1%，磷酸氢二钾的质量分数为2%，硫酸镁的质量分数为1%，硫酸亚铁的质量分数为 0. 02%，硫酸铵的质量分数为10%，补水至5000ml定容。
[0018] 本发明的一种卷枝毛霉DKl菌株的应用，所述菌株应用于对亚麻、黄麻、红麻或竹 纱线的煮练。
[0019] 所述煮练工艺包括：
[0020] (1)卷枝毛霉DKl菌株保存于PDA培养基，添加冻存缓冲液；
[0021] ⑵在灭菌冷却后的PDA培养基中，接入步骤⑴所得的菌一环，在转速200~ 400rpm，30~40°C下摇瓶培养24~36小时；
[0022] (3)将摇瓶培养后的PDA培养基接种入亚麻、黄麻、红麻或竹纤维发酵培养基，在 转速200r/min、温度30°C条件下摇瓶培养24~36小时得到发酵菌液；
[0023] (4)将灭菌后的亚麻、黄麻、红麻或竹纱线与步骤（3)所得的发酵菌液按质量比1 : 20混合，在40~50°C，200~400rpm摇床中煮练1-4天，随后除去煮练液，沸煮，冲洗以去 除细菌，停止煮练。
[0024] 本发明的一种卷枝毛霉DKl菌株的应用，所述菌株应用于对亚麻、黄麻、红麻原麻 或竹织物的脱胶。
[0025] 所述脱胶工艺包括：
[0026] (1)卷枝毛霉DKl菌株保存于PDA培养基，添加冻存缓冲液；
[0027] (2)在灭菌冷却后的PDA培养基中，接入步骤⑴所得的菌一环，在转速200~ 400rpm，30~40°C下摇瓶培养24~36小时；
[0028] (3)将摇瓶培养后的PDA培养基接种入亚麻、黄麻、红麻原麻或竹织物发酵培养 基，在转速200r/min、温度30°C条件下摇瓶培养24~36小时得到发酵菌液；
[0029] (4)将灭菌后的亚麻、黄麻、红麻原麻或竹织物与步骤（3)所得的发酵菌液按质量 比1 :20混合，在40~50°C，200~400rpm摇床中脱胶1-4天，随后除去脱胶液，沸煮，冲洗 以去除细菌，停止脱胶。
[0030] 所述的亚麻纤维可以用作服装面料、装饰织物、桌布、床上用品和汽车用品等产业 用品。
[0031] 所述的黄、红麻纤维可以用作麻袋、麻布、造纸、绳索、织地毯和窗帘等纺织用品。
[0032] 所述的竹纤维可以用作夹克衫、休闲服、西装套服等服装面料、凉席、床单和毛巾、 窗帘、围巾和浴巾、或医疗护理用品等。
[0033] 有益效果
[0034] (1)本发明能够直接用于亚麻、黄麻、红麻和竹纤维脱胶，具有脱胶周期短，纤维分 散率高，脱胶效率高；本发明的菌株生长周期短，菌种不易被污染，处理成本低，处理后纤维 质量好，处理环境温和，耐热性能好，无环境污染等优点；
[0035] (2)本发明工艺简单，适合大规模工业化生产等特点，利用该体系进行亚麻、黄麻、 红麻和竹纤维脱胶，具有脱胶周期短，纤维分散率高，脱胶效率高，纤维柔软，精干麻质量好 等优点。
【附图说明】
[0036] 图1和图2均为本发明菌株显微镜染色照片（油镜）。
【具体实施方式】
[0037] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0038] 实施例1
[0039] 麻纤维和竹纤维怄麻或煮练菌种的筛选方法：
[0040] (1)怄麻基地获取腐烂麻及其泥土，将腐烂麻及其泥土与PDA培养基按照Ig :20ml 比例置于PDA培养基中，富集培养10天。然后取0.1 mlPDA培养物涂布于分离培养基中， 30°C静置培养1-4天，获得野生型生物处理优质菌株。
[0041] (2)将步骤（1)中得到的菌株接种到PDA培养基中，30°C培养72h。添加冻存缓冲 液，存于_80°C。
[0042] 所述步骤（I)PDA培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水 1000 mL, pH 自然。
[0043] 所述步骤（2)冻存缓冲液每100mL的配方：磷酸二氢钾0. lg，磷酸氢二钾0. 02g， 柠檬酸钠〇. 〇6g，七水合硫酸镁0. 03g，甘油12ml，加水定容至100ml，制得。
[0044] 该菌株生长迅速，能产生黑灰色菌丝，毛霉菌丝呈棉絮状，无隔膜，有多个细胞核， 可以通过孢囊孢子进行无性繁殖。
[0045] 实施例2
[0046] 利用卷枝毛霉DKl菌株制备漆酶的方法：
[0047] (1)卷枝毛霉DKl菌株保存于PDA培养基，添加冻存缓冲液；
[0048]