HK2的siRNA的序列根据HK2基因的序列设计。在本发明的一个 实施例中，选用的siRNA序列如下：
[0023] siHR2#l :5' -CCAUCUCCUGUCCAAUGACAU-3'（SEQ ID No :27);
[0024] siHR2#2 :5' -CACAACCUGUUUGAGCCUGAA-3' （SEQ ID No :28);
[0025] siHR2#3 :5' -UGCUAGAGCUUACUCUGAGAA-3' （SEQ ID No :29)。
[0026] 综上，本发明的生物标志物HK2用于诊断鼻咽癌病人在接受放射治疗的敏感性以 及预测鼻咽癌的放疗预后，为确定鼻咽癌放疗增敏策略及降低鼻咽癌复发、转移，提高病人 生存率，降低死亡率具有重要指导意义。
【附图说明】
[0027] 图1是利用代谢组学分析平台获得的永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞 C666-1的代谢分析结果，其中A是代谢改变全景图，B显示了相较于永生化鼻咽上皮细胞 NP69,鼻咽癌细胞系C666-1中乳酸和山梨醇的含量显著增加（*表示t检验p < 0. 05)。
[0028] 图2显示了永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞CNE1、CNE1-LMP1、HNE2、 HNE2-LMP1、HKl和HKl-LMPl中相对葡萄糖摄取速率（A)和乳酸生成速率（B)，其中*表示 t检验p < 0· 05, **表示t检验p < 0· 01。
[0029] 图3显示了在永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞C666-1中PCR ARRAY检测 糖酵解相关分子的转录水平。
[0030] 图4显示了特异性靶向HK2的SiRNA能有效干扰鼻咽癌细胞中HK2的表达，由此抑 制鼻咽癌细胞的增值和诱导鼻咽癌细胞发生凋亡，其中：A和B显示了 HK2的siRNA能显著 抑制鼻咽癌细胞系CNE1、CNE1-LMP1、HEN2和HNE2-LMP1中HK2的表达，并能有效降低上述 细胞的相对葡萄糖摄取速率和乳酸生成速率；C表明HK2的siRNA抑制鼻咽癌细胞系CNEl、 CNE1-LMP1、HEN2和HNE2-LMP1中HK2的表达后，能显著抑制鼻咽癌细胞的增殖；D显示在 CNE1-LMP1和HNE2-LMP1中干扰HK2的表达能诱导细胞发生凋亡（*表示t检验p < 0. 05， **表示t检验p < 0. 01)。
[0031] 图5显示了 HK2与鼻咽癌预后的相关性检测结果，其中A显示了两例鼻咽癌组HK2 免疫组织化学检测结果，Case 1为HK2高表达的鼻咽癌组HK2免疫组织化学检测结果，Case 4为HK2高表达的鼻咽癌组HK2免疫组织化学检测结果；B是将鼻咽癌患者根据HK2表达高 低分组（HK2HIGH和HK2L0W)后结合临床随访数据对鼻咽癌放射治疗后的总生存时间进行 Kaplan-Meier 统计结果。
【具体实施方式】
[0032] 以下通过实施例进一步详细描述本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。
[0033] 本发明所用永生化鼻咽上皮细胞NP69为香港大学所建；鼻咽癌细胞系HK1、 C666-1为香港中文大学建系；鼻咽癌细胞系CNEl为中国医学院科学院肿瘤研宄所建系；鼻 咽癌细胞系CNE1-LMP1、HNE2、HNE2-LMP1、HKl-LMPl为中南大学肿瘤所建系。
[0034] 实施例1.鼻咽癌细胞中有氧糖酵解活化
[0035] 代谢组学分析方法是对特定细胞过程遗留下的特殊化学指纹的系统研宄，更具体 地说，是对小分子代谢物组的整体研宄。代谢组学的核心技术包括气象色谱-质谱联用、液 相色谱-质谱联用和核磁共振波谱技术。采用代谢组学方法分析鼻咽癌细胞中的代谢变化 谱，明确鼻咽癌细胞中的有氧糖酵解状态。
[0036] 实验方法如下：永生化鼻咽上皮细胞及鼻咽癌细胞系在75cm2细胞培养瓶中培 养三天后，胰酶消化后用含10%胎牛血清的RPMI-1640终止消化，细胞悬液离心后用预冷 PBS重悬两次。最后将细胞悬液离心后弃尽PBS，将细胞沉淀和细胞培养上清放入液氮中急 速冷却固定后置于_80°C保存。细胞样品解冻，在全自动MicroLab STAR系统（Hamilton Company)中进行代谢物质抽提。首先通过一系列的有机法和水剂法去除样品中的蛋白质， 保留小分子物质。将获得的小分子代谢物质等分成两份，置于TurboVap (Zymark)中去除有 机溶剂低温冻干。其中一份用于气象色谱-质谱联用分析，一份用于液相色谱-质谱联用 分析。
[0037] 代谢组学数据分析发现相较于永生化鼻咽上皮细胞，糖酵解途径的终产物乳酸 (lactate)的含量在鼻咽癌细胞中显著增加（p< 0.05)。此外，山梨醇（sorbitol)的含量 在鼻咽癌细胞中显著增加 （P < 0. 05)。这提示鼻咽癌细胞中有氧糖酵解途径和葡萄糖摄取 能力显著增加。结果见图1。
[0038] 实施例2.鼻咽癌细胞的葡萄糖摄取能力和乳酸生成能力增强
[0039] 利用临床全自动生物化学分析仪检测不同培养阶段的鼻咽癌细胞培养基中葡萄 糖和乳酸的含量，计算鼻咽癌细胞葡萄糖摄取能力和乳酸生成能力。
[0040] 实验方法如下：取5X IO5个细胞种于6孔板，待细胞贴壁后，更换新鲜培养基， 继续培养8小时后收集细胞培养上清并离心。利用全自动临床生化检测仪（Automatic Biochemical Analyzer，7170A，HITACHI，Japan)使用标准品进行校正后，用于检测培养上 清中葡萄糖及乳酸的浓度，利用细胞蛋白质浓度归一化后计算单位时间内永生化的鼻咽上 皮细胞和鼻咽癌细胞的葡萄糖摄取速率和乳酸生成速率。
[0041] 经过计算分析发现，鼻咽癌细胞的葡萄糖摄取速率和乳酸生成速率显著高于永生 化的鼻咽上皮细胞（P < 0. 05)。上述结果与代谢组学分析结果一致，提示鼻咽癌细胞的有 氧糖酵解处于异常活化状态。结果见图2。
[0042] 实施例3. HK2是鼻咽癌细胞中异常高表达的糖酵解分子
[0043] 为明确鼻咽癌细胞中糖酵解异常活化的分子机制，通过收集鼻咽癌细胞的信使 RNA (mRNA)，逆转录成cDNA后，利用实时荧光定量PCR技术检测糖酵解途径的多个糖酵解相 关分子的转录水平，明确HK2是鼻咽癌细胞中糖酵解高表达分子。
[0044] 实验方法如下：永生化的鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞以PBS洗2遍，然后加入含有 350 μ 1的20mM DTT的RAlbuffer，反复吹打震荡；将消化液转移至分离柱12, OOOrpm离心1 分钟，向过滤后的液体中加入350 μ 1 70%的乙醇反复吹打震荡；将液体转移至吸附柱中， 12, OOOrpm离心1分钟；再向吸附柱中加入350 μ 1的MDB buffer，12, OOOrpm离心1分钟； 再向吸附柱中加入100 μ 1含有DNase的DNA消化buffer，室温消化20分钟；加入200 μ 1 RA2buffer终止DNase消化，12, OOOrpm离心1分钟，加入650 μ I RA3buffer洗绦两次后， 用20~40 μ 1无核酶水溶解RNA，50-60°C促溶10分钟后，收集RNA并测定RNA的浓度及 纯度。取5 μ g RNA每个样本，并加入4 μ I RT-PCR buffer及2 μ 1逆转录酶，并用无核酶 水将反应体积补全至20μ1，在PCR仪（Veriti，Applied biosystem)中按照20°C 10分钟， 50°C30分钟，85°C 10分钟的实验程序进行逆转录。逆转录完成后，cDNA用水稀释50倍后 利用实时荧光定量PCR验证策略筛选受LMPl调控的糖酵解相关基因（引物序列如表1所 示），以β-actin为内参基因。
[0045] 结果显示相对于永生化