析（通过洗涤分离）结合。在淘析器的腔室中的各生物细胞遇到驱动细 胞远离旋转轴的离心力和驱动细胞向旋转轴运动的流动液体。将小细胞向旋转轴的方向洗 涤，其中将它们从腔室中洗掉至收集管中。较大或较密集的细胞移动较缓慢，并且到达平衡 位置。最大或最密集的细胞仍然在腔室的进口附近。通过增加流动，可以洗出并收集连续 的部分（BeckmanCoulter(2012 年 6 月）JE-5.OElutriationsystem(80 页）。
[0074] 离心
[0075] 在实施方式中，本公开提供，例如，50g10分钟、100g10分钟、125g10分钟、150g 10 分钟、175g10 分钟、200g10 分钟、250g10 分钟、300g10 分钟、350g10 分钟、400g10 分钟、450g10 分钟、500g10 分钟、550g10 分钟、600g10 分钟、650g10 分钟、700g10 分 钟、750g10 分钟、800g10 分钟、1000g10 分钟、1200g10 分钟、1400g10 分钟、1500g10 分钟、1600g10 分钟、1800g10 分钟、2000g10 分钟、2200g10 分钟、2400g10 分钟、2500g 10分钟等的离心分离。还提供了这些的范围，即，提供在400-500g之间10分钟的离心分离 的选择的范围。在替代的实施方式中，离心分离可以进行，例如，5分钟、15分钟、20分钟、 30分钟、40分钟、60分钟、80分钟、100分钟、120分钟等。还提供了计时的范围，例如，离心 分离10-15分钟或10-20分钟。离心制动器可以开启。或所述制动器可以关闭或设置在低 速制动上，来在减速期间减少细胞富集部分的破坏。在实施方式中，离心分离在大约2摄氏 度、大约5度、大约10度、15度、20度、23度（室温），或在环境温度下进行。在一些实施方 式中，血袋在放入离心机前在冰上冷却，而在另一些实施方式中，在开始离心之前允许血袋 在冷冻离心机内冷却。重力沉降也是一种选择。对于任一在此列举的数量，可以使用术语 "大约"，其中"大约"可指，例如，+/-5 %、+/-10 %、+/-15 %、+/-20 %、+/-25 %、+/-50 % 等。
[0076] 红细胞血影
[0077] 红细胞（RBCs)和RBC血影可以以，例如，形状、染色、渗透压、通透性、光散射 和离子转运来描述特征和定量（见，例如，Hoffman(1958)J.Gen.Physiol. 42:9-28 ; Chang等（1983)Biochim.Biophys.Acta.731:346-353;Greer等（2008) ffintrobe'sClinicalHematology, 12thed. ,Lippincott,Williams,andWilkins, pp. 128-132, 151-152,984-985, 1032-1041)。在实施方式中，本公开产生了RBC血影和完整 RBCs的比大于 0? 001，大于 0? 02,大于 0? 05,大于 0? 10、0. 20、0. 50、1. 0、2. 0、5. 0、10、20、50、 100、200、500、1，000、2000、5000、10000、20000、50000、100000，或大于一百万等的制品。
[0078] 溶血
[0079] 在实施方式中，提供的是方法，和用这些方法产生血液产品，具有减少游离血红蛋 白。溶血可以，例如，通过机械能、储存或冷冻/解冻而增加。由溶血释放的游离血红蛋白 可以通过用裸眼观察任何粉红或红色褪色来检测，或者由例如在562nm、578nm和598nm下 的分光光度法来检测（Laga等（2006)Am.J.Clin.Pathol. 126:748-755;Blakney等（1975) Clin.Biochem. 8:96-102)。本公开提供包含白细胞的组合物，其中可溶血红蛋白的浓度小 于 700mg/dL、小于 600mg/dL、小于 500mg/dL、小于 400mg/dL、小于 300mg/dL、小于 200mg/ dL、小于 100mg/dL、小于 90mg/dL、小于 80mg/dL、小于 70mg/dL、小于 60mg/dL、小于 50mg/ dL、小于 40mg/dL、小于 30mg/dL、小于 20mg/dL、小于 15mg/dL、小于 10mg/dL、小于 5mg/dL、 小于2mg/dL、小于lmg/dL等。在一方面，这些量度指引起白细胞浓度的白细胞的悬浮液，所 述白细胞浓度大约等于原始的全血中的白细胞的浓度。在排他性的实施方式中，方法和由 所述方法制备的血液产品可排除不能满足上述分界点中的任一方法和产品。所述分界点可 应用于未经洗涤、经过洗涤、未经冷冻、经过冷冻/解冻、它们的任何组合等的白细胞的制 品。游离血红蛋白可导致肾脏的损伤（Yoshioka等（1985)J.Trauma. 25:281-281 ;0hshiro 等（1980)Res.Exp.Med. (Berl.) 177:1-12)。在本公开中，解冻是非必须地在洗涤之后。在 排他性的实施方式中，本公开仅包括已在解冻之后经过洗涤的细胞。在另一个排他性的实 施方式中，本公开不包括在解冻之后未经洗涤的任何细胞。
[0080] 减少血浆的量
[0081] 血浆的量可以优选在洗涤之前减少。在非限制性的实施方式中，本公开提供方法 和由该方法制备的细胞，其中，胎盘新生儿血液组合物包含血浆，其中胎盘新生儿血液组合 物的血浆成分被定义为100%。白细胞富集部分的储存细胞的血浆成分加RBC富集部分的 储存细胞的血浆成分的总和可以是，例如，低于95%、低于90%、低于85%、低于80%、低 于75%、低于70%、低于65%、低于60%、低于55%、低于50%、低于45%、低于40%、低于 35%、低于30%、低于25%、低于20%、低于15%、低于10%或低于5%。在替代的实施方 式中，冷冻血浆部分用于抗衰老、用于化妆品用途或用于其它治疗用途。
[0082] 回收
[0083] 在实施方式中，本公开提供大于50X107总有核细胞（TNCs)，大于100、150、 200、250、300、400、500\1071%8等的回收。在实施方式中，提供的是大于在收集时（或 处理之前）在胎盘新生儿血液样本中存在的TNCs的10%的回收，大于在收集时（或处 理之前）在胎盘新生儿血液样本中存在的TNCs的15%、20%、25%、30%、35%、40%、 45 %、50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %、80 %、85 %、90 %、95 %、98 % 的回收。在实施 方式中，本公开提供大于10,000,000总有核细胞（TNCs)/kg体重，大于11，000,000、 12, 000, 000、13, 000, 000、14, 000, 000、15, 000, 000、16, 000, 000、17, 000, 000、18, 000, 000、 19, 000, 000、20, 000, 000、21，000, 000、22, 000, 000、23, 000, 000、24, 000, 000、25, 000, 000、 26, 000, 000、27, 000, 000、28, 000, 000、29, 000, 000、30, 000, 000、31，000, 000、32, 000, 000、 33, 000, 000、34, 000, 000、35, 000, 000、36, 000, 000、37, 000, 000、38, 000, 000、39, 000, 000 或40, 000, 000,或者更多总有核细胞/kg体重的回收（见Basford等（2009)Cell Prolif. 42:751-761)。在另一个非限制性实施方式中，本公开提供大于14, 000个细胞/kg 体重的CD34+细胞数的回收，15, 000个细胞、16, 000个细胞、17, 000个细胞、18, 000个细胞、 19, 000个细胞、20, 000个细胞、22, 000个细胞、24, 000个细胞、26, 000个细胞、28, 000个 细胞、30, 000个细胞、32, 000个细胞、34, 000个细胞、36, 000个细胞、38, 000或40, 000个 ⑶34+细胞//kg体重等的回收。在实施方式中，本公开提供大于1X105个⑶34 +细胞的回 收，大于 5、10、15、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、 200、300、400、500、600、700、800、900 或 1，000X105个CD34+细胞的回收。这些数目可为抽 取的任何样本或等分而调整，例如，为了存档、为了血液化学或血液学的分析，或为了验证 样本身份。可以例如，使用CellDyn4000(AbbottDiagnostics,雅培园，伊利诺斯州）或 SysmexXE-9100血液分析器（Sysmex，日本）测量有核细胞。CD34+细胞可以通过例如有 FACSCaliber(BDBiosciences，圣何塞，加利福尼亚州）的流式细胞计来测量。提供排他 性的实施方式，即，不包括与以上数字中的一个或多个相对应的或与可以由以上数字中的 两个或更多个定义的范围相对应的任意过程（或通过过程制备的细胞）的那些。
[0084] 如与在收集之后和在处理、冷冻和解冻之前测量的数目相比的在冷冻之前或在解 冻之后测量的，如在总有核细胞的单位、总CD34+细胞、单核细胞或总集落形成单位中有可 测量的，回收可以以白细胞的回收的方式表示。回收还可以以冷冻然后解冻并实际施用于 受试者的总的白细胞的方式来表示。在此情况下，"回收"指在解冻的白细胞富集部分中存 在的白细胞或总有核细胞或单核细胞或CD34+细胞或集落形成单位细胞，和在解冻的RBC 富集部分中存在的白细胞或总有核细胞或单核细胞或CD34+细胞或集落形成单位细胞的总 和，其中为了任何细胞抽取（例如，为归档或试验目的）对回收进行校正。为了测定解冻制 备中白细胞的数量，白细胞可以例如通过光学显微镜、血液分析器（例如，CoulterLH500 血液分析器，BeckmanCoulter)，或通过流式细胞计来计算。优选地，在解冻的制品中的白 细胞的回收百分比和施用于受试者的起初在全胎盘新生儿血液中存在的细胞的百分比是 不管是否细胞是活的或死的。可以用各种技术（如台盼蓝拒染法或7-AAD)来测量活细胞 的百分比。
[0085] 为了得出"回收"的计算结果，参照起初在全胎盘新生儿血液中的白细胞的数量， 输注至受体的细胞（输注的白细胞富集的制品和RBC富集的制品的总和）的百分比还可以 由最终输注的处理材料（或处理物质）的量来计算。除了从归档或试验目的取得的样本之 外，并且除了血浆（基本上缺乏任何细胞）之外，优选的是100 %的细胞被输注至受试者中。 换言之，因为移除的物质只有：（1)用于归档或试验目的物质；和（2)血浆，所以情况是本公 开提供用于输注100%的细胞（减去为了归档或试验而移除的细胞）的系统和方法，即，接 近100%回收。其中，回收指被输注受试者的细胞制品，回收百分比指紧接着开始输注之前 在血袋中的细胞的量。
[0086] 洗涤
[0087] 本公开提供用于洗涤细胞的方法和步骤。还提供被洗涤的细胞制品，尤其是，具有 减少浓度的血红蛋白、红细胞血影、裂解的白细胞（例如，裂解的嗜中性粒细胞）、释放的细 胞因子或趋化因子、和来自裂解的白细胞的细胞碎片中的一种或多种以及具有减少浓度的 冷冻保护剂（如DMS0)的洗涤的制品。Hank's缓冲盐溶液、人血清白蛋白溶液、磷酸盐缓 冲盐溶液（PBS)、杜尔贝科氏培养基、洛斯维?帕克纪念研究所（RPMI)培养基（GibcoBRL; Sigma-Aldrich)、等渗溶液、含有右旋糖的溶液、和以上的任意结合可以用作洗涤溶液的成 分。洗涤可以用低葡萄糖的杜尔贝科改良伊格尔培养基。
[0088] 细胞富集部分的洗涤可以通过浸泡、涡漩、摇摆、倒转、垂直旋转、水平旋转、振荡 或它们的任意结合来完成。洗涤的细胞可以通过过滤、离心分离、基于抗体的技术来收集， 而无限制。在排他性的实施方式中，方法不包括所有洗涤步骤的一种或多种。
[0089] 关于洗涤，优选洗涤任何RBC富集部分，以便减少游离血红蛋白、RBC血影、裂解的 白细胞、释放的细胞因子或趋化因子、或者来自裂解的白细胞的细胞碎片、或冷冻保护剂的 浓度。在实施方式中，一体积的RBC富集细胞（"初始体积"）与一体积的稀释剂混合，然 后离心，然后重悬浮。在其他实施方式中，一体积RBC富集的细胞与2vol.、3vol.、4vol.、 5vol.、6vol.、7vol.、8vol.、9vol.、10vol.、12vol.、14vol.、16vol.、18vol.、20vol.等的稀 释剂混合。优选地，用7体积或更多来稀释。在稀释之后，离心分离制品来产生细胞富集部 分，然后使用稀释剂以初始体积重悬浮。优选洗涤，其中受体对象具有损坏的肾脏功能，或 其中受体具有低体重，例如，为儿童或婴儿，或其中受体具有已知的对DMS0或对冷冻细胞 产品的敏感性。
[0090] 施用
[0091] 对于向受体施用解冻的部分，来自白细胞富集部分的细胞可以首先被输注，接着 来自RBC富集部分（其包含一些白细胞）的细胞可以其次被输注至同一受试者中。在另一 个实施方式中，来自RBC富集部分的细胞可以首先被输注，接着输注来自白细胞富集部分 的细胞。在替代的实施方式中，各个部分可以被分成两等分或更多等分，其中输注包含来自 白细胞富集部分的细胞的等分的首先输注，然后RBC富集、然后白细胞富集、然后RBC富集 等。或者，可以输注白细胞富集部分，并且为供体淋巴细胞输注（DLI)储存RBC富集部分。
[0092] 施用时间
[0093] 关于白细胞富集部分和RBC富集部分的时间，白细胞富集部分优选首先施用。白 细胞富集部分的开始和RBC富集部分的开始可以是同时的，或者可以被一分钟、两分钟、10 分钟、20分钟、30分钟、60分钟、2小时、3小时、4小时、5小时、大约6小时、7小时、8小时、 9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小 时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、几个月或几 年等间隔开。还包含的是间隔时间的范围，其中任意给出的时间是那个时间的+/-10%、那 个时间的+/-20 %、那个时间的+/-50 %等。
[0094] 在排他性的实施方式中，本公开不包括任何制品（或方法制品），其中回收小 于：10, 000, 000 总有核细胞（TNCs)/kg体重，11，000, 000、12, 000, 000、13, 000, 000、 14, 000, 000、15, 000, 000、16, 000, 000、17, 000, 000、18, 000, 000、19, 000, 000、20, 000, 000、 21，000, 000、22, 000, 000、23, 000, 000、24, 000, 000、25, 000, 000、26, 000, 000、27, 000, 000、 28, 000, 000、29, 000, 000、30, 000, 000、31，000, 000、32, 000, 000、33, 000, 000、34, 000, 000、 35, 000, 000、36, 000, 000、37, 000, 000、38, 0