一种七叶皂苷钠的制备方法、包含其的外用制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药生物技术领域，涉及一种七叶皂苷钠的制备方法包含其的外用制 剂及其应用。具体而言，本发明涉及从中药娑罗子中提取七叶皂苷钠的制备技术及用该技 术制备的七叶皂苷钠制备成外用型制剂药物（气雾剂/喷雾剂）的技术，并将其外用制剂 应用到外伤导致组织水肿等损伤的治疗中。
【背景技术】
[0002] 人体轻微外伤，包括各种挫伤、擦伤、扭伤等，常会引起患者伤处的水肿、疼痛和活 动受限，给生活、工作带来不便，有些甚至因伤后处理不当容易引发严重后果。伤后24小时 内的损伤，会引起局部组织渗出和肿胀、疼痛、制动等，皮肤创面损伤后局部抵抗力下降，容 易继发细菌感染等，后者可以进一步加重病情。因此，损伤后创面的保护、防护感染以及消 肿止痛是处理软组织损伤的基本原则。目前治疗这些轻微外伤的方法虽然很多，如使用红 汞、紫药水、碘伏、乙醇等各种消毒剂；或者云南白药喷雾剂等。但是这些方法大部分功能单 一，只能起到防止创面感染和创面的部分保护作用，止痛消肿效果差，而云南白药喷雾剂效 果虽然较好，但是两个喷瓶的使用不方便携带和操作。
[0003] 七叶阜苷又称七叶阜苷酸，为七叶树科植物七叶树（Aesculus hippocastanum L.也称为天师栗（Aesculus Wilsonii Rehd.)、梭稷树、梭稷子、猴板栗等）的干燥成熟果 实娑罗子中提取得到的总皂苷、七叶皂苷或异七叶皂苷等的总称。目前在临床中应用 最多的为总七叶皂苷（Total escin)，主要含有七叶皂苷A、B、C和D。在我国根据液相色谱 出峰时间的先后，A-D的物质分别对应escin Ia、escin Ib、isoescin Ia及isoescin Ib0 其中的七叶皂苷A和B是β-型七叶皂苷，其结构式如下式（1)所示。七叶皂苷C和D是 七叶皂苷A和B的C21-羟基上乙酸酯转位到C28-羟基的异构体，是Crypto-型（异型） 七叶皂苷，其结构式如下式（2)所示。
[0004]
【主权项】
1. 一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于，所述方法包括提取和分离纯化步骤，所述 提取是将娑罗子粉用0-80%的乙醇或甲醇溶液（优选乙醇）进行提取，所述分离纯化包括 以无机钠盐水溶液为流动相进行的离子交换层析。
2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取是使用0-80%的乙醇或甲醇 溶液进行多次提取，并且所述乙醇或甲醇溶液的浓度不变或逐次递减； 优选的是，所述提取进行三次，第一次提取时使用0~80 %的乙醇溶液，料液比为 1:3-1:8千克/升，优选1:5千克/升；第二次提取时使用0~80%的乙醇溶液，料液比为 1:2-1:5千克/升；第三次提取时使用0~80的乙醇溶液，料液比为1:1-1:4千克/升，其 中如果第一、二次提取时料液比中液体量偏大第三次提取可省略； 更优选的是，所述提取包括下述步骤：将娑罗子粉与提取液按料液比1:3-1:8重量体 积比、优选1:5千克/升浸泡0. 5-1. 5小时、常规回流提取1-2小时；过滤后得到的滤渣再 按料液比1:3加入同第一次的提取液或比第一次醇浓度略低的提取液常规回流提取1小 时，过滤后的滤渣再按料液比1:3加入同第二次的提取液或比第二次醇浓度略低的提取液 常规回流提取0. 5小时（若第一、二次提取液醇浓度大于50%，则不需要第三次提取），过 滤、弃渣；提取的温度控制在45°C -80°C ;合并三次滤液。
3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化依次包括脱色、离子交换 层析、精制和结晶步骤； 优选的是，所述脱色为活性炭脱色或中性氧化铝脱色，优选脱色后将脱色液离心去沉 淀或静置澄清，上清过滤，浓缩回收乙醇； 更优选的是，所述流动相为PH4~7无机盐缓冲液作为平衡液和强酸强碱盐作为洗脱 液，如以5~IOOmM Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液（pH4~7)作为样品缓冲液和平衡液A，优选 pH5. 7 的 IOmM Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，以 0? 5 ~2M NaCl-5 ~IOOMNa2HPO4-NaH2PO4缓冲液 作为洗脱液8，优选说似(：1-101^ &2即04-似4?04缓冲液；线性梯度洗脱仏液从100%开始 洗脱，逐步递减到洗脱完变成0% ;B液从0%开始洗脱，逐步递加到洗脱完变为100% )，洗 脱体积为柱床体积的2~5倍； 还优选的是，所述离子交换层析步骤包括：装柱：将离子交换介质装入层析柱内，以平 衡液（A液）平衡，将过滤的提取上清液上样，用平衡液（A液）洗去末结合的组分，收集穿 过峰（检测无目标物后弃去）；盐梯度洗脱：以平衡液为A液，以A液+NaCl为B液，线性 梯度洗脱，起始比例：A:B = 100:0 ;终始比例：A:B = 0:100,洗脱时间依床体积和流速而 定，收集洗脱峰，若吸附量大可以不装柱而用介质直接搅拌吸附，待吸附完全后（被吸附液 中检测不到七叶皂甙），滤去被吸附液，用平衡液洗去末吸附的杂质，装柱，按前述方法梯度 洗脱或用B液搅拌洗脱三次，收集洗脱液。
4. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述精制、结晶包括醇提或酸沉； 优选的是，所述醇提结晶包括以下步骤：（1)醇沉皂苷：向上清液中边搅边加入无水 乙醇至75~85%，静置；（2)过（抽）滤：将沉淀物过（抽）滤至干，收集滤液；（3)浓缩 回收滤液中乙醇，浓缩液中结晶出七叶皂甙钠，过滤或离心收集晶体；(4)向浓缩母液中加 入适量无水乙醇，混匀；（5)浓缩回收乙醇，浓缩液中结晶出七叶皂甙钠，过滤或离心收集 晶体；（6)合并收集晶体，加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀结晶物呈疏松状，色 白；（7)装盘干燥：结晶物分装于烘盘内，厚度l-2cm，按常规真空干燥法在干燥箱内烘干， 即制备得七叶皂苷钠； 所述酸沉包括以下步骤：（1)调PH :在收集峰液中边搅拌边加入稀盐酸液或醋酸，调pH 值到1-3,静置；（2)按前述（2)抽滤或离心、收集沉淀物、（6)无水乙醇脱水、（7)装盘干燥 制备得七叶皂苷钠。
5. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述七叶皂苷钠包括七叶皂苷钠A、七 叶皂苷钠B、七叶皂苷钠C和七叶皂苷钠D ; 优选的是，所述七叶皂苷钠A、B、C、D组分峰面积占比之和为90 %以上（HPLC法），且 A、B、C、D各组分峰面积的百分比符合药用标准。
6. -种外用制剂，所述外用制剂包括根据权利要求1~5中任一项方法制得的七叶皂 苷钠和药学上可接受的药物载体，优选其重量比为1-5 :12-30。
7. 如权利要求6所述的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂为气雾剂或喷雾剂； 优选的是，所述气雾剂或喷雾剂还包含麻醉药，优选为奴夫卡因。
8. 根据权利要求7所述的外用制剂，其特征在于，对于所述气雾剂或喷雾剂，精密过滤 后的药液测定其固定性物含量，应在1.0% (W/V)以上；过滤质量的监控取精密过滤的滤液 200ml，用已称重的玻砂坩埚过滤，干燥2小时，称重，其重量增加彡0.0 lg。
9. 如权利要求6所述的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂用于预防或治疗外伤导 致的组织水肿。
10. 权利要求1~5中任一项方法制得的七叶皂苷钠在制备用于预防或治疗外伤导致 的组织水肿的药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种七叶皂苷钠的制备方法、包含其的外用制剂及其应用。具体而言，涉及一种七叶皂苷钠的制备方法、外用制剂的制备及其在制备预防或治疗外伤导致的组织水肿的药物中的应用，其特征在于，所述方法包括提取和分离纯化步骤，所述提取为将娑罗子粉用0-80％的乙醇或甲醇溶液(优选乙醇)进行提取，所述分离纯化包括以无机钠盐水溶液为流动相进行离子交换层析。本发明方法制得产品纯度高、生产周期短、成本低及无环境污染等问题，符合制备天然、安全、高纯七叶皂苷的发展趋势。
【IPC分类】A61P29-00, C07J63-00, C07H15-256, A61P7-10, A61K31-166, A61P23-00, C07H1-08, A61K31-704
【公开号】CN104804060
【申请号】CN201510229253
【发明人】王增禄, 王多宁, 于爱华, 张伯庆
【申请人】西安蓝绿卓生物科技有限公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年5月7日