在玉米3号和4号染色体上的与镰孢属穗霉菌抗性相关联的基因座的制作方法_2

文档序号:8523965阅读:来源:国知局
SEQ ID N0 :11 是 PHM5273 的参考序列。
[0043] SEQ ID N0 :12 是 PHM497 的参考序列。
[0044] SEQ ID N0 :13 是 PHM4483 的参考序列。
[0045] SEQ ID N0 :14 是 PHM2015 的参考序列。
[0046] SEQ ID N0 :15 是 PHM10326 的参考序列。
[0047] SEQ ID N0 :16 是 PHM9363 的参考序列。
[0048] SEQ ID N0 :17 是 PHM18162 的参考序列。
[0049] SEQ ID N0 :18 是 PHM9942 的参考序列。
[0050] SEQ ID N0 :19 是 PHM5247 的参考序列。
[0051] SEQ ID N0 :20 是 PHM3985 的参考序列。
[0052] SEQ ID N0 :21 是 PHM6226 的参考序列。
[0053] SEQ ID N0 :22 是 PHM10262 的参考序列。
[0054] SEQ ID N0 :23 是 PHM12969 的外部正向引物。
[0055] SEQ ID N0 :24 是 PHM12969 的内部正向引物。
[0056] SEQ ID N0 :25 是 PHM12969 的内部反向引物。
[0057] SEQ ID N0 :26 是 PHM12969 的外部反向引物。
[0058] SEQ ID NO :27是PHM2204的外部正向引物。
[0059] SEQ ID NO :28是PHM2204的内部正向引物。
[0060] SEQ ID NO :29是PHM2204的内部反向引物。
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[0069] SEQ ID NO :38 是PHM12209 的外部反向引物。
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[0071] SEQ ID NO :40 是PHM13926 的内部正向引物。
[0072] SEQ ID NO :41 是PHM13926 的内部反向引物。
[0073] SEQ ID NO :42 是PHM13926 的外部反向引物。
[0074] SEQ ID NO :43 是PHM10091 的外部正向引物。
[0075] SEQ ID NO :44 是PHM10091 的内部正向引物。
[0076] SEQ ID NO :45 是PHM10091 的内部反向引物。
[0077] SEQ ID NO :46 是PHM10091 的外部反向引物。
[0078] SEQ ID NO :47 是PHM18211 的外部正向引物。
[0079] SEQ ID NO :48 是PHM18211 的内部正向引物。
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[0081] SEQ ID NO :50 是PHM18211 的外部反向引物。
[0082] SEQ ID NO :51是PHM1695的外部正向引物。
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[0090] SEQ ID NO :59 是PHM10892 的外部正向引物。
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[0092] SEQ ID NO :61 是PHM10892 的内部反向引物。
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[0102] SEQ ID NO :71是PHM4483的外部正向引物。
[0103] SEQIDNO:72是PHM4483的内部正向引物。
[0104] SEQ ID NO :73是PHM4483的内部反向引物。
[0105] SEQIDNO :74是PHM4483的外部反向引物。
[0106] SEQ ID NO :75是PHM2015的外部正向引物。
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[0110] SEQ ID NO :79 是 PHM10326 的外部正向引物。
[0111] SEQ ID NO :80 是 PHM10326 的内部正向引物。
[0112] SEQ ID NO :81 是 PHM10326 的内部反向引物。
[0113] SEQ ID NO :82 是 PHM10326 的外部反向引物。
[0114] SEQ ID NO :83是PHM9363的外部正向引物。
[0115] SEQIDNO :84是PHM9363的内部正向引物。
[0116] SEQ ID NO :85是PHM9363的内部反向引物。
[0117] SEQ ID NO :86是PHM9363的外部反向引物。
[0118] SEQ ID NO :87 是 PHM18162 的外部正向引物。
[0119] SEQ ID NO :88 是 PHM18162 的内部正向引物。
[0120] SEQ ID NO :89 是 PHM18162 的内部反向引物。
[0121] SEQ ID NO :90 是 PHM18162 的外部反向引物。
[0122] SEQ ID NO :91是PHM9942的外部正向引物。
[0123] SEQ ID NO :92是PHM9942的内部正向引物。
[0124] SEQ ID NO :93是PHM9942的内部反向引物。
[0125] SEQIDNO :94是PHM9942的外部反向引物。
[0126] SEQIDNO :95是PHM5247的外部正向引物。
[0127] SEQ ID NO :96是PHM5247的内部正向引物。
[0128] SEQIDNO:97是PHM5247的内部反向引物。
[0129] SEQ ID NO :98是PHM5247的外部反向引物。
[0130] SEQ ID NO :99是PHM3985的外部正向引物。
[0131] SEQ ID NO :100 是 PHM3985 的内部正向引物。
[0132] SEQ ID NO :101 是 PHM3985 的内部反向引物。
[0133] SEQ ID NO :102 是 PHM3985 的外部反向引物。
[0134] SEQ ID NO :103 是 PHM6226 的外部正向引物。
[0135] SEQ ID NO :104 是 PHM6226 的内部正向引物。
[0136] SEQ ID NO :105 是 PHM6226 的内部反向引物。
[0137] SEQ ID NO :106 是 PHM6226 的外部反向引物。
[0138] SEQ ID NO :107 是 PHM10262 的外部正向引物。
[0139] SEQ ID NO :108 是 PHM10262 的内部正向引物。
[0140] SEQ ID NO :109 是 PHM10262 的内部反向引物。
[0141] SEQ ID NO :110 是 PHM10262 的外部反向引物。
[0142] SEQ ID NO :111 是标记 PHM12209-20-U 的引物 1。
[0143] SEQ ID NO :112 是标记 PHM12209-20-U 的引物 2。
[0144] SEQ ID NO :113 是标记 PHM12209-20-U 的引物 1。
[0145] SEQ ID NO :114 是标记 PHM12209-20-U 的引物 2。
[0146] SEQ ID NO :115 是标记 PHM12209-21-U 的引物 1。
[0147] SEQ ID NO :116 是标记 PHM12209-21-U 的引物 2。
[0148] SEQ ID NO :117 是标记 PHM12209-21-U 的引物 1。
[0149] SEQ ID NO :118 是标记 PHM12209-21-U 的引物 2。
[0150] SEQ ID NO :119 是标记 PHM12209-23-U 的引物 1。
[0151] SEQ ID NO :120 是标记 PHM12209-23-U 的引物 2。
[0152] SEQ ID NO :121 是标记 PHM12209-23-U 的引物 1。
[0153] SEQ ID NO :122 是标记 PHM12209-23-U 的引物 2。
[0154] SEQ ID NO :123 是标记 PHM10892-3-U 的引物 1。
[0155] SEQ ID NO :124 是标记 PHM10892-3-U 的引物 2。
[0156] SEQ ID NO :125 是标记 PHM10892-3-U 的引物 1。
[0157] SEQ ID NO :126 是标记 PHM10892-3-U 的引物 2。
【具体实施方式】
[0158] 本发明提供在玉米中的等位基因组合物以及用于鉴定和选择具有增强的镰孢属 穗霉菌抗性的玉米植株的方法。提供了以下定义以利于理解本发明。
[0159] 在详述本发明之前,应当了解本发明不受特定实施方案的限制,它当然能够改变。 也应当了解本文所用的术语仅是为了描述特定实施方案,而不旨在进行限制。当在本说明 书和所附权利要求中使用时,除非内容清楚地表明,例如术语单数和单数形式"一个(a、an、 the)"包括复数指代。因此,例如术语"植株(plant、the plant、a plant)"包括多种植株; 这也取决于上下文,使用的术语"植株"也可包括该植株遗传相似或相同的子代;使用的术 语"核酸"实际上任选地包括该核酸分子的多个复制;同样地,术语"探针"任选地(并且通 常)包括许多相似或相同的探针分子。
[0160] 除非另外说明,核酸是以5'到3'方向从左往右写。说明书中所述的值范围包括 限定范围的端值在内并且包括在限定范围内的各个整数或任何非整数的分数。除非另外指 明,本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员一般理解相同的 含义。虽然与本文所述的那些方法和材料相似或等同的任何方法和材料可用于本发明的测 试实践,但本文描述了优选的材料和方法。在本发明的说明书和权利要求中,将根据下文列 陈述的定义使用以下术语。
[0161] 术语"等位基因"是指在特定基因座处出现的两个或更多个不同核苷酸序列的其 中一个。
[0162] "扩增子"是被扩增的核酸,例如使用任何可用的扩增方法(例如PCR、LCR、转录 等)通过扩增模板核酸而制备的核酸。
[0163] 在核酸扩增的情况下术语"扩增"是其中产生附加拷贝的选择核酸(或其转录形 式)的任何过程。一般的扩增方法包括基于多种聚合酶的复制方法,包括聚合酶链反应 (PCR)、连接酶介导的方法如连接酶链反应(LCR)、以及基于RNA聚合酶的扩增(例如通过转 录)方法。
[0164] 术语"装配"应用于BAC以及它们聚集以形成邻接DNA片段的倾向。BAC基于序列 比对"装配"成重叠群,如果BAC进行测序,或者经由它的BAC指纹与其它BAC指纹的比对 "装配"成重叠群。可使用因特网上公开可用的Maize Genome Browser找到所述装配。
[0165] 当一个等位基因是影响性状表达的DNA序列或等位基因的一部分或与之连锁时, 这个等位基因与这个性状"相关联"。等位基因的存在是性状表达方式的指示。
[0166] "BAC"或细菌人工染色体是来源于大肠杆菌(Escherichia coli)天然存在的F因 子的克隆载体。BAC能够接受DNA序列的较大插入序列。在玉米中,已经将许多BAC或细菌 人工染色体装配成重叠群(重叠的邻接基因片段,或"邻接DNA"),它们每个包含玉米基因 组DNA的较大插入序列。
[0167] "回交"是指其中杂交子代反复与其中一个亲本回交的过程。在一个回交方案中, "供体"亲本指具有将被渗入的期望基因或基因座的亲本植物。"受体"亲本(使用一次或多 次)或"轮回"亲本(使用两次或多次)指将基因或基因座渗入其中的亲本植物。例如参见 Ragot,M?等人(1995)标记辅助的回交:一个实际的例子,在Techniques et Utilisations des Marqueurs Moleculaires Les Colloques,第 72 卷,第 45-56 页,和 Openshaw 等人的 (1994)Marker-assisted Selection in Backcross Breeding, Analysis of Molecular Marker Data,第41-43页中。初始杂交产生FI代;然后术语"BC1"是指轮回亲本的第二次 使用,"BC2"是指轮回亲本的第三次使用等等。
[0168] 厘摩("cM")是重组频率的量度单位。一cM等于经过单代杂交在一个基因座上 的标记将与在第二基因座上的标记分离的1%的概率。
[0169] 如本文所用,术语"染色体区间"是指位于植株单个染色体上的基因组DNA的邻接 线性区域。位于单染色体区间上的遗传因子或基因是物理上连锁的。不特别限定染色体区 间的大小。在一些方面,位于单个染色体区间内的基因单元在遗传上连锁,遗传重组距离通 常为例如小于或等于20cM,或者小于或等于10cM。即,位于单个染色体区间内的两个基因 单元以小于或等于20 %或10%的频率进行重组。
[0170] "染色体"也可称为"连锁群"。
[0171] 术语"互补序列"是指与给定核苷酸序列互补的核苷酸序列,即所述序列相关于碱 基配对规律。
[0172] 术语"邻接DNA"是指重叠的邻接基因片段。
[0173] 术语"杂交的"或"杂交"是指经由授粉产生子代的配子融合(例如细胞、种子或 植物)。该术语包括有性杂交(一株植物被另一株植物授粉)和自交(自花授粉,例如当花 粉和胚珠来自相同植物时)。术语"杂交"是指经由授粉产生子代的配子融合行为。
[0174]"二倍体"生物(如植物)具有两组(基因组)染色体。
[0175] "病害抗性"是植物的一种特征,其中该植物避免了由植物_病原体相互作用造成 的病害症状,所述植物-病原体相互作用例如玉米和镰孢属轮枝镰孢菌、层出镰孢菌、和/ 或胶孢镰孢菌之间的相互作用。即,防止了病原体导致植物病害和相关的病害症状,或者, 病原体导致的病害症状被最小化或减弱了。本领域的技术人员将会知道,本文所公开的组 合物和方法可与本领域中可用的其它组合物和方法一起被用于保护植物免受病原体攻击。
[0176] "加倍单倍体"是通过单倍体染色体组加倍得到的。认为双单倍体植物是纯合植 物。
[0177] "优良品系"是源自育种并选择优异农学性能的任何品系。
[0178] "增强的抗性"是指对特定病原体、广谱病原体、或病原体引起的感染具有增强的 抗性水平。对真菌病原体轮枝镰孢菌(Fv)、层出镰孢菌(Fp)、和胶孢镰孢菌(Fs)的抗性水 平增加,例如造成了"增强"的或
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