西藏胶红酵母及其在水晶梨低温储藏中的应用【
技术领域：
】[0001]本发明涉及的是果实采后病害生物防治领域，具体是一种西藏胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)以及该菌种对水晶梨低温储藏保鲜的应用及其使用方法。【
背景技术：
】[0002]水晶梨又称大果水晶，属于砂梨，其皮薄肉白，脆嫩多汁，香甜可口，营养丰富，因而备受消费者喜爱。水晶梨1991年由韩国从新高梨的枝条芽变中选育，目前在我国中西部，以及西北、华北地区均有栽培。我国是世界上最大的梨生产国，梨果年产量约1700万吨左右（王文辉等，2013)，其中水晶梨占有相当大的比例，但由于其水分含量高，皮薄肉脆，在运输与储藏过程中极易损伤，易受病原菌侵染导致采后腐烂，造成采后损伤严重，影响市场供应，也严重损害农民的经济利益。目前，控制水晶梨采后腐烂的有效措施是低温储藏与化学杀菌剂结合使用，但化学杀菌剂的频繁使用易使病原菌产生抗药性，且农药残留也会导致食品安全问题并对人类健康构成威胁。当前许多研究都在致力于开发安全，高效，无毒的新型采后保鲜技术（田世平等，2011)。[0003]在众多被研究的可能替代化学杀菌剂的方法中，利用拮抗微生物，特别是拮抗酵母抑制采后果实病害的生物防治技术是当前国内外最为关注的新型采后病害控制方法之一（Janisiewicz等，2002;SharmaR.R.等，2009)。这主要是由于酵母菌与其他生防微生物相比，具有遗传稳定，抑菌谱广，效价高；一般不产生对人和寄主植物有害的代谢产物，安全性高；且其对营养要求低，生长快；并有对多种胁迫、逆境具有较强的耐受力，对大多数杀菌剂不敏感，并能与多种其它化学和物理处理相容等优良特性（JiaLiu等，2013)。[0004]国内外20多年的研究已经发现有数十种酵母显示具有拮抗真菌的特性，其中以假丝酵母属（Candida)、隐球酵母属（Cryptococcus)、毕赤酵母属（Pichia)、红酵母属(Rhodotorula)、梅奇氏酵母属（Metschnikowia)、丝抱酵母属（Trichosporon)和（类酵母）短梗霉属（Aureobasidium)的菌种的研究报道相对较多（Calvo-Garrido等，2014;HongyinZhang等，2005;RachidLahlali等，2014;RenpingLi等，2011)。目前，国际上的已经有8个基于拮抗微生物活性的采后果实生物防腐保鲜剂产品，其中有7个是基于拮抗酵母的产品，分别是：Biosave(基于诘抗细菌PseudomonassyringaeVanHall，美国）、Aspire(基于诘抗酵母Candidaoleophiliaisolate1-182,美国）、YieldPlus(基于诘抗酉孝母Cryptococcusalbidus，南非）、Shemer(基于诘抗酉孝母MetschnikowiafructicolaKurtzman&Droby，以色列）、BioNext(基于诘抗酵母Candidaoleophilia，比利时）、LeasaffreInternational(基于诘抗酉孝母Candidaoleophilia，法国）、Abbotsford(基于诘抗酵母Candidasaitoana，加拿大）、Candifruit(基于诘抗酵母Candidasake，西班牙）。但目前国内尚无商业化生产的相关产品，且针对于配合果实冷藏保鲜的耐低温拮抗酵母保鲜剂鲜有报道，因此迫切需要加快加强我国采后生物防治的基础和应用研究工作。[0005]青藏高原被誉为世界第三极，远离海洋，低炜度，高海拔，疆域辽阔，地形复杂，高差变化极为悬殊，其独特的地理环境、高原气候造就了极为丰富物的种资源且普遍具有耐低温、耐紫外线辐射等特性。因此从西藏地区分离筛选新型的菌株具有可行性。[0006]上文涉及的参考文献如下：[0007]1.王文辉，贾晓辉，杜艳民，王志华.我国梨果生产与贮藏现状、存在的问题与发展趋势[J]，保鲜与加工，2013,13(5):1_8。[0008]2.田世平，罗云波，王贵禧主编，园艺产品采后生物学基础[M]，2011，北京：科学出版社。[0009]3.Janisiewicz,ff.J.,andKorsten,L.Biologicalcontrolofpostharvestdiseasesoffruits[J].AnnualReviewofPhytopathology.2002,40:411-441(Janisiewicz，W.J.，andKorsten，L.水果采后病害生物防治[J].植物病理学年度综述.2002,40:411-441)。[0010]4.SharmaR.R.,SinghD.,SinghR.Biologicalcontrolofpostharvestdiseasesoffruitsandvegetablesbymicrobialantagonists:Areview[J].BiologicalControl.2009,50:205-221(微生物拮抗剂对水果和蔬菜采后的生物防治：综述[J].生物防治.2009,50:205-221)。[0011]5.JiaLiu,YuanSui，MichaelWisniewski,SamirDroby,YongshengLiu.Review:Utilizationofantagonisticyeaststomanagepostharvestfungaldiseasesoffruit[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology.2013,163:153-160(JiaLiu，YuanSui，MichaelWisniewski，SamirDroby，YongshengLiu?综述：措抗酵母对水果采后真菌病害的防治[J].国际食品微生物.2013，163:153-160h[0012]6.C.Calvo-Garrido,N.Teixido,J.Roudet,I.Vifias,j>Usall,M.Fermaud.BiologicalcontrolofBotrytisbunchrotinAtlanticclimatevineyardswithCandidasakeCPA-landitssurvivalunderlimitingconditionsoftemperatureandhumidity[J].BiologicalControl.2014,79:24-35(C.Calvo-Garrido,N.Teixido,J.Roudet，I.ViftaS:，J.Usall，M.Fermaud.假丝酵母CandidasakeCPA-1对大西洋气候葡萄园灰霉病的防治及其在温度与湿度限制条件下的存活能力[J].生物防治.2014,79:24-35)。[0013]7.HongyinZhang,XiaodongZheng,ChengxinFub，YufangXi.PostharvestbiologicalcontrolofgraymoldrotofpearwithCryptococcuslaurentii[J].PostharvestBiologyandTechnology.2005,35:79-86(HongyinZhang,XiaodongZheng，ChengxinFub，YufangXi.罗伦隐球酵母Cryptococcuslaurentii对水晶梨米后灰霉病的生物防治[J].采后生物与技术.2005,35:79-86)。[0014]8.RachidLahlali,YounesHamadi,R.Drider,CoralieMisson,M.ElGuilli,M.HaissamJijakli.ControlofcitrusbluemoldbytheantagonistyeastPichiaguilliermondiiZ1:Compatibilitywithcommercialfruitwaxesandputativemechanismsofaction[J].FoodControl.2014,45:8-15(RachidLahlali，YounesHamadi,R.Drider,CoralieMisson,M.ElGuilli,M.HaissamJijakli.毕赤酉孝母PichiaguilliermondiiZ1对柑橘青霉病的防治：与果錯结合能力及其作用机理[J].食品控制.2014,45:8-15)。[0015]9.RenpingLi,HongyinZhang，WeiminLiu,XiaodongZheng.BiocontrolofpostharvestgrayandbluemolddecayofappleswithRhodotorulamucilaginosaandpossiblemechanismsofaction[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology.2011,146：151-156(RenpingLi,HongyinZhang,WeiminLiu,XiaodongZheng.胶红酵母Rhodotorulamucilaginosa对苹果灰霉病与青霉病的生物防治及其作用机理[J].国际食品微生物?2011，146:151-156)。【
发明内容】[0016]本发明要解决的技术问题是提供一种西藏胶红酵母YC1及其用途，该西藏胶红酵母YC1具有低温耐受特性，能制备成可防治水晶梨低温储藏病害的生物保鲜剂。[0017]为了解决上述技术问题，本发明提供一种西藏胶红酵母YC1，为胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)，其保藏号为：CGMCCNo.10223。[0018]该西藏胶红酵母YC1的保藏信息具体如下：保藏名称：胶红酵母（Rhodotorulamucilaginosa);保藏号为CGMCCNo.10223;保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2014年12月18日。[0019]本发明还同时提供了上述西藏胶红酵母YC1的用途：用于水晶梨的低温病害防治与低温储藏保鲜。[0020]作为本发明的西藏胶红酵母YC1的用途的改进：将保藏号为：CGMCCNo.10223的胶红酵母（Rhodotorulamucilaginosa)活化、发酵培养，所得的菌体用无菌水稀释制备成1.OX107~1.0X109CFU/ml的菌悬液；[0021]将水晶梨浸泡于菌悬液中1~2分钟，取出晾干，置于密封容器（例如保鲜膜密封的塑料筐）内，于3~5°C(较佳为4°C)的冷藏条件下存放（存放时间至少可达30天）。[0022]本发明还同时提供了一种防治水晶梨低温储藏病害的生物保险剂：是浓度为107~109CFU/ml的西藏胶红酵母（Rhodotorulamucilaginosa)YC1的细胞悬浮液。[0023]本发明的西藏胶红酵母YC1的获取方法的步骤具体如下：[0024]1)、从中国西藏拉萨地区采取土壤样品，储藏于4°C。称取lg土样加入到100ml无菌水中溶解，并分别进行两次十倍稀释，从而分别得到稀释102、103和104倍的土壤溶液。分别从各土壤溶液中吸取100y1土壤溶液涂布于含有虎红真菌选择性培养基（杭州百思生物技术有限公司，型号/代号为BS1128,商品名称为虎红培养基）的平板上，倒置于培养箱内，恒温26-28°C培养3-5天。用接种环挑选出培养特征相异的单菌落进行平皿划线纯化，镜检确认为酵母后，接入NYDA培养基斜面中进行培养保存；[0025]2)、把斜面保存的酵母菌接种到装有已灭菌的50ml当前第1页1 2