一种草履虫分离纯化植酸派烯的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种草履虫分离纯化植酸派烯的方法，属于植酸派烯提取技术领域。
【背景技术】
[0002]锯叶棕，又名锯棕叶或锯棕榈，学名为“沙巴棕”，属于棕榈科灌木植物，是一种低矮的灌木状棕榈树，通常生长在南北美洲气候炎热的地区，其锯叶棕榈成熟的干燥果实可供药用。锯叶棕果的提取物为疗效显著的天然前列腺肥大症治疗剂。锯叶棕提取物具有有效抑制5a—还原酶活性，减少双氢睾酮生成拮抗前列腺组织中的雄激素与雄激素受体结合；具有肾上腺素能拮抗作用和钙阻断作用，达到改善膀胱机能，解痉作用；还可抑制环氧化酶与脂氧化酶的活性，减少白三烯，前列腺素等炎症介质的生成，从而起抗炎，抗水肿作用；而且特含天然特效杀菌因子一一植酸派烯，直接破坏病原体DNA聚合酶，摧毁耐药菌株，绝杀病菌质粒；能激活免疫，在尿路粘膜分别产生IgA，IgG, IgC三种免疫抗体，形成三层防护膜，不仅使几年，十几年甚至几十年顽疾一次性彻底治愈，而且真正防止复发！用于治疗尿道、膀胱和前列腺疾病。目前方法在提取天然特效杀菌因子植酸派烯过程中分离纯化困难，需添加大量溶剂分离纯化而得，导致此产品杂质高、纯度低，加工成本增高等弊端。因此，研究出一种纯度高、易分离纯化的提取植酸派烯方法，具有重要的经济效益和社会意义。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题:针对目前方法在提取植酸派烯过程中分离纯化困难，需添加大量溶剂分离纯化而得，导致此产品杂质高、纯度低，加工成本增高的弊端，提供了一种草履虫分离纯化植酸派烯的方法，本发明先通过超声辅助提取植酸派烯粗品，制备草履虫培养液，待草履虫适应并吸收植酸派烯培养液进行大量繁殖，再进行分离纯化得植酸派烯纯品。本发明提取方法简单，所得产品杂质低、纯度高，无需添加任何溶剂，生产成本低。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是:
(1)在稻田灌水期间，寻找田中的旧稻茬，将烧杯置于95?100°C烘箱中灭菌处理2?3h，随后用灭菌后的烧杯在稻茬周围20?30cm处取500?100mL含有草履虫的水，选取新鲜稻草根部以上2?3cm处，截取3?5cm长的稻草段，将其置于烧杯中，待采集完成后，将烧杯置于25?30°C下，光照强度为120?140 μ mo I m 2S \对其培养6?7天，备用；
(2)将锯叶棕果实置于阳光下暴晒3?5天，使其脱水晒干，选取脱水晒干的锯叶棕果实，将其置于气流粉碎机中进行粉碎并对其过筛，制备得60?80目的锯叶棕果实粉末，将乙酸乙酯和锯叶棕果实粉末按质量比10:1进行搅拌混合，待其混合均匀后，对其加热至60?70°C，并在1200?1500r/min速度下，通过200?300W下超声辅助提取I?2h ;
(3)待超声辅助提取完成后，在2000?3000r/min离心机中，离心分离10?15min，取上层提取液减压浓缩至原有体积的1/5，制得锯叶棕果实预提取液，随后按锯叶棕果实预提取液和丙酮体积比1:1进行反复萃取，直至无色透明后对其减压蒸干，待晶体完全析出，则制备得植酸派烯粗品；
(4)将植酸派烯粗品和去离子水按质量比1:10搅拌混合，制备得植酸派烯提取液，选取新鲜洁净的稻草，去掉上端和底部，取稻草秸杆中间3?4cm，按质量比1:10，将稻草和去离子水搅拌混合并置于灭菌处理的三角烧瓶中，加热煮沸至瓶中液体呈现黄褐色时停止加热，使其自然冷却制得稻草混合液，随后按体积比1: 5，将上述制备的植酸派烯提取液加入黄褐色稻草混合液中，制得草履虫培养液，并用质量分数1 %的氢氧化钠调节pH至6.8?7.3 ；
(5)将步骤(1)培养的含有草履虫的水液吸取1?2mL，接种至草履虫培养液的锥形瓶中，并将其放在温度为25?30°C下，光照强度为120?140 μ mol m 2s 1处进行培养，将锥形瓶口用纱布包严，每隔3天左右更换一次培养液，待更换3?4次培养液后，吸取含有草履虫的水液，接种到含有植酸派烯提取液的三口烧瓶中，设置温度为25?30°C下，光照强度为120?140 μ mol m 2s \待培养6?7天后，对三口烧瓶中混合液进行过滤，除去滤渣后在12000?13000r/min的转速下离心10?15min，取上层清液旋转蒸发至结晶完全析出，即可制得一种草履虫分离纯化植酸派烯。
[0005]本发明与其他方法相比，有益技术效果是:
(1)该方法提取的植酸派烯杂质低，纯度高、纯度达99.2%以上，无需添加任何溶剂，绿色安全，成本低；
(2 )本发明提取方法简单，所得产品易分离纯化，生产效率高。
【具体实施方式】
[0006]首先在稻田灌水期间，寻找田中的旧稻茬，将烧杯置于95?100°C烘箱中灭菌处理2?3h，随后用灭菌后的烧杯在稻茬周围20?30cm处取500?1000mL含有草履虫的水，选取新鲜稻草根部以上2?3cm处，截取3?5cm长的稻草段，将其置于烧杯中，待采集完成后，将烧杯置于25?30°C下，光照强度为120?140 μ mol m 2s \对其培养6?7天，备用；然后将锯叶棕果实置于阳光下暴晒3?5天，使其脱水晒干，选取脱水晒干的锯叶棕果实，将其置于气流粉碎机中进行粉碎并对其过筛，制备得60?80目的锯叶棕果实粉末，将乙酸乙酯和锯叶棕果实粉末按质量比10:1进行搅拌混合，待其混合均匀后，对其加热至60?70°C，并在1200?1500r/min速度下，通过200?300W下超声辅助提取1?2h ;待超声辅助提取完成后，在2000?3000r/min离心机中，离心分离10?15min，取上层提取液减压浓缩至原有体积的1/5，制得锯叶棕果实预提取液，随后按锯叶棕果实预提取液和丙酮体积比1:1进行反复萃取，直至无色透明后对其减压蒸干，待晶体完全析出，则制备得植酸派烯粗品；再将植酸派烯粗品和去离子水按质量比1:10搅拌混合，制备得植酸派烯提取液，选取新鲜洁净的稻草，去掉上端和底部，取稻草秸杆中间3?4cm，按质量比1:10，将稻草和去离子水搅拌混合并置于灭菌处理的三角烧瓶中，加热煮沸至瓶中液体呈现黄褐色时停止加热，使其自然冷却制得稻草混合液，随后按体积比1:5，将上述制备的植酸派烯提取液加入黄褐色稻草混合液中，制得草履虫培养液，并用质量分数1 %的氢氧化钠调节pH至
6.8?7.3 ;最后将备用的培养的含有草履虫的水液吸取1?2mL，接种至草履虫培养液的锥形瓶中，并将其放在温度为25?30°C下，光照强度为120?140ymol m 2s 1处进行培养，将锥形瓶口用纱布包严，每隔3天左右更换一次培养液，待更换3?4次培养液后，吸取含有草履虫的水液，接种到含有植酸派烯提取液的三口烧瓶中，设置温度为25?30°C下，光照强度为120?140 μ mo I m 2S \待培养6?7天后，对三口烧瓶中混合液进行过滤，除去滤渣后在12000?13000r/min的转速下离心10?15min，取上层清液旋转蒸发至结晶完全析出，即可制得一种草履虫分离纯化植酸派烯。
[0007]实例I
首先在稻田灌水期间，寻找田中的旧稻茬，将烧杯置于95°C烘箱中灭菌处理2h，随后用灭菌后的烧杯在稻茬周围20cm处取500mL含有草履虫的水，选取新鲜稻草根部以上2cm处，截取3cm长的稻草段，将其置于烧杯中，待采集完成后，将烧杯置于25°C下，光照强度为120 μ mol m 2S \对其培养6天，备用；然后将锯叶棕果实置于阳光下暴晒3天，使其脱水晒干，选取脱水晒干的锯叶棕果实，将其置于气流粉碎机中进行粉碎并对其过筛，制备得60目的锯叶棕果实粉末，将乙酸乙酯和锯叶棕果实粉末按质量比10:1进行搅拌混合，待其混合均匀后，对其加热至60°C，并在1200r/min速度下，通过200W下超声辅助提取Ih ;待超声辅助提取完成后，在2000r/min离心机中，离心分离lOmin，取上层提取液减压浓缩至原有体积的1/5，制得锯叶棕果实预提取液，随后按锯叶棕果实预提取液和丙酮体积比1:1进行反复萃取，直至无色透明后对其减压蒸干，待晶体完全析出，则制备得植酸派烯粗品；再将植酸派烯粗品和去离子水按质量比1:10搅拌混合，制备得植酸派烯提取液，选取新鲜洁净的稻草，去掉上端和底部，取稻草秸杆中间3cm，按质量比1:10，将稻草和去离子水搅拌混合并置于灭菌处理的三角烧瓶中，加热煮沸至瓶中液体呈现黄褐色时停止加热，使其自然冷却制得稻草混合液，随后按体积比1: 5，将上述制备的植酸派烯提取液加入黄褐色稻草混合液中，制得草履虫培养液，并用质量分数I %的氢氧化钠调节PH至6.8 ;最后将备用的培养的含有草履虫的水液吸取lmL，接种至草履虫培养液的锥形瓶中，并将其放在温度为25°C下，光照强度为120μπιΟ1 m2s 1处进行培养，将锥形瓶口用纱布包严