enBankAAAession Number为NC_010454. 3的自5'末端起第13739位，因此将该位点命名为g. 59380629A〉G。
[0047] 在国际猪基因组10. 2版本参考序列12号染色体上第59380629个核巧酸位点的 碱基（或步骤（Ξ)得到的PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基）均为A的个体，该 个体为纯合型个体，将该个体的基因型命名为纯合AA基因型，国际猪基因组10. 2版本参考 序列12号染色体上第59380629个核巧酸位点的碱基（或步骤（Ξ)得到的PCR扩增产物 自5'末端起第118位的碱基）均为G的个体，该个体为纯合型个体，将该个体的基因型命 名为纯合GG基因型，国际猪基因组10. 2版本参考序列12号染色体上第59380629个核巧 酸位点的碱基（或步骤（Ξ)得到的PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基）为A和 G的个体，该个体为杂合型个体，将该个体的基因型命名为杂合AG基因型。 W48] 二、猪MAP2K4基因g. 59380629A〉G多态性位点与猪宰后24小时背最长肌抑值性 状的相关性分析
[0049] 为确定g. 59380629A〉G多态性位点与猪宰后24小时背最长肌抑值性状是否相 关，W591头大民杂交猪为实验材料，进行如下试验：
[0050] (一）提取每头猪的耳缘组织的基因组DNA，分别按照步骤一中（Ξ)的方法进行 PCR扩增，得到各PCR扩增产物，按照步骤一中（四）的方法确定每头猪的基因型是纯合AA 基因型、杂合AG基因型还是纯合GG基因型。
[0051] (二）测定并记录每头猪的抑值大小。 阳0巧 （Ξ)根据猪的基因型W及猪抑值大小得到如下结论：纯合GG基因型的猪宰后 24小时背最长肌抑值大于杂合AG基因型的猪个体，杂合AG基因型的猪宰后24小时背最 长肌抑值大于纯合AA基因型的猪个体。
[0053](四）对g. 59380629A〉G位点与猪宰后24小时背最长肌pH值性状W最小二乘法 开展关联分析。所用模型如下：Y=S+P+B+G+e。其中Y为性状测定值，S为性别效应，P为 胎次效应，B为屠宰批次效应，G为基因型效应，e为残差效应。
[0054] 结果如表1所示：从表1可W看出，在猪宰后24小时背最长肌抑值性状中，纯合 GG基因型的猪宰后24小时背最长肌抑值大于杂合AG基因型的猪个体，杂合AG基因型的 猪宰后24小时背最长肌抑值大于纯合AA基因型的猪个体，纯合GG基因型的猪宰后24小 时背最长肌抑值比纯合AA基因型的猪个体高约0. 29 (P<0. 05)。说明本发明用MAP2K4基 因国际猪基因组10. 2版本参考序列12号染色体上第59380629位核巧酸（序列表中序列 3所示的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核酸）的多态性鉴定猪宰后24小时背最长肌抑 值的方法与猪宰后24小时背最长肌抑值的实际测定结果一致。 阳化5] 在实际的猪育种中，为获得更高抑值性状的猪，最好选择GG基因型的猪进行育 种。
[0056] 表1、猪的基因型与猪抑值的相关性分析
[0057]
[0058] 注：同列上标不同字母表示差异显著（P<0. 05)
[0059] 综合所述，可W按照如下方法鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的抑值大 小： W60] 检测待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核巧酸是A还是G还是A和G，W 确定待测猪的基因型是AA基因型还是GG基因型还是AG基因型，根据猪个体的基因型确定 猪宰后24小时背最长肌的抑值大小：GG基因型的猪宰后24小时背最长肌的抑值大于AG 基因型的猪个体，AG基因型的猪宰后24小时背最长肌的抑值大于AA基因型的猪个体；
[0061] GG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸均为G的纯合体；
[0062] AG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸为A和G的杂合体；
[0063] AA基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核巧酸均为A的纯合体；
[0064] MAP2K4基因如序列表中序列3所示。
【主权项】
1. 一种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的pH值大小的方法，包括如下步骤： 检测待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核苷酸是A还是G还是A和G，以确定待测 猪的基因型是AA基因型还是GG基因型还是AG基因型，根据所述猪个体的基因型确定所述 猪宰后24小时背最长肌的pH值大小：GG基因型的猪宰后24小时背最长肌的pH值大于AG 基因型的猪个体，AG基因型的猪宰后24小时背最长肌的pH值大于AA基因型的猪个体； 所述GG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核苷酸为G的纯合体； 所述AG基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核苷酸为A和G的杂合体； 所述AA基因型为MAP2K4基因自5'末端第118位脱氧核糖核苷酸为A的纯合体。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述检测待测猪的MAP2K4基因的第118 位脱氧核糖核苷酸是A还是G还是A和G为如下1)或2): 1) 直接测序； 2) 用能够扩增含有猪MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核苷酸的引物对扩增所述待测 猪的基因组DNA，得到PCR扩增产物，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基均为 A，则所述猪的基因型为AA基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基为A和 G，则所述猪的基因型为AG基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基均为G， 则所述猪的基因型为GG基因型。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述B)包括如下步骤：所述引物对 满足如下条件：以所述猪个体的基因组DNA为模板进行PCR扩增的产物含有MAP2K4基因的 第118位氧核糖核苷酸； 所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。4. 一种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的pH值大小的试剂，是检测待测猪的 MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核苷酸是A还是G还是A和G的物质。5. 根据权利要求4所述的试剂，其特征在于：所述物质为由序列表中序列1所示的单 链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。6. -种鉴定或辅助鉴定猪宰后24小时背最长肌的pH值大小的试剂盒，包括权利要求 4或5所述的试剂。7. 权利要求4或5所述的试剂或权利要求6所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定猪宰后 24小时背最长肌的pH值大小中的应用； 或权利要求4或5所述的试剂或权利要求6所述的试剂盒在制备鉴定或辅助鉴定猪宰 后24小时背最长肌的pH值大小的产品中的应用。8. 权利要求1-3中任一所述的方法或权利要求4或5所述的试剂或权利要求6所述的 试剂盒在猪育种中的应用。9. 权利要求1-3中任一所述的方法或权利要求4或5所述的试剂或权利要求6所述的 试剂盒在选育宰后24小时背最长肌的pH值大的种猪中的应用。10. -种选育宰后24小时背最长肌的pH值大的猪的方法，包括选择GG基因型的猪进 行育种； 所述GG基因型为MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核苷酸均为G的纯合体。
【专利摘要】本发明公开了一种鉴定猪宰后24小时背最长肌pH值大小的方法及其专用引物对。本发明提供的鉴定猪宰后24小时背最长肌pH值大小的方法是检测待测猪的MAP2K4基因的第118位脱氧核糖核苷酸是A还是G还是A和G，以确定待测猪的基因型是AA基因型还是GG基因型还是AG基因型。通过试验证明：本发明的方法操作简单、费用低、准确度高，并可实现自动化的直接检测对猪进行育种，不仅可对待选猪进行早期筛选，有效地缓解实际生产中的选取优良种猪时间长的问题，而且降低了育种花费，能有效降低或提高实际生产中的猪的pH值，在猪的育种工作中将发挥巨大作用。
【IPC分类】C12Q1/68, C12N15/11
【公开号】CN105256045
【申请号】CN201510741101
【发明人】王立贤, 王立刚, 张龙超, 颜华, 刘欣
【申请人】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月4日