甘松香酮c及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物提取物及其制备方法与应用，尤其是甘松香酮C及其制备方 法与应用。
【背景技术】
[0002] 5-羟色胺转运体（SERT)是一种对5-HT有高度亲和力的跨膜转运蛋白，约含630 个氨基酸残基，其编码基因（SLC6A4)分别位于7号和11号染色体上，由跨度约为35kb的 14个外显子组成。SERT蛋白包含12-13个跨膜区，N端及C端位于胞质中，靠近N端处有 cAMP依赖性蛋白激酶结合位点，在第三与第四跨膜区之间有一位于细胞外的环状部分，是 N-连接的糖基化位点。
[0003] SERT属于Na+/Cl依赖型转运蛋白，主要位于5-HT能神经元。SERT从神经突触 间隙中重新摄取5-HT进入突触前神经元，直接影响突触间隙5-HT浓度，改变突触后受体介 导信号的量和作用持续时间。此外，发现SERT在胎盘组织、骨髓、肾、肺、心、肾上腺、肝、甲 状旁腺、甲状腺、胰腺和小肠等器官亦有分布，提示SERT参与多种生理功能。
[0004] SERT是转运5-HT的重要分子，与情绪、食欲、睡眠、记忆、学习等许多生理心理功 能相关，SERT及5-HT表达改变可引起焦虑、抑郁、强迫症、恐惧症，甚至精神分裂症，并与药 物成瘾性密切相关；此外，发现SERT在胃肠道功能性疾病中扮演了重要角色，如临床上慢 传输性便秘、肠道易激综合征、功能性腹胀等胃肠功能性疾病，采用针对SERT的抗抑郁药、 抗焦虑药物取得了疗效。
[0005] SERT是临床药物研发的重要靶点，选择性5-羟色胺再摄取抑制药（SSRI)包括 氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰等，临床常用于治疗抑郁症、焦虑症和强迫 症等，此类药物镇静作用小，也不损伤精神运动功能，对心血管和自主神经系统功能影响很 小。
[0006] 甘松（Nardostachys chinensis Batal.)是败酱科甘松属植物，具有理气止痛，开 郁醒脾；外用祛湿消肿的功效，甘松已经报道的生物活性包括（1)作用于神经系统，如抗抑 郁、镇静和抗惊厥、抗帕金森和记忆恢复；（2)作用于心血管系统，如降血压、抗心律失常、 抗心肌缺血、抗心血管损伤；(3)作用于呼吸系统，如增强耐缺氧能力；(4)抑菌；（5)抗肝 损伤等。甘松的化学成分包括倍半萜、三萜、环烯醚萜、香豆素、酚酸、黄酮等，倍半萜是其主 要成分，但未见这类化合物在SERT抑制活性方面的报道。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题在于提供一种甘松香酮C。
[0008] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松香酮C的制备方法。
[0009] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松香酮C的应用。
[0010] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
[0011] -种甘松香酮C(kanshone C)，具有如下结构通式（I)，
[0012]
[0013] 优选的，上述甘松香酮C，其物理化学和波谱性质：无色粉末（二氯甲烷）。UV(MeOH)人 nax: 197、333nm;CD(c0? 05,MeOH)人（Ae) : 251 (+0? 72)、224(+0. 19)、 2. 17 (1H,m,H-2 0 )、1. 24 (1H,m,H-3a)、1. 45 (1H,ddd, 4. 0, 13. 2, 16. 8,H-3 0 )、1.67(lH，m，H-4)、2.01(lH，d，J= 8.0Hz，H-6)、2.31(lH，d，J= 8.0Hz，H-7)、 1. 31 (3H，s，12-CH3)、1. 41 (3H，s，13-CH3)、1. 21 (3H，s，14-CH3)、1. 02 (3H，d，J= 6. 8Hz，15-CH3) ;13C-NMR(CDC13, 100MHz) :Sc66. 0(C-1)、26. 0(C-2)、24. 3(C-3)、38. 4(C-4)、 36. 8(C-5)、44. 2(C-6)、39. 6(C-7)、194. 1/188. 9(C-8)、188. 9/194. 1 (C-9)、64. 6(C-10)、 31. 1 (C-ll)、19. 8 (C-12)、30. 8 (C-13)、17. 8 (C-14)、15. 8 (C-15)。
[0014] 优选的，上述甘松香酮C，其化学结构特点：马兜铃烷型倍半萜母核上1，10-位形 成三元氧环，8、9-位双酮羰基取代。
[0015] 上述甘松香酮C的制备方法，具体步骤如下：
[0016] (1)甘松根茎用70% (v/v)乙醇浸提3次，每次48小时，合并提取液，减压浓缩， 得粗提物浸膏；然后用70 %乙醇热提上述药渣3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩，再 次得粗提物浸膏；合并两次粗提物浸膏获得粗提物总浸膏；
[0017] (2)所得粗提物总浸膏经水分散后，分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依 次萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水层；
[0018] (3)将石油醚部位经硅胶柱色谱，石油醚：乙酸乙酯=100:0(100:0指100%石油 醚洗脱情况）-100:50溶剂系统梯度洗脱，得22个流份Fr. 1-22 ;
[0019] (4)石油醚：乙酸乙酯=100:5-100:7溶剂洗脱流份一一流份Fr. 9经反复硅胶柱 层析，石油醚：乙酸乙酯=100:0 (100:0指100 %石油醚洗脱情况）-100:10梯度洗脱，分离 得到甘松香酮C。
[0020] 上述甘松香酮C在制备用于治疗神经精神疾病和/或药物成瘾性的药物方面的应 用，其中，神经精神疾病包括抑郁症、焦虑症、精神分裂症、强迫症或神经退行性疾病。
[0021] 上述甘松香酮C在制备用于治疗消化系统功能紊乱疾病的药物方面的应用，其 中，消化系统功能紊乱疾病包括慢传输性便秘、肠道易激综合征或功能性腹胀。
[0022] 具有上述甘松香酮C的药物组合物，包含治疗和/或预防有效量的上述化合物 (甘松香酮C)以及任选的药学可接受的赋形剂。
[0023] 上述药学可接受的赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂，特定赋形剂 的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态，用于特定给药模式的合 适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可 接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促 进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等，必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐 剂和甜味剂等。
[0024] 上述药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳 剂、注射用无菌粉针等多种形式，各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
[0025] 本发明的有益效果是：
[0026] 上述甘松香酮C从败酱科甘松属植物甘松（Nardostachys chinensis Batal.)的 根茎中分离纯化而得，具有抑制5-羟色胺转运体（SERT)活性，可作为治疗抑郁症、焦虑症、 精神分裂症、强迫症、神经退行性疾病、药物成瘾性等神经系统疾病以及慢传输性便秘、肠 道易激综合征、和功能性腹胀等消化系统功能紊乱疾病的治疗药物，具有重要的药物开发 价值。
【附图说明】
[0027] 图1是甘松香酮C对SERT活性的抑制作用，其中，阳性对照药分别为2. 0 MFluoxetine和1. 0 M Tianeptine，*p〈0. 05, ***p〈0. 001〇
【具体实施方式】
[0028] 为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合【具体实施方式】 对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
[0029] 实验仪器与试剂：傅里叶变换核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司，AVIII型 400MHz及600MHz);显色剂：10%硫酸乙醇。
[0030] 实施例1
[0031] 活性成分甘松香酮C化合物的制备（提取分离流程）：
[0032] 甘松药材饮片购自安徽济人药业有限公司（批号：110709,规格：1kg/袋，产地： 四川），约20kg。甘松根茎20kg用70% (v/v)乙醇浸提3次，每次48小时，合并提取液，减 压浓缩，得粗提物浸膏3kg ;然后用70%乙醇热提上述药渣3次，每次2小时，合并提取液， 减压浓缩，得粗提物浸膏400g ;合并两次粗提物得总浸膏3. 4kg ;所得粗提物总浸膏，经水 分散后，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚部位320g、乙酸乙 酯部位lkg、正丁醇部位600g、水层1. 2kg ;将石油醚部位320g经硅胶柱色谱（100-200目拌 样硅胶400g，200-300目柱硅胶3. 3kg，石油醚：乙酸乙酯=100:0-100:50溶剂系统梯度洗 脱），得22个流份Fr. 1-22 ;流份Fr. 9 (石油醚：乙酸乙酯=100:5-100:7溶剂洗脱流份）， 经反复硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯=100:0-100:10梯度洗脱），分离得到该化合物甘 松香酮C。
[0033] 经测定，甘松香酮C(Kanshone C)，无色粉末（二氯甲烧）。UV(MeOH) 入nax: 197、333nm ;CD(c 0? 05，Me0H)人（A e ) :251 (+0? 72)、224(+0. 19)、203(+0. 94)nm ; 匪R(CDC13, 400MHz) :SH 3. 63 (1H，brs，H-l)、1. 82 (1H，m，H-2a)、2. 17 (1H，m，H-2 0 )、 1. 24(lH，m,H-3a)、1. 45(1H,ddd, 4. 0, 13. 2, 16. 8，H-3 0 )、1. 67(lH，m，H-4)、2. 01 (1H,d，J =8.0Hz，H-6)、2.31 (lH，d，J= 8.0Hz，H-7)、1.31 (3H，s，12-CH3)、1.41 (3H，s，13-CH3)、 1.21(3H，s，14-CH3)、1.02(3H，d，J= 6.8Hz，15-CH3) ;13C-NMR(CDC13，100MHz):Sc 66. 0(C-1)、26. 0(C-2)、24. 3(C-3)、38. 4(C-4)、36. 8(C-5)、44. 2(C-6)、39. 6(C-7)、 194. 1/188.9 (C-8)、188.9/194. 1 (C-9)、64.6 (C-10)、31. 1 (C-ll)、19.8 (C-12)、 30. 8 (C-13)、17. 8 (C-14)、15. 8 (C-15)。所述甘松香酮C化合物的结构中马兜铃烷型倍半萜 母核上1，10-位形成三元氧环，8、9_位双酮羰基取代。结构式如下：
[0034]
[0035] 实施例2
[0036] 本发明所述化合物对5-羟色胺转运体（SERT)的影响
[0037]米用稳定转染的 hSERT_HEK293 细胞株，以 4_ (4_ (dimethylamino) phenyl)-1-met hylpyridinium(APP+)为荧光底物，在高内涵系统上检测化合物甘松香酮C对SERT活性的 影响。
[0038] 1)实验仪器与试剂
[0039] 实验仪器：
[0040]高内涵Operetta系统和Columbus数据管理和分析系统（PerkinElmer)，超