一种改善米曲霉菌株菌核化现象的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种改善霉菌菌核化现象的方法，特别涉及一种改善米曲霉菌株菌核 化现象的方法。
【背景技术】
[0002] 米曲霉菌株在斜面传种培养过程中，经过代数不等的接种，经常会出现菌丝短、孢 子少，培养基表面出现大量小而圆、质地结实坚硬的颗粒状物质，颜色或白、或黑、或出现白 斑，并伴随着菌株酶活力下降的现象。这种现象的出现，通常称之为斜面的"菌核化"，如附 图1所示。
[0003] 在斜面培养的过程中，菌株特别是来源于人工的诱变株通常都会出现这种现象。 菌核化的斜面难于作为生产用菌传代种子，也难于作为菌种继续进行保藏使用，这一状况 必须得到很好的解决。
[0004] 目前，斜面菌核化形成的具体原因，尚不清楚，但估计与菌株的生长能力衰退，汲 取与利用营养物质的能力退化和基因变异有关。有人说"菌核"是菌丝体的集合体，在显 微镜下观察，菌核切开后菌核外观和核里面都出现菌丝的紧密堆集状态，呈"蜂窝"结构状 态。由此我们可以推论得知：如果在细胞生长过程中，能将菌丝体很好地分散、均匀地分开 生长，菌核化现象将会得到很好的改善。
[0005] 表面活性剂是一类具有很强表面活性、能使液、固体表面张力显著下降的物质。由 于其结构本身具有很强的亲水性和亲油性即双亲的结构基团，使其在化工、食品、纺织、药 剂、采矿等行业中得到广泛的应用，常常用作增溶剂、乳化剂、湿润剂、助悬剂、渗透分散剂、 起泡剂、消泡剂、去污剂、消毒剂和杀菌剂等，特别是在抗黏结和防结块等方面，表现出令人 满意的多种多样的实用功能。
[0006] 在微生物细胞的生长环境中，在培养基中添加适量的表明活性剂，特别是添加来 源于自然、分散性能好、水溶性大、易生物降解、对生物题无毒的多元醇型的非离子表面活 性剂，对于减缓细胞生长过程中菌丝体间产生的黏结、成块，从而改善细胞器质上形成的菌 核化现象，有着很大的促进作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种改善米曲霉菌株 菌核化现象的方法。
[0008] 为实现上述目的，所采取的技术方案：一种改善米曲霉菌株菌核化现象的方法，其 特征在于，所述方法包括以下步骤：
[0009] (1)将菌核化的米曲霉菌株菌丝体接种于第一改良斜面培养基上，然后在黑暗条 件下进行培养；
[0010] (2)将步骤⑴中培养后的米曲霉菌株再次接种于第一改良斜面培养基上，然后 在黑暗条件下进行培养；
[0011] (3)将步骤（2)中培养后的米曲霉菌株接种于第二改良斜面培养基上，然后在黑 暗条件下进行培养；
[0012] (4)将步骤（3)中培养后的米曲霉菌株再次接种于第二改良斜面培养基上，然后 在黑暗条件下进行培养；
[0013] 所述步骤⑴和⑵中第一改良斜面培养基由以下重量比例的组分制备而成：马 铃薯20 %，葡萄糖2 %，蔗糖3. 0 %，第一非离子型表面活性剂0. 2 %，琼脂1. 5 %，余量为 水；
[0014] 所述步骤⑶和⑷中第二改良斜面培养基由以下重量比例的组分制备而成：马 铃薯20 %，葡萄糖2 %，蔗糖5. 0 %，第一非离子型表面活性剂0. 2 %，琼脂1. 5 %，余量为水。
[0015] 优选地，所述第一非离子型表面活性剂为失水山梨醇月桂酸单酯。
[0016] 优选地，所述第二非离子型表面活性剂为失水山梨醇月桂酸单酯。
[0017]优选地，所述步骤（1)、（2)、（3)和（4)中培养温度均为30°C，培养时间均为72小 时至120小时。
[0018]优选地，所述步骤（1)、（2)、（3)和（4)中接种方式均为之字型划线。
[0019] 优选地，所述方法还包括将步骤（4)中培养后的米曲霉菌株接种于霉菌常规保藏 斜面培养基上，然后在30°C、黑暗条件下进行培养72小时至120小时。出现菌核化的米曲 霉菌株经过前面四步的培养，其菌核化现象已经消除，将步骤（4)中培养后的米曲霉菌株 接种于霉菌常规保藏斜面培养基上进行培养是为了稳定该菌株，降低该菌株再次出现菌核 化现象的几率。
[0020] 优选地，所述霉菌常规保藏斜面培养基由以下重量比例的组分制备而成：白砂糖 3.0%，豆柏粉2.0%，玉米粉0.3%，琼脂2.0%，余量为水。
[0021] 本发明的有益效果在于：本发明提供了一种改善米曲霉菌株菌核化现象的方法， 采用该方法，不仅能够使菌核化的米曲霉菌株在斜面培养基中的菌核化现象完全消失，使 菌核化的米曲霉菌株菌丝体长势良好，还能使菌核化的米曲霉菌株产酶能力得到恢复。经 过该方法复壮后，能够使菌核化的米曲霉菌株的产果糖基转移酶能力基本恢复，产酶酶活 力达到36300U/g(干重），发酵培养的菌丝体生物量也恢复达到90. 8g/L，完全达到对照菌 株米曲霉菌株B的产酶水平。本发明所提供的方法操作简单、条件温和、投入少、易掌握、效 果好。
【附图说明】
[0022] 图1是本发明实施例1中米曲霉菌株斜面培养过程中出现的菌核化现象；其中，A: 黑、白菌核颗粒；B:菌丝沙漠化现象；C:菌丝白斑现象；
[0023] 图2是本发明实施例1中米曲霉菌株A和B在液体培养时的菌丝体形态；
[0024] 图3是本发明实施例1中米曲霉菌株A在第一改良斜面培养基中继代培养的生长 状况；
[0025] 图4是本发明实施例1中米曲霉菌株A在去菌核化复壮后的菌丝体形态；
[0026] 图5是本发明实施例1中米曲霉菌株A在去菌核化复壮后的产酶能力与生物量水 平。
【具体实施方式】
[0027] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明 作进一步说明。
[0028] 实施例1
[0029] 本实施例中所采用的米曲霉菌株是：
[0030] 米曲霉菌株A:菌核化的果糖基转移酶生产菌株米曲霉scut209(Aspergillus oryzaescut209)，如图 1 所不；
[0031] 米曲霉菌株B:本实验室保藏的正常果糖基转移酶生产菌株，米曲霉菌株A是 米曲霉菌株B经过数代接种后出现菌核化现象的米曲霉菌株，该米曲霉菌株B保藏于 位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2012106 ;并已在名 称为"一种产果糖基转移酶的菌株及其制备方法"授权发明专利中公开，专利授权号为： ZL201210374664. 5。
[0032]本实施例中所采用的霉菌常规保藏斜面培养基配方是：白砂糖3.Owt%，豆柏粉 2.Owt%，玉米粉0? 3wt%，琼脂2.Owt%，余量为水，pH自然。
[0033]实施例中所采用的液体培养基配方是：白砂糖3.Owt%，豆柏粉2.Owt%，玉米粉 0.3wt%，余量为水，pH自然。
[0034] 本实施例中所采用的第一改良斜面培养基由以下重量比例的组分制备而成：马铃 薯20 %，葡萄糖2 %，蔗糖3. 0 %，第一非离子型表面活性剂0. 2 %，琼脂1. 5 %，余量为水； 自然pH值；所述第一非离子型表面活性剂为失水山梨醇月桂酸单酯Span-20。
[0035] 本实施例中所采用的第二改良斜面培养基由以下重量比例的组分制备而成：马铃 薯20 %，葡萄糖2 %，蔗糖5. 0 %，第二非离子型表面活性剂0. 2 %，琼脂1.