一种添加钒酸钠的降糖鸡腿蘑发酵工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物发酵领域，具体的说本发明涉及一种添加钒酸钠的鸡腿蘑深层发 酵工艺。本发明旨在以鸡腿蘑为出发菌种，进行一级种子的培养和添加钒酸钠液体摇瓶发 酵培养。本发明的工艺由于在发酵培养基中加入了钒酸钠，在发酵过程中与鸡腿蘑发生生 物转化，大大提高了发酵液的生物活性。对鸡腿蘑的产业开发具有重要的意义。
【背景技术】
[0002] 鸡腿蘑（Coprinus comatus)，又称鸡腿燕、毛头鬼伞，是极具药用价值的珍稀食用 菌之一。鸡腿蘑还含有20种氨基酸，其中包括8种人体必需的氨基酸。经常食用有助于消 化、增强食欲、增强机体免疫力，降低血糖、血脂等。据阿斯顿大学报道，鸡腿蘑含有治疗糖 尿病偶的有效成分，能明显降低血糖浓度，是糖尿病人食疗选择的理想菇种。
[0003] 近些年国内对鸡腿蘑的研究主要集中于它的驯化栽培、营养成分分析等方面，对 于鸡腿蘑的液体培养国内也有研究和报道。由于鸡腿蘑多糖的医疗功效，一些学者从培养 基、培养条件和糖类等营养因子对鸡腿蘑保外多糖的影响进行了深入研究，而在鸡腿蘑液 体深层发酵培养基中添加钒酸钠未见报道。
[0004] 对于鸡腿蘑的降血糖功能，山东大学的王玉萍等进行了富铬鸡腿蘑菌丝体发酵液 降血糖作用的研究，证明了其发酵液开发成预防和治疗糖尿病的保健品和（或）药品的可 能性。钒酸钠有类胰岛素的作用，许多研究证明：钒能降低血糖，但其有效浓度为〇.8mg/ mL，毒副作用很大。为此，很多研究者在其溶液中加入一定量的生理盐水，以减轻毒副作用， 但效果不理想，离临床应用尚有一定的距离。
[0005] 目前，鸡腿蘑主要以子实体的形式在市场上销售，而有关鸡腿蘑的保健品也只局 限于其子实体粉末。而目前也尚无在鸡腿蘑液体深层发酵培养基中添加钒酸钠的论文和相 关专利报道等。
[0006] 本发明人经过深入的进一步研究提供了一种添加钒酸钠的鸡腿蘑液体深层发酵 工艺，该工艺既提高了降糖效果，又降低了钒酸钠用量大造成的毒副作用。该发酵液在药物 和/或保健品的制备方面具有广阔的应用前景，特别适用于制备预防和/或治疗糖尿病的 药物和/或保健品。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供了一种鸡腿蘑液体深层发酵的工艺，其特征是在所述的发酵 工艺中添加了能降血糖的钒酸钠。
[0008] 本发明的液体深层发酵工艺包括以鸡腿蘑为出发菌株，进行一级种子的培养和添 加钒酸钠的液体摇瓶发酵培养，其特征是在于所述的液体摇瓶深层发酵培养过程中添加了 钒酸钠。
[0009] 具体地，在本发明添加钒酸钠的鸡腿蘑深层发酵工艺中，其中所述一级种子培养 的培养基组成为（单位为克/100毫升）：土豆15-25,麸皮1-4,葡萄糖1-4, KH2PO4O. 1-0. 3， MgSO4O. 2-0. 5,加水至适当体积，接入鸡腿蘑斜面菌株；摇瓶培养的培养条件是：培养温度 22-28°C，转速110-150转/分钟，培养时间4-6天。
[0010] 本发明添加钒酸钠的鸡腿蘑液体深层发酵工艺中，其中所述添加钒酸钠的液体摇 瓶深层发酵培养的培养基组成为（单位为克/100毫升）：土豆15-25,麸皮1-4,葡萄糖1-4， KH2PO4O. 1-0. 3,MgSO4O. 2-0. 5,钒酸钠0-1，加水至适当体积；添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养 的培养条件是：接种权利要求2中所述一级种子，接种量为5-10% (体积百分比），培养温 度22-28 °C，转速110-150转/分钟，培养时间4-6天。
[0011] 更具体地，本发明的发酵工艺通过以下步骤来实现：
[0012] (1)取出鸡腿蘑菌种的斜面菌种接入新配制的斜面培养基中，培养基温度22-28 度，培养时间5-8天；
[0013] (2)将步骤1中的斜面菌种接入装有上述摇瓶培养基的三角瓶中，22-28度培养， 转速110-150转每分钟，培养时间4-6天，然后进行摇瓶扩大培养；
[0014] (3)将步骤2中的摇瓶菌种按5-10% (体积百分比）的接种量转接入装有上述摇 瓶扩大培养基的三角瓶中进行扩大培养，培养温度22-28°C，转速110-150转/分钟，培养时 间4-6天；
[0015] 其中所述的斜面培养基配方为土豆培养基，该培养基在多种教科书和论文中均有 表述，这里不再详细列出其组成；所述的一级种子培养基和添加钒酸钠的液体摇瓶发酵培 养基如上文所述。
[0016] 本发明所使用的鸡腿蘑菌种可选用任意一种鸡腿蘑菌种,例如可购自中国普通微 生物菌种保藏管理中心（CGMCC) CGMCC No. 5. 156, CGMCC No. 5. 252 和 CGMCC No. 5. 258。
[0017] 本发明步骤3中的扩大培养基于三角瓶容积之此可以是3 :10左右。
[0018] 本发明的另一目的是提供了一种由本发明的鸡腿蘑深层发酵工艺制备的鸡腿蘑 深层发酵液，该发酵液的特征是在所述的鸡腿蘑液体发酵工艺中添加了钒酸钠。
[0019] 本发明鸡腿蘑发酵液的上清液可以通过将发酵液离心分离获得，上清液的浓缩物 可以通过将上清液浓缩至一定体积后获得。
[0020] 本发明的各种鸡腿蘑深层发酵产品均可用于制备预防和/或治疗糖尿病、癌症等 疾病的药物和/或保健品，特别适用于制备预防和/或治疗糖尿病的药物和/或保健品。
【具体实施方式】
[0021] 为了进一步阐述本技术所涉材料及施工工艺，给出了下述实例。但是，这些实施例 不以任何方式限制本发明的范围。
[0022] 实施例1鸡腿蘑发酵液的制备
[0023] 在新鲜的斜面培养基中接入鸡腿蘑菌丝体，鸡腿蘑菌种是CGMCC No. 5. 156 (购自 中国普通微生物菌种保藏管理中心），培养温度25°C，待菌丝体长满斜面后，将斜面菌种接 入装有IOOmL摇瓶培养基的250mL三角瓶中（共6瓶），于25°C、150转/分钟摇床培养5天， 其中所述摇瓶培养基的配方为（单位为克/100毫升）：土豆20,麸皮2,葡萄糖2,KH2PO4O. 1， MgSO4O. 2。
[0024] 将上述摇瓶一级菌种接入装有200mL扩大培养基的500mL三角瓶中（共18瓶）， 接种量为每500mL三角瓶接入15mL摇瓶种子，于25°C、150转/分钟摇床培养5天，其中所 述添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养基的配方为（单位为克/100毫升）：土豆20,麸皮2,钒酸 钠 〇· 4,葡萄糖 2, KH2PO4O. 1，MgSO4O. 2,。
[0025] 实施例2鸡腿蘑发酵液的制备
[0026] 此实施例所用的菌种与实施例1相同
[0027] 在新鲜的斜面培养基中接入鸡腿蘑菌丝体，培养温度是22°C，待菌丝体长满斜面 后，将斜面菌种接入装有IOOmL摇瓶培养基的250mL三角瓶中（共4瓶），于22°C、130转 /分钟摇床培养6天，其中所述摇瓶培养基的配方为（单位为克/100毫升）：土豆25,麸皮 1，葡萄糖 2, KH2PO4O. 2, MgSO4O. 4。
[0028] 将上述摇瓶一级菌种接入装有200mL扩大培养基的500mL三角瓶中（共10瓶）， 接种量为每500mL三角瓶接入20mL摇瓶种子，22°C、130转/分钟摇床培养6天，其中所述 添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养基的配方为（单位为克/100毫升）：土豆25,麸皮1，钒酸钠 〇· 5,葡萄糖 2, KH2PO4O. 2, MgSO4O. 4。
[0029] 实施例3鸡腿蘑发酵液的制备
[0030] 此实施例所用的菌种与实施例1相同
[0031] 在新鲜的斜面培养基中接入鸡腿蘑菌丝体，培养温度是28°C，待菌丝体长满斜面 后，将斜面菌种接入装有IOOmL摇瓶培养基的250mL三角瓶中（共3瓶），于28°C、150转/ 分钟摇床培养4天，其中所述一级种子培养基的配方为单位为克/100毫升）：土豆25,麸皮 3,葡萄糖 3, KH2PO4O. 1，MgSO4O. 2。
[0032] 将上述摇瓶一级菌种接入装有200mL扩大培养基的500mL三角瓶中（共8瓶）， 接种量为每500mL三角瓶接入30mL摇瓶种子，28°C、150转/分钟摇床培养4天，其中所述 添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养基的配方为（单位为克/100毫升）：土豆25,麸皮3,葡萄糖 3, KH2PO4O. 1，MgSO4O. 2
[0033] 实施例4发酵液上清液的制备
[0034] 将实施例1所得到的发酵液于4500转/分钟，离心5分钟，获得上清液，所得到的 浓缩产物为棕黄色，有一定粘度但粘度不大的液体。
[0035] 药理实例1
[0036] (1)建模：6周龄雄性昆明小鼠40只，在通风、干燥、每天12h光照、室温18°C~ 22°C和湿度30%~50%动物房中，适应性喂养5d，随机分为样品组、阳性对照组、阴性对照 组和空白对照组4组。除了空白对照组，其余3组禁食24h后，腹腔注射180mg/kg体重肾 上腺素造糖尿病小鼠模型。饲养5d，禁食5h后测定血糖值，选取血糖值>10mmoL/L的小鼠 作为实验性糖尿病模型鼠。
[0037] (2)样品配制：量取一定量添加钒酸钠的鸡腿蘑发酵液中，使其浓度为0. 4mg/mL， 装于安瓿瓶中，封口，灭菌。渴乐宁（3. 5mg/mL)、生理盐水，同样处理。
[0038] (3)样品对小鼠高血糖的抑制作用：样品组，每只小鼠每天灌胃0.1 mL鸡腿蘑钒酸 钠溶液；阳性对照组，每只小鼠每天灌胃〇. ImL渴乐宁；阴性对照组和空白对照组，每只小 鼠每天灌胃〇. 4mL生理盐水。14d后，禁食12h，前3组分别皮下注射肾上腺素（24mg/kg)。 在Omin和60min分别测4组小鼠的血糖值。
[0039] 结果如表1
*p=0. 023<0. 05
[0040] 从表1中可以看出：各组小鼠在Omin时的血糖值没有差异，而在60min时，即皮下 注射肾上腺素一小时后，样品组与阴性对照组的血糖值有明显差异。说明添加钒酸钠的鸡 腿蘑发酵液组能抑制小鼠血糖的升高，并且该组小鼠在饲养期间生活状况良好，体身匀称， 鼠毛干净,颜色白亮,体重也此其他组重。
【主权项】
1. 鸡腿蘑深层发酵工艺，其特征在于以鸡腿蘑为出发菌株，进行一级种子的培养和添 加钒酸钠液体摇瓶发酵培养。2. 根据权利要求1所述的鸡腿蘑深层发酵工艺，其中所述一级种子培养的培养基组成 为（单位为克/100 毫升）：土豆 15-25,麸皮 1-4,葡萄糖 1-4, KH2PO4O. 1-0. 3,MgSO4O. 2-0. 5， 加水至适当体积，接入鸡腿蘑斜面菌株；摇瓶培养的培养条件是：培养温度22-28°C，转速 110-150转/分钟，培养时间4-6天。3. 根据权利要求1所述的鸡腿蘑深层发酵工艺，其中所述添加钒酸钠的液体摇瓶深 层发酵培养的培养基组成为（单位为克/100毫升）：土豆15-25,麸皮1-4,葡萄糖1-4， KH 2PO4O. 1-0. 3,MgSO4O. 2-0. 5,钒酸钠0-1，加水至适当体积；添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养 的培养条件是：接种权利要求2中所述一级种子，接种量为5-10% (体积百分比），培养温 度22-28°C，转速110-150转/分钟，培养时间4-6天。
【专利摘要】本发明涉及生物发酵领域，具体的说本发明涉及一种添加钒酸钠的鸡腿蘑深层发酵工艺。本发明旨在以鸡腿蘑为出发菌种，进行一级种子的培养和添加钒酸钠液体摇瓶发酵培养。本发明的工艺由于在发酵培养基中加入了钒酸钠，在发酵过程中与鸡腿蘑发生生物转化，大大提高了发酵液的生物活性，对鸡腿蘑的产业开发具有重要的意义。
【IPC分类】C12R1/645, C12N1/14, A61K36/07, A61P3/10, A61P35/00
【公开号】CN104974941
【申请号】CN201410141418
【发明人】韩春超
【申请人】韩春超
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月4日