人ckip1基因的用途及其相关药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及人CKIPl基因的用途及其相关药物。
【背景技术】
[0002] 核糖核酸干扰（RNA interference, RNAi)现象是指当与内源性mRNA编码区某 段序列同源的双链RNA (dsRNA)导入细胞后，该mRNA发生特异性降解，而导致该基因 表达的沉默。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性 的引起 RNAi (Tuschl T, Zamore PD,Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at2Ito23nucleotide intervals. Cell2000;101:25-33.)。肿瘤是威胁人类健康的主要疾病。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综 合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的 治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以 抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤 的发生和发展（Uprichard，Susan LThe therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters2005;579:5996-6007. )〇
[0003] CKIPl 又名 PLEKH01，PLEKH01 在介导包括 CK2a，CPa，AP-l/c-Jun，Akt，ATM， IFP35/Nmi和Smurfl等蛋白的相互作用中发挥重要功能。通过增强Smurfl的泛素连接 酶活性，PLEKH01可以抑制成骨细胞的分化和骨的形成，是治疗骨骼疾病，如骨质疏松症的 潜在革巴标。[Denis G. Boscj Kevin C. Graham, Ronald B. Saulnierj Cunjie Zhang, David Prober,R. Daniel Gietzj David W. Litchfield. Identification, characterization of CKIP-Ij a novel pleckstrin homology domain-containing protein that interacts with protein kinase CK2. J Biol Chem2000; 275:14295 - 14306. Zhang L，Xing G，Tie Y，Tang Y，Tian C，Li L Role for the pleckstrin homology domain-containing protein CKIP-1 in AP-lregulation, apoptosis. EMBO J2005;24:766 - 778. Alexias Safi, Marie Vandrommej Sabine Caussanelj Laure Valdaccij Dominique Baas,Marc Vidal,Gilbert Brun，Laurent Schaeffer, EvelyneGoillotl.Role for the pleckstrin homology domain-containing protein CKIP-lin phosphatidylinositoI3-kinase-regulated muscle differentiation. Mol Cell Biol2004;24:1245 - 1255.]
[0004] PLEKH01可以与Akt结合并抑制Akt的激酶活性，而Akt的激活与多种癌症的发 生发展密切相关[Hennessy BT，Smith DL，Ram PT, Lu Y，Mills GB. Exploiting the PI3K/ AKT pathway for cancer drugdiscovery.Nat Rev Drug Discov2005;4:988_ 1004·]。在 体外实验中，PLEKH01可以抑制纤维肉瘤的生长。PLEKH01过表达的移植瘤在体内的生长也 受到了抑制。这暗示PLEKH01可能是潜在的抑癌基因 。[Emi Tokuda，Naoya Fujita，Tomoko Oh-hara，Shigeo Sato,Atsuo Kurataj Ryohei Katayamaj Toshiki Itoh，Tadaomi Takenawaj Kohei Miyazonoj Takashi Tsuruo. Casein kinase2_interacting protein-1, a novel Akt pleckstrin homology domain-interacting protein,down-regulates PI3K/ Akt signaling, suppresses tumor growth in vivo. Cancer Res2007;67:9666 - 9676]〇 结直肠癌中进行的研究进一步印证了这个结论。PLEKH01在超过60%的结直肠癌患者 的组织中低表达，这是关于PLEKH01与临床癌症患者的首次报道。体内和体外实验均表 明CKIP过表达可以抑制细胞的增殖。PLEKH01通过抑制Akt通路，下调胞内Smurfl的 蛋白量促进增殖。[J Nie, L Liu, G Xing, M Zhang, RWei, M Guo, XLi, P Xie, L Li, F He, W Han, L Zhang. CKIP-Iacts as a colonic tumor suppressor by repressing oncogenic Smurflsynthesis and promoting Smurfl autodegradation. Oncogene advance online p ublication2S印tember2013; doi : 10. 1038/onc. 2013. 340]。对 PLEKH01 与癌症的相关性研 究才刚刚开始，并且，目前关于PLEKH01在肝癌、胃癌、乳腺癌、乳腺癌和神经胶质瘤增殖和 恶性进展中的功能尚无报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于公开与人CKIPl (pleckstrin homology domain containing, family 0 memberl，PLEKH01)基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰（RNAi) 为手段研究CKIPl基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。
[0006] 本发明第一方面，以RNA干扰为手段，研究了 CKIPl基因在肿瘤发生和发展中的作 用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿 瘤细胞施用一种能够特异性抑制CKIPl基因的转录或翻译，或能够特异性抑制eIF5B蛋白 的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。
[0007] 所述肿瘤细胞选自其生长与CKIPl蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的， 所述肿瘤细胞选自肺癌、胶质瘤、肝癌之任一。
[0008] 所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量为足够降低CKIPl基因的转录或翻译，或者足够降低CKIPl蛋白的表达或活性的剂量。进 一步的，所述CKIPl基因的表达至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0009] 所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、 多肽、蛋白或干扰慢病毒。
[0010] 所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶 ΠΙ制备的小干扰RNA (esiRNA)或者短发夹RNA (shRNA)。
[0011] 所述双链RNA、核酶、esiRNA或者ShRNA含有CKIPl基因的启动子序列或CKIPl基 因的信息序列。
[0012] 进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA(SiRNA)。所述小干扰RNA包含第一链和第 二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与CKIPl 基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述小分子干扰RNA能特异性结合靶序列所 编码的mRNA片段，并特异性沉默人CKIPl基因的表达。
[0013] 进一步的，所述小干扰RNA的第一链序列与CKIPl基因中的靶序列基本相同。较 优的，所述CKIPl基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1-17中之任一序列。
[0014] 所述CKIPl基因中的靶序列即为所述小分子干扰RNA特异性沉默CKIPl基因表达 时，与所述的小分子干扰RNA互补结合的mRNA片段所对应的CKIPl基因中的片段。
[0015] 较佳的，所述CKIPl基因来源于人。
[0016] 本发明第一方面还公开了一种分离的人CKIPl基因在制备或筛选肿瘤治疗药物， 或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。
[0017] 进一步的，所述肿瘤选自肺癌、胶质瘤或肝癌之任一。
[0018] 所述将分离的CKIPl基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其 一，将CKIPl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制 齐Ij ;其二，将CKIPl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药 物或制剂。
[0019] 所述将CKIPl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治 疗药物或制剂具体是指：将CKIPl基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药 物或制剂，从而能降低肿瘤细胞内CKIPl基因的表达水平。
[0020] 所述将CKIPl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治 疗药物或制剂具体是指：CKIPl基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑 制或促进人CKIPl基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如本发明所述的CKIPl基因小 分子干扰RNA (SiRNA)即是以人CKIPl基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤 细胞增殖作用的药物。除此之外，诸如抗体药物，小分子药物等也可将CKIPl基因及其蛋白 作为作用对象。
[0021] 所述将CKIPl基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将CKIPl基因表达产物作为一项 肿瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。
[0022] 所述肿瘤治疗药物为能够特异性抑制CKIPl基因的转录或翻译，或能够特异性抑 制CKIPl蛋白的表达或活性的分子，从而降低肿瘤细胞中CKIPl基因的表达水平，达到抑制 肿瘤细胞的增殖、生长、分化和/或存活的目的。
[0023] 所述通过分离的CKIPl基因制备或筛选获得的肿瘤治疗药物或者肿瘤诊断药物 包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病 毒。
[0024] 所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶 ΠΙ制备的小干扰RNA (esiRNA)或者短发夹RNA (shRNA)。
[0025] 所述肿瘤治疗药物的施用量为足够降低人CKIPl基因