;
[0046] 1. 3精液品质检查
[0047] 用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于0? 7、畸形精子占10%以上 的精液；
[0048]2) X精子分离
[0049] 2. 1密度梯度离心柱准备
[0050] 在离心管中由下至上依次加入0.7ml按5%递减的Percoll液，浓度分别为80%、 75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%和25% ;
[0051] 2. 2X精子分离
[0052] 取狐狸精液1. 0ml加入到含4ml的25%Percoll液的离心管中，按250r/min离心 30min后弃上清，将底部lml混合液加入到步骤2. 1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱 中，按1200r/min离心8min后，取下层lml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml， 加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精；
[0053] 3)输精
[0054] 3. 1输精前的准备工作
[0055] 提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消 毒容器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消 毒毛巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部；
[0056] 3. 2输精方法
[0057] 采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩 张管内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住 子宫颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口lcm处， 用注射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管；
[0058] 3. 3输精量和输精次数
[0059] 把步骤2. 2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0. 5毫升，连续输精3天，每 天1次；
[0060] 3. 4输精时间
[0061] 准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判 断母狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂 片，观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将 发情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定 母狐的最佳输精时间；
[0062] X精子分离效果分析：
[0063] 用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出 72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84. 7% ;对照组雌性后代占51. 6% ;数理统 计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33% 左右。
[0064] 以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
【主权项】
1. 一种狐狸X精子分离方法，其特征在于，方法步骤如下： 1) 采精 1.1采精前的准备 将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、卫 生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25°C，操作人员穿专用的服装，将手洗净消毒，所 用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处用温开 水洗净； 1. 2米精方法 采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮把阴 茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴茎及 睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入水浴 箱内，水温保持在32_35°C，公狐米精每日1次，连续米精2_3d后休息l_2d ; 1. 3精液品质检查 用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于0.7、畸形精子占10%以上的精 液； 2. X精子分离 2. 1密度梯度离心柱准备 在离心管中由下至上依次加入0. 7ml按5 %递减的Per Co 11液，浓度分别为80 %、 75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%和25%; 2. 2X精子分离 取狐狸精液1.0 ml加入到含4ml的25 % Percoll液的离心管中，按250r/min离心 30min后弃上清，将底部Iml混合液加入到步骤2. 1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱 中，按1200r/min离心8min后，取下层Iml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml， 加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精； 3) 输精 3. 1输精前的准备工作 提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消毒容 器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消毒毛 巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部； 3. 2输精方法 采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩张管 内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住子宫 颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口 Icm处，用注 射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管； 3. 3输精量和输精次数 把步骤2. 2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0. 5毫升，连续输精3天，每天1 次； 3. 4输精时间 准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判断母 狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂片， 观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将发 情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定母 狐的最佳输精时间。
【专利摘要】一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：1)采精前的准备；2)采精方法；3)精液品质检查；4)密度梯度离心柱准备；5)X精子分离；6)输精前的准备工作；7)输精方法；8)输精量和输精次数；9)输精时间；用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84.7％；对照组雌性后代占51.6％；数理统计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33％左右。
【IPC分类】C12N5/076
【公开号】CN104962513
【申请号】CN201510388072
【发明人】陈德宇, 程丽芳, 朱茂英, 刘生杰, 刘成文, 申庆峰
【申请人】阜阳师范学院
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月30日