一种鉴定猪宰后24小时背最长肌pH值大小的方法及其专用引物对的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种鉴定猪宰后24小时背最长肌抑值大小的方法及其专用引物对， 属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 猪肉抑值的大小不仅对猪肉的口感有重要影响，还与猪肉失水率，肉色等显著相 关，极大地影响着猪肉的销售。猪宰后24小时背最长肌的抑值是反映猪肉抑值的标准指 标之一，是猪肉品质育种的育种目标的重要组成部分。但是，由于抑值只能在动物长成之 后才能测定，一方面加大了育种成本，另一方面拉长了世代间隔，遗传进展缓慢。分子生物 技术的飞速发展和猪遗传连锁图谱的构建，为抑值等数量性状开展育种更准确、进展更快 速的分子育种提供了研究基础。且由于猪是人类研究的一种重要的模式动物，找到对猪肉 抑值有影响的基因有可能对人类的研究提供一定的借鉴意义。
【发明内容】
[0003] 本发明的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大 小的方法。
[0004] 本发明提供的鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大小的方法包括如 下步骤：检测待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸是A还是G还是A和G，W 确定待测猪的基因型是AA基因型还是GG基因型还是AG基因型，根据所述猪个体的基因型 确定所述猪宰后24小时背最长肌的抑值大小：GG基因型的猪宰后24小时背最长肌的抑 值大于AG基因型的猪个体，AG基因型的猪宰后24小时背最长肌的抑值大于AA基因型的 猪个体； 阳0化]所述GG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸为G的纯合体；[0006]所述AG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸为A和G的杂 合体； 阳007] 所述AA基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸为A的纯合体； 阳00引所述MAP2K4基因如序列表中序列3所示。
[0009] 上述方法中，所述检测待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸是A还是 G还是A和G为如下1)或2):
[0010] 1)直接测序； W11]。用能够扩增含有猪MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸的引物对扩增所述 待测猪的基因组DNA，得到PCR扩增产物，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基均 为A，则所述猪的基因型为AA基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基为A 和G，则所述猪的基因型为AG基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基均为 G，则所述猪的基因型为GG基因型。
[0012] 上述方法中，所述B)包括如下步骤：所述引物对满足如下条件：W所述猪个体的 基因组DNA为模板进行PCR扩增的产物含有MAP2K4基因的第118位氧核糖核巧酸； 阳01引所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。
[0014] 本发明的另一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值 大小的试剂。
[0015] 本发明提供的鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大小的试剂是检测 待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸是A还是G还是A和G的物质；
[0016] 所述MAP2K4基因的核巧酸序列如序列表中序列3所示。
[0017] 上述试剂中，所述物质为由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列 2所示的单链DNA分子组成的引物对。
[0018] 本发明还有一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值 大小的试剂盒。
[0019] 本发明提供的鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大小的试剂盒包括 上述试剂。
[0020] 上述试剂或上述试剂盒在鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大小中 的应用也属于本发明的保护范围。
[0021] 上述试剂或上述试剂盒在制备鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大 小的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
[0022] 上述方法或上述试剂或上述试剂盒在猪育种中的应用也属于本发明的保护范围。
[0023] 上述方法或上述试剂或上述试剂盒在选育宰后24小时背最长肌的抑值大的种猪 中的应用也属于本发明的保护范围。
[0024] 本发明的最后一个目的是提供一种选育宰后24小时背最长肌的抑值大的猪的方 法。
[0025] 本发明提供的选育宰后24小时背最长肌的抑值大的猪的方法包括选择GG基因 型的猪进行育种；
[00%] 所述GG基因型为MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸均为G的纯合体；
[0027] 所述MAP2K4基因的核巧酸序列如序列表中序列3所示。
[0028] 上述方法或上述试剂或上述试剂盒或上述应用中，所述MAP2K4基因的第118位脱 氧核糖核巧酸也为国际猪基因组10. 2版本参考序列12号染色体上第59380629位脱氧核 糖核巧酸。
[0029] 本发明提供了一种鉴定猪宰后24小时背最长肌抑值大小的方法。该方法是检测 待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸是A还是G还是A和G，W确定待测猪的 基因型是AA基因型还是GG基因型还是AG基因型。只需进行PCR反应，测序即可判别个体 的基因型。通过试验证明：本发明的方法操作简单、费用低、准确度高，并可实现自动化的直 接检测对猪进行育种，不仅可对待选猪进行早期筛选，有效地缓解实际生产中的选取优良 种猪时间长的问题，而且降低了育种花费，能有效降低或提高实际生产中的猪的抑值，在 猪的育种工作中将发挥巨大作用。
【附图说明】
[0030] 图1为AA基因型个体和GG基因型个体MAP2K4基因g.59380629A〉G多态性位点 附近序列的测序结果。
【具体实施方式】
[0031] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0032] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0033] 下述实施例中的大民杂交猪（Susscro化)，由大白猪和民猪杂交获得，该猪购自 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所昌平畜禽实验基地。
[0034] 实施例1、猪宰后24小时背最长肌抑值大小的鉴定方法及应用
[0035] 一、猪MAP2K4基因g.59380629A〉G多态性位点的确定
[0036] (一）W两头大民杂交猪为实验材料，分别提取其耳缘组织的基因组DNA。
[0037](二）引物的设计与合成
[0038] 根据猪MAP2K4基因内的国际猪基因组10. 2版本参考序列信息，设计并合成如下 引物：
[0039]U(上游引物）：5'-GCTGCTTTGCTGTTTGACTA-3'（沈QIDNo. 1);
[0040] D(下游引物）：5,-CAGTTTCTAAGCCCAACATTCT-3'（沈QIDNo. 2)。 柳41](S)PCR扩增
[0042] 分别W步骤（一）得到的大民杂交猪的基因组DM为模板，WU和D为引物进行 PCR扩增，得到PCR扩增产物，分别命名为产物1和产物2。
[0043]PCR扩增体系：基因组DNA200ng，10XPCR扩增缓冲液5μ1，dNTPs终浓度为 lOmM，上、下游引物各50ng，TaqDNA聚合酶0. 75U，Mg2么5mmol/L，用d地2〇补足体系至 50μ1。
[0044]PCR扩增程序：95°C变性5min;然后95°C变性20s，59°C退火30s，72°C延伸30s，共 35个循环；最后72°C延伸lOmin。
[0045](四）测序及序列分析
[0046] 将产物1和产物2进行测序，得到产物1的序列（如SEQIDNo. 3所示）和产物 2的序列（如SEQIDNo. 4所示）。SEQIDNo. 3和SEQIDNo. 4只存在一个碱基的差异， 均为SEQIDNo. 3和SEQIDNo. 4中自5'末端起第118位，该处的碱基为A或G，该位点 附近的序列如图1所示（其中箭头所示为该多态性位点），该位点位于G