一种对异鼠李素具有选择性的印迹聚合物制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明为异鼠李素分子印迹聚合物的制备，具体地说是采用本体聚合法制备一种 对异鼠李素具有高选择性、高分离性能的富集分离材料。
【背景技术】
[0002] 异鼠李素属于银杏黄酮化合物，是天然药物中一类重要的有效成分，具有抗氧 化、抗癌、保护心血管和抗炎等药理功能。目前，异鼠李素等黄酮类化合物的提取主要仍以 溶剂萃取为主，依据其极性和水溶性的大小选择合适的溶剂进行分离。其他分离纯化的方 法有超声波提取法、酶提取法、超临界流体萃取法、大孔树脂吸附法等，但都不同程度存在 过程繁琐、设备成本高、纯度低等问题。
[0003] 分子印迹技术是模拟抗体与抗原、酶与底物等存在于自然界的分子识别作用，制 备在空间结构和结合位点上与目标分子匹配，并对其具有特殊亲和性的分子识别材料。由 于分子印迹聚合物（Molecular Imprinting Polymer, MIP)具备强特异性和高选择性等优 点，可将一些低含量的药物有效成分直接从粗提物中筛选出来，具有良好的应用前景。空白 印迹聚合物（Nonimprinted Polymer, NIP)是指未添加模板分子而合成的聚合物。本体聚 合法是分子印迹技术早期所采用的方法，此法制备工艺简单，操作条件易于控制。
【发明内容】
[0004] 本发明采用本体聚合法制备异鼠李素分子印迹聚合物，该方法操作简单，制备出 的聚合物作为吸附材料可用于从银杏黄酮粗提物中选择性提取、分离、富集异鼠李素。
[0005] 本发明通过以下技术方案实现，其步骤为：
[0006] (1)将模板分子和功能单体按摩尔比1:4-1:8溶解到致孔剂中，超声混合脱气 10-20min，密封，机械搅拌(转速100-400转/分钟）l-3h ;
[0007] (2)在步骤1的混合液中加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA)，继续搅拌， 充分溶解20min，后通氮脱氧，再加入引发剂偶氮二异丁腈（AIBN)，真空状态下于60-65°C 恒温油浴中反应12_48h，最终得到块状固体聚合物；
[0008] (3)将合成的聚合物机械粉碎后，过筛，并用丙酮反复沉降；
[0009] (4)以甲醇：乙酸（V/V，9:1-5:5)为提取液，索氏提取72h以上，洗脱除去模板分 子，后用甲醇平衡除去乙酸；
[0010] (5)将所得聚合物置于真空干燥箱中60°C干燥24h，即得到异鼠李素分子印迹聚 合物。
[0011] 在步骤（1)中，功能单体为丙烯酰胺（AM)、2-乙烯基吡啶（2-VP)、4-乙烯基吡啶 (4-VP)、甲基丙烯酸（MAA)或1-乙烯基咪唑，致孔剂选用氯仿、丙酮、四氢呋喃THF (或加少 量DMF)，模板分子与致孔剂的量比为：1:6-1:15 [n (mmol) : V (ml)]。
[0012] 在步骤（2)中，交联剂物质的量为功能单体的3-10倍，引发剂用量为功能单体与 交联剂质量之和的1-10%。
[0013] 本发明的优点是：含多孔结构的分子印迹聚合物对模板分子具有良好的吸附性 能。通过吸附平衡实验及特异吸附性实验表明：该聚合物含有与模板分子空间结构相匹配、 官能团相互作用的三维孔穴，具有显著的分子"记忆"功能。本发明制备的聚合物可用作固 相萃取吸附材料，也可用作高效液相色谱柱填料，可达到有效分离提取异鼠李素的目的，具 有广阔的应用前景。
【附图说明】
[0014] 图1是实施例1制得异鼠李素分子印迹聚合物的吸附等温线图。
[0015] 图2是实施例1制得异鼠李素分子印迹聚合物的吸附动力学曲线。
[0016] 图3是实施例2制得异鼠李素分子印迹聚合物的吸附平衡等温线图。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1
[0018] 将Immol模板分子异鼠李素和8mmol功能单体4-VP溶解到15ml致孔剂丙酮 中，机械搅拌Ih,加入交联剂EDMA40mmol，超声脱气20min，通氮脱氧40min，加入引发剂 AIBN50mg，真空状态下密封，于60°C油浴中反应24h得固体聚合物。将合成的聚合物机 械粉碎并过200目分样筛，通过丙酮反复沉降2-3次除去细小颗粒后，用甲醇：乙酸（V/V， 9:1)为提取液，对聚合物颗粒索氏提取72h，后再用纯甲醇索氏提取24h，平衡除去乙酸。将 所得聚合物置于真空干燥箱中60°C干燥24h，即得到异鼠李素分子印迹聚合物MIP。NIP的 制备不加入模板分子异鼠李素，其他条件与MIP相同。
[0019] ( 1)分子印迹聚合物的吸附平衡性实验
[0020] ①分别配制2、4、6、8、10、12、14mg/L异鼠李素乙醇溶液50ml ;
[0021] ②分别加入MIP (NIP) 50mg于7种不同浓度溶液中；
[0022] ③置于摇床40°C振荡24h，后离心沉降，取上清液，用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜 过滤，所得溶液用紫外可见分光光度计分别测定其吸光度。
[0023] ④采用差减法计算聚合物对底物的吸附量Q。
[0024] 计算公式为：Q= (Ctl-Ce) V/M
[0025] Q--聚合物的吸附量，mg/g;
[0026] C0--平衡吸附实验中原始底物浓度，mg/ml;
[0027] Ce--吸附平衡后上清液所测得的底物浓度，mg/ml;
[0028] V--吸附液体积，ml;
[0029] M--加入的聚合物质量，mg。
[0030] 对MIP及NIP不同浓度的异鼠李素溶液的等温吸附结果如图1所示。
[0031] 由图1可知，在不同浓度范围内，MIP均比NIP对异鼠李素有较高的吸附量，表明 两种聚合物在空间结构上存在不同的吸附机理：NIP主要靠聚合物表面孔洞随机性吸附异 鼠李素，吸附力较弱，且无选择性；MIP含有与异鼠李素官能团相匹配的印迹点位及空间结 构，因而对异鼠李素分子具有较强的吸附能力。
[0032] (2)分子印迹聚合物的吸附动力学实验
[0033] ①配制6. 4mg/L异鼠李素乙醇溶液；
[0034] ②称取0. 5g洗脱后的MIP(NIP)置于IL的磨口锥形瓶中，再加入浓度为6. 4mg/L 的异鼠李素乙醇溶液；
[0035] ③置于40°C恒温摇床密闭振荡24h，从振荡开始时计时，分别在lmin、3min、5min、 15min、30min、lh、3h、5h时抽取滤液，过0. 45 μ m有机系滤膜，所得溶液用紫外可见分光光 度计分别测定其吸光度；
[0036] ④采用差减法计算聚合物对底物的吸附量Q。
[0037] 计算公式为：Q= (Ctl-Ce) V/M
[0038] Q--聚合物的吸附量，mg/g;
[0039] C0--平衡吸附实验中原始底物浓度，mg/ml;
[0040] Ce--吸附平衡后上清液所测得的底物浓度，mg/ml;
[0041] V-吸附液体积，ml ;
[0042] M--加入的聚合物质量，mg。
[0043] 对MIP及NIP不同浓度的异鼠李素溶液的吸附动力学结果如图2所示。
[0044] 由图2可知，MIP (NIP)对异鼠李素的吸附量在短时间内增加很快，然而随着振荡 时间延长，吸附速率降低，最终吸附量接近饱和。这是因为模板分子通过印迹和洗脱过程在 聚合物表面和内部形成了具有固定形态和大小的印迹"孔穴"，在吸附开始阶段，模板分子 被MIP的表面"孔穴"捕获，较浅的"孔穴"有利于聚合物对异鼠李素的快速吸附，与官能基 团发生作用，吸附速率较快，当表面"孔穴"达到吸附饱和后，底物向聚合物内部"孔穴"的传 质受到一定的阻力，吸附速率变慢。然而NIP的吸附量明显低于MIP，这表明两种聚合物