狐狸x精子分离方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及人工繁殖技术领域，具体涉及一种狐狸X精子分离方法。
【背景技术】
[0002] 狐狸属于脊椎动物门、哺乳纲、食肉目、犬科的食肉动物。人工饲养的狐狸主要是 狐属和北极狐属的狐种。狐属的代表品种为银黑狐，北极狐属的为蓝狐。
[0003] 养狐是经济效益较高的行业，特别目前更是一条农村致富很好的门路。狐狸的全 身是宝。它的皮是畜产品的高档商品，出口创汇率较高，但是现在这种珍贵毛皮动物饲养与 管理上存在很多的难题，特别是在如何提高雌性后代的繁殖上。所以人们目前需要有一种 成熟的新方法，提高雌性后代产出率，以提升狐群的扩繁速度，在狐狸养殖上获得更大的经 济效益。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种方法简单，能够提高狐狸后代雌性产出 率的狐狸X精子分离方法。
[0005] 本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
[0006] 一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：
[0007] 1)采精
[0008] 1. 1采精前的准备
[0009] 将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、 卫生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25°C，操作人员要穿专用的服装，将手洗净消 毒，所用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处 用温开水洗净；
[0010] 1.2采精方法
[0011] 采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮 把阴茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴 茎及睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入 水浴箱内，水温保持在32_35°C，公狐米精每日1次，连续米精2_3d后休息l_2d;
[0012] 1.3精液品质检查
[0013] 用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于〇? 7、畸形精子占10%以上 的精液；
[0014] 2) X精子分离
[0015] 2. 1密度梯度离心柱准备
[0016] 在离心管中由下至上依次加入0.7ml按5%递减的Percoll液，浓度分别为80%、 75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%和25% ;
[0017]2. 2X精子分离
[0018] 取狐狸精液1. 0ml加入到含4ml的25%Percoll液的离心管中，按250r/min离心 30min后弃上清，将底部lml混合液加入到步骤2. 1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱 中，按1200r/min离心8min后，取下层lml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml， 加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精；
[0019] 3)输精
[0020] 3. 1输精前的准备工作
[0021] 提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消 毒容器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消 毒毛巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部；
[0022] 3. 2输精方法
[0023] 采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩 张管内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住 子宫颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口lcm处， 用注射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管；
[0024] 3. 3输精量和输精次数
[0025] 把步骤2. 2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0.5毫升，连续输精3天，每 天1次；
[0026] 3. 4输精时间
[0027] 准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判 断母狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂 片，观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将 发情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定 母狐的最佳输精时间；
[0028]X精子分离效果分析：
[0029] 用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出 72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84. 7% ;对照组雌性后代占51. 6% ;数理统 计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33% 左右。
[0030] 上述步骤2. 2)中的稀释液是由以下重量的组分配制而成：
[0031] 三羟甲基氨基甲烷2, 13克 梓檬酸 1. 24克 D-果糖 0.71克 链霉素（青霉素）7JjX卵黄液 10毫升 llarn'sF-10 10 朵升；
[0032] 配制方法如下：
[0033] 1)准确称量2. 13克三羟甲基氨基甲烷、1.24克柠檬酸和0.71克D-果糖加30毫 升双蒸水溶解，再加50毫升双蒸水混匀；
[0034] 2)用双层定性滤纸将步骤1)中的溶液过滤后高压消毒，完全冷却后依次加入10 毫升卵黄液、10毫升Ham's F-10和7万U青霉素；
[0035] 3)于4°C环境下储藏。
[0036] 本发明的有益效果是：
[0037] 用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出 72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84. 7%。对照组雌性后代占51. 6%。数理统 计分析结果显示差异显著。结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33% 左右。
【具体实施方式】
[0038] 为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结 合具体实施例，进一步阐述本发明。
[0039] 实施例1
[0040] 一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：
[0041] 1)米精
[0042] 1. 1采精前的准备
[0043] 将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、 卫生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25°C，操作人员要穿专用的服装，将手洗净消 毒，所用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处 用温开水洗净；
[0044]1. 2采精方法
[0045] 采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮 把阴茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴 茎及睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入 水浴箱内，水温保持在32_35°C，公狐米精每日1次，连续米精2_3d后休息l_2d