血细胞制品及相关方法(Gen8)的制作方法
【专利说明】血细胞制品及相关方法（Gen8)
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求享有2013年12月18日提交的美国临时申请顺序号61/738, 966m的 全部巴黎公约权益和优先权，其内容在此通过引用全部并入本文。
技术领域
[0003] 本公开涉及胎盘新生儿血液，还称为脐带血、胎盘新生儿血液、胎儿血液或胎盘血 液。本公开还涉及富集白细胞的或富集红细胞的胎盘新生儿血液的部分，以及红细胞减少 的、白细胞减少的、血浆减少的、血浆除去的部分，或者大部分由血浆组成的部分。本公开提 供（例如，通过离心或者细胞分离、冷冻保护、冷冻和解冻的其他技术）制备的血细胞组合 物，以及用于向受试者施用血细胞组合物的方法。
【背景技术】
[0004] 胎盘新生儿血液对治疗许多病症来说是有用的。胎盘新生儿血细胞可以低温存储 以为将来用于与供体对象相同的对象或受体（自体转移）。同基因转移（或移植）为自同 卵双生的转移（或移植）。最常用的是，自同种异体移植供体获得胎盘新生儿血细胞，然后 移植至与所述供体不同的人中（同种异体转移）。所述供体对于所述受体来说可为有亲缘 关系的（有亲缘关系的同种异体移植）或无亲缘关系的（无亲缘关系的同种异体移植）。 从单个脐带中，可以获得大约50mL至500mL的血液并且用于移植至受体中。对于移植，可 以结合来自超过一个供体的胎盘新生儿血液，胎盘新生儿血液可以与其他来源的造血干细 胞结合，或可以扩大来自单一供体的白细胞，然后将其移植至受体中。
[0005] 在骨髓或外周血，而不是胎盘新生儿血液，是造血干细胞和祖细胞（其包含在白 细胞部分中）的来源的情况下，传统上使用来自HLA-匹配的供体的骨髓或外周血。HLA-匹 配优选的是对于12个HLAA/B/C/DP/DQ/DR等位基因中有至少10-12个。所述HLA-匹配 的供体可为自体的、同胞、另一个有亲缘关系的供体或无亲缘关系的供体。但是，仅大约 30%的患者具有可满足严格匹配要求的同胞供体。在没有匹配的同胞供体的情况下，患者 可依靠骨髓登记网来寻找HLA-匹配的供体（Brown等（2008)Clin.Immunol. 127:286-297 ; Seggewiss等（2010)Blood115:3861-3868)。胎盘新生儿血液为造血干细胞和祖细胞 的另一个来源。六个HLAA/B/DR位点中有大于或等于四个匹配，HLA-匹配不是那么重 要。HLA-匹配可以不是决定性的，因为胎盘新生儿血液移植对于急性和慢性GVHD来说 存在较小危险。骨髓移植或外周血干细胞移植对GVHD的频率和严重程度来说造成较大 危险（见，例如，PetropoulouandRocha(2011)StemCellsInt. 2011:610514(8 页）； Narimatsu(2011)StemCellsInt. 2011:607569(6 页））。
[0006] 胎盘新生儿血液移植的适应症包括血癌、遗传疾病、自体免疫疾病和再生医学，例 如，克拉伯病、心肌梗塞、糖尿病和中风，而不意味着任何限制。如通过"柏林患者"的成功 所证明的，本公开的试剂的适应症还包括人类免疫缺陷病毒（HIV)感染。所述柏林患者 的研究是显著的，因为其引起对HIV的潜在功能性治愈（Johnston等（2012)J.Int.AIDS Soc. 15:16(7页）。血癌包括淋巴瘤，即急性淋巴细胞白血病（ALL)、慢性淋巴细胞白血病 (CLL)和多毛细胞白血病（HCL)。血癌还包括骨髓瘤，S卩，急性髓性白血病（AML)、急性早幼 粒细胞性白血病（APL)、慢性髓样白血病（CML)和骨髓增生异常综合征（MDS)。胎盘新生儿 血液含有能够在体内分化成全部三个谱系（外胚层、中胚层和内胚层）（包括神经、心脏、上 皮、肝细胞和真皮组织）的多能细胞（vandeVen等（2007)Exp.Med. 35:1753-1765)。本公 开的血细胞组合物针对上述适应症。
【发明内容】
[0007] 提供的是一种提供来自全胎盘新生儿血液组合物的部分的方法，其中，所述方法 提供白细胞富集的部分和红细胞（RBC)富集的部分，和非必须的血浆部分，其中，所述RBC 富集的部分含有超过一种白细胞，其中，（i)在所述白细胞富集的部分中的白细胞的数量加 (ii)在所述RBC富集的部分中的白细胞的数量的总和：为在所述全胎盘新生儿血液组合物 中的白细胞的总数的至少90% (或至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、 至少85%、至少95%、至少98%、或至少大约100% )，并且其中，对于任何为归档或试验的 目的取出的样本，修正在所述总和中的白细胞的数量，所述方法包括：(a)使用能够将细胞 分离成白细胞富集的部分和RBC富集的部分和非必须的血浆部分的装置，处理所述全胎盘 新生儿血液组合物来提供白细胞富集的部分和RBC富集的部分，（b)低温存储白细胞富集 的部分的细胞以及低温存储RBC富集的部分的细胞，和非必须的血浆部分，（c)其中，所述 存储的白细胞富集的部分的细胞和所述存储的RBC富集的部分的细胞能够向一个受体施 用，并且其中，该施用能够使由所述全胎盘新生儿血液组合物得到的白细胞的至少90%转 移至所述受体中。
[0008] 还提供的是上述方法，其中，所述装置包括离心机或细胞分部分离器。还提供的是 上述方法，其中，分离是通过使所述全胎盘新生儿血液组合物与能够将所述全胎盘新生儿 血液组合物分离成白细胞富集部分和RBC富集部分以及非必须的血浆部分的化学组合物 接触来实现的。
[0009] 还提供的是上述方法，其中，分离是通过使所述全胎盘新生儿血液组合物与能够 将所述全胎盘新生儿血液组合物分离成白细胞富集部分和RBC富集部分以及非必须的血 浆部分的化学组合物接触来实现的，并且其中，所述化学组合物包含羟乙基淀粉、密度梯度 介质或抗体。
[0010] 还提供的是上述方法，其中，所述全胎盘新生儿血液组合物包含抗凝血剂。还提供 的是上述方法，其中，所述归档或试验的目的包括血液学试验、血液化学试验和供体鉴定试 验的一种或多种。还包括的是上述方法，其中，将所述白细胞富集部分的细胞向受体施用， 接着将所述RBC富集部分的细胞单独地向同一受体施用。
[0011] 还意欲包括的是上述方法，其中，将所述RBC富集部分的细胞向受体施用，接着将 所述白细胞富集部分的白细胞单独地向同一受试者施用。还提供的是上述方法，其中，所述 全胎盘新生儿血液组合物包含一种或多种抗凝血剂。此外，提供的是上述方法，其中，所述 全胎盘新生儿血液组合物包含一种或多种抗凝血剂，并且其中，所述一种或多种抗凝血剂 为柠檬酸盐和肝素中的一种或多种。还提供的是上述方法，其中，所述白细胞富集的部分的 细胞通过洗涤来处理以降低游离血红蛋白的浓度，其中，所述洗涤发生在解冻所述白细胞 富集的部分的细胞之后以及在向受体施用所述白细胞富集的部分的细胞之前。另一方面， 提供的是上述方法，其中，所述RBC富集的部分的细胞通过洗涤来处理以降低游离血红蛋 白的浓度，其中，所述洗涤发生在解冻所述RBC富集的部分的细胞之后以及在向受体施用 所述RBC富集的部分的细胞之前。
[0012] 还提供的是上述方法，其中，没有将来自所述白细胞富的集部分和所述RBC富集 的部分的细胞的其中之一或两者洗涤，其中，在解冻所述细胞之后：（i)在向受体施用所述 细胞之前，将细胞重建或扩张，或者（ii)将所述细胞直接输注至受体中。
[0013] 还包括的是上述方法，其中，将所述全胎盘新生儿血液组合物的血浆成分定义为 100%，并且其中，（i)所述白细胞富集的部分和（ii)所述RBC富集的部分，以及（iii)所 述血浆部分的储存的细胞的血浆成分的总和：为至少90%或至少95%。在另一方面，所述 总和为至少70%、至少75%、至少80%、至少85%等。
[0014] 还提供的是上述方法，其中，将所述全胎盘新生儿血液组合物的血浆成分定义为 100%，并且其中，（i)所述白细胞富集的部分和（ii)所述RBC富集的部分，以及（iii)所述 血浆部分的储存的细胞的血浆成分的总和：低于80%、低于50%、低于20%或低于10%。在 另一个实施方式中，所述百分比可以低于9〇 %、低于75 %、低于70 %、低于65 %、低于60 %、 低于55%、低于45%、低于40%、低于35%、低于30%等。
[0015] 此外，提供的是上述方法，进一步包括向受试者施用来自所述白细胞富集部分的 细胞，和向同一受试者施用来自所述RBC富集部分的细胞。此外，提供的是上述方法，其中， 在施用所述来自RBC富集部分的细胞之前，施用所述来自白细胞富集部分的细胞，或者，其 中，在施用所述来自白细胞富集部分的细胞之前，施用所述来自RBC富集部分的细胞。
[0016] 在组合物实施方式中，提供的是一种组合物，其包含通过上述方法制备的白细胞 富集部分。还提供的是一种组合物，其包含通过上述方法制备的RBC富集部分。还提供的 是一种包含白细胞富集部分和RBC富集部分的组合物，所述白细胞富集部分和RBC富集部 分均通过上述方法制备。还提供的是一种组合物，其包含通过上述方法制备的血浆部分。
[0017] 在系统实施方式中，提供的是一种包含上述组合组中的一种或多种的系统。在另 一个系统实施方式中，提供的是上述系统，其中，所述组合物的一种或多种已被冷冻。在又 一个系统实施方式中，提供的是上述系统，其中，所述组合物的一种或多种已被冷冻，但未 曾被解冻。
[0018] 关于细胞的数量，可以计为细胞数的数是活细胞、裂解的细胞和细胞血影的总和。 或者，细胞数可以计为活细胞数，而不包括裂解的细胞并且不包括细胞血影。这些定义中的 任何一个可以用于计算回收，其中可以基于上下文选择。
[0019] 上述方法，其中，所述全胎盘新生儿血液组合物包含一种或多种用于白细胞富集 的部分和红细胞富集的部分的冷冻保存的冷冻保护剂，并且其中，所述一种或多种抗凝血 剂为二甲亚砜（DMS0)加上或减去硫酸葡聚糖中的一种或多种，或者甘油，然而可以在没有 任何冷冻保护剂的情况下冷冻保存任何血浆部分。
[0020] 上述方法，其中，所述全胎盘新生儿血液组合物包含一种或多种用于白细胞富集 的部分和红细胞富集的部分的冷冻保存的冷冻保护剂，并且，其中，所述一种或多种抗凝血 剂为二甲亚砜（DMS0)加上或减去硫酸葡聚糖中的一种或多种，或者甘油，然而任何血浆部 分使用将温度从室温或+4C缓慢降低至-40C或-50C(经过DMS0从液相到固相改变的过渡 相）的控制速率冷冻装置或者转储冻结法来冷冻保存，通常每分钟大约-1C或-2C;此后， 从大约-40C或-50C到大约-90C至-193C，所述温度降低可以快至每分钟大约-10C。
[0021 ] 本公开的优势在于减少在存储期间的空间和体积，减少DMS0的量，由此减少施用 后的不良事件。优势包括，与例如将全血被分部分离成几个大体上相等的部分然后处理的 实施方式相比，细胞回收更好。另一个优势是，仅洗涤红细胞富集的部分，这样减少白细胞 的损失。与血浆减少/除去法相比的另一个优势是减少DMS0的量、减少细胞碎片的量、减 少细胞因子释放，从而减少不良事件。与红细胞减少法相比的又一个优势是获得较好的植 入率、更好的总存活率和更好的无疾病存活率。本公开的另一个优势是通过减少DMS0、细胞 碎片和细胞因子的结合来降低患者的死亡率。
【附图说明】
[0022] 图1.图1披露在使用密度梯度的情况下的过程和血细胞组合物。
[0023] 图2显示在使用细胞分部分离器的情况下的过程和血细胞组合物。
[0024] 图3.流程图披露在加入RBC聚集剂的情况下的过程。图3A包含直立的血袋以及 图3B包含倒置的血袋。
[0025] 如在此使用的，包括所附权利要求，除非上下文另外清楚地规定，否则如"一"、"一 个"和"该"的词语的单数形式包括它们相对应的复数形式。在此引用的所有参考文献通过 引用并入，其程度如同每个独立的公布、专利和公开的专利申请，以及在所述公布和专利文 献中的图片和图画，被具体地并独立地通过引用并入。
[0026] 定义
[0027] "施用"，当它应用于人、哺乳动物、哺乳动物受试者、动物、动物疾病受试者、安慰 剂受试者、研究受试者、实验受试者、细胞、组织、器官或生物液体时，指的是，但不限于，所 述受试者、细胞、组织、器官或生物液体等对血细胞组合物、外源配体、试剂、安慰剂、小分 子、药剂、治疗剂、诊断剂或组合物的接触。"施用"可指，例如，治疗的方法、药代动力的方 法、诊断的方法、研究方法、安慰剂法和实验的方法。细胞的处理包括试剂对细胞的接触、以 及试剂对液体的接触，其中，使所述液体与所述细胞接触。"施用"还包括通过试剂、诊断、结 合组合物或通过另一细胞进行例如细胞的体外和离体处理。
[0028] 定义严重不良事件（SAEs)和不良事件（AEs)。食品药品管理局（FDA)的行业指导 提供以下严重不良事件（SAEs)的定义："以任何导致死亡、危及生命、需要住院病人住院治 疗或延长目前的住院治疗、导致持久或重大残疾/伤残、或者先天畸形/出生缺陷的剂量造 成的任何不利的医学事件。"
[0029] 定义不良事件（AEs)。食品药品管理局（FDA)的行业指导提供以下不良事件（AEs) 的定义："AE是施用制药产品的患者或临床研究对象的任何不利的医学事件，并且该不利 的医学事件不必与所述治疗具有因果关系。因此AE可以是时间上与药物（研究的）产品 的使用有关的任何不利的或非预期的征兆（包括异常的实验室研究发现）、症状、或疾病， 不论是否与药物（研究的）产品相关。"（见，美国卫生和人类服务部（U.S.Departmentof HealthandHumanServices)食品和药物管理局行业指南E6良好的临床实践：统一的指 导（1996年4月））。这些定义被FDA-控制的临床试验使用。
[0030] "激动剂"，当它涉及配体和受体时，包括刺激所述受体的分子、分子的结合、络合 物或试剂的结合。例如，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF)的激动剂可包含GM-CSF、GM-CSF的衍生物、刺激GM-CSF受体的抗体。"拮抗剂"，当它涉及在配体和受体之间的关系 时，包括抑制、对抗、下调、和/或脱敏所述受体的分子、分子的结合、或络合物。"拮抗剂"包 含任何抑制受体的组成性活性的试剂。组成性活性是在没有配体/受体相互作用的情况下 的显示的。"拮抗剂"还包含任何抑制或防止受体的被刺激（或被调控）的试剂。作为例 子，GM-CSF受体的拮抗剂包括，但不局限于，与配体（GM-CSF)结合以及防止其与受体结合 的抗体，或与受体结合以及防止配体与受体结合的抗体，或在抗体以非活性构象锁定受体 的情况。
[0031] "有效量"包括，但不局限于，可以改善、逆转、减轻、预防或诊断医学病情或疾病的 症状或征兆的量。除非另外明确地或根据上下文规定，"有效量"不局限于足够改善病情的 最小量。
[0032] "治疗有效量"被定义为足够显示出患者受益（即，引起被治疗的病情的症状的减 少、预防或改善）的试剂或药物组合物的量。当所述试剂或药物组合物包含诊断剂时，"诊 断有效量"被定义为足够产生信号、图像或其他诊断参数的量。药物制剂的有效量将根据如 个体的易感性的程度，个体的年龄、性别和重量，以及个体的特异反应的因素而改变。见，例 如，由Netti等发行的第5, 888, 530号美国专利，其在此通过引用并入本文。
[0033] "细胞外液"包括，例如，血清、血浆、血液、间