rDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至90 μ g/μ 1 ；
[0039]S3、用限制性内切酶酶切无毒广谱抗病基因ΡΥΗ157和抗虫基因CpTl后，分别连接到pBin438质粒上构建两种外源质粒DNA ；
[0040]S4、将所得两种外源质粒DNA分别重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1 μ g/ μ L的混合液；
[0041 ] S5、取步骤S2所得溶液中的一种或几种共2 μ 1，依次加入含8 μ 1外源质粒DNA的步骤S4所得的混合液、6 μ 1脂质体，混合后，加入30 μ 1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入分别导入步骤S1所选择的高粱品种中；
[0042]S5、选择阳性植株，并获取其种子，播前晒种2天，将所得的种子用0.2%的磷酸二氢钾溶液或用5%广枯宁水剂，25°C浸泡30分钟，种子吸胀后捞起滤干后用拌种剂进行拌种处理；
[0043]S6、选取背风向阳、肥沃疏松的菜园地，按4.5尺宽厢面提厢，厢沟0.5尺，长度按一亩大田用3斤种子播种，盖土厚度1厘米，每公顷施入腐熟、发酵的农家肥30至40立方米，底肥160千克，底肥由以下重量份的组分构成:
[0044]草炭32份、沼气渣32份、腐植酸铵13份、硅藻土 3份、氨基酸螯合镁3份、一水硫酸锌1份、氨基酸螯合锰3份、氨基酸螯合硼3份、聚天门冬氨酸2份、枯草芽孢杆菌2份、厚孢轮枝菌1份、印棟素0.15份、放线菌素0.1份、胶冻样芽孢杆菌0.1份、固氮螺菌0.1份。
[0045]S7、早间苗在4叶时匀苗保留壮苗，疏密留稀，拨除病、弱、杂苗，5叶时按土壤肥力、施肥水平及播种密度每窝定苗2株，净作每亩保证8200株或者套作每亩保证8300株；
[0046]S8、施肥管理:定苗后，每亩用清粪20-担加尿素2公斤，追施提苗肥，结合除草进行中耕松土第一次，在拨节前以深斤追施拨节孕穗肥，并结合中耕培土第三次。
[0047]实施例3
[0048]S1、选用适宜当地种植，抗倒、分蘖弱、穗大、结实率高的优质、高产的高粱品种；
[0049]S2、将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至90-100 μ g/ μ 1 ；
[0050]S3、用限制性内切酶酶切无毒广谱抗病基因ΡΥΗ157和抗虫基因CpTl后，分别连接到pBin438质粒上构建两种外源质粒DNA ；
[0051 ] S4、将所得两种外源质粒DNA分别重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为3 μ g/ μ L的混合液；
[0052]S5、取步骤S2所得溶液中的一种或几种共2 μ 1，依次加入含8 μ 1外源质粒DNA的步骤S4所得的混合液、6 μ 1脂质体，混合后，加入30 μ 1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入分别导入步骤S1所选择的高粱品种中；
[0053]S5、选择阳性植株，并获取其种子，播前晒种3天，将所得的种子用0.2%的磷酸二氢钾溶液或用5%广枯宁水剂，40°C浸泡30分钟，种子吸胀后捞起滤干后用拌种剂进行拌种处理；
[0054]S6、选取背风向阳、肥沃疏松的菜园地，按5尺宽厢面提厢，厢沟0.8尺，长度按一亩大田用3斤种子播种，盖土厚度1-3厘米，每公顷施入腐熟、发酵的农家肥30至40立方米，底肥210千克，底肥由以下重量份的组分构成:
[0055]草炭38份、沼气渣38份、腐植酸铵22份、硅藻土 9份、氨基酸螯合镁4份、一水硫酸锌5份、氨基酸螯合锰5份、氨基酸螯合硼4份、聚天门冬氨酸3份、枯草芽孢杆菌3份、厚孢轮枝菌3份、印棟素2.5份、放线菌素0.3份、胶冻样芽孢杆菌0.3份、固氮螺菌0.3份。
[0056]S7、早间苗在4叶时匀苗保留壮苗，疏密留稀，拨除病、弱、杂苗，6叶时按土壤肥力、施肥水平及播种密度每窝定苗2-3株，净作每亩保证13000株或者套作每亩保证9600株;
[0057]S8、施肥管理:定苗后，每亩用清粪30担加尿素3公斤，追施提苗肥，结合除草进行中耕松土第一次，在拨节前以深斤追施拨节孕穗肥，并结合中耕培土第三次。
[0058]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种高粱品种选育及其栽培方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、选用适宜当地种植，抗倒、分蘖弱、穗大、结实率高的优质、高产的高粱品种； 52、将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至90-100μ g/μ I ； 53、用限制性内切酶酶切无毒广谱抗病基因ΡΥΗ157和抗虫基因CpTI后，分别连接到pBin438质粒上构建两种外源质粒DNA ； 54、将所得两种外源质粒DNA分别重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1-3 μ g/ μ L的混合液； 55、取步骤S2所得溶液中的一种或几种共2μ 1，依次加入含8 μ I外源质粒DNA的步骤S4所得的混合液、6 μ I脂质体，混合后，加入30 μ I的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入分别导入步骤SI所选择的高粱品种中； 55、选择阳性植株，并获取其种子，播前晒种2-3天，将所得的种子用0.1-0.2%的磷酸二氢钾溶液或用3-5%广枯宁水剂，25°C -40°C浸泡20-30分钟，种子吸胀后捞起滤干后用拌种剂进行拌种处理； 56、选取背风向阳、肥沃疏松的菜园地，按4.5-5尺宽厢面提厢，厢沟0.5-0.8尺，长度按一亩大田用3斤种子播种，盖土厚度1-3厘米，每公顷施入腐熟、发酵的农家肥30至40立方米，底肥160-210千克，底肥由以下重量份的组分构成: 草炭32-38份、沼气渣32-38份、腐植酸铵13-22份、硅藻土 3_9份、氨基酸螯合镁3_4份、一水硫酸锌1-5份、氨基酸螯合锰3-5份、氨基酸螯合硼3-4份、聚天门冬氨酸2-3份、枯草芽孢杆菌2-3份、厚孢轮枝菌1-3份、印棟素0.15-2.5份、放线菌素0.1-0.3份、胶冻样芽孢杆菌0.1-0.3份、固氮螺菌0.1-0.3份。 57、早间苗在3-4叶时匀苗保留壮苗，疏密留稀，拨除病、弱、杂苗，5-6叶时按土壤肥力、施肥水平及播种密度每窝定苗2-3株，净作每亩保证8200-13000株或者套作每亩保证8300-9600 株； 58、施肥管理:定苗后，每亩用清粪20-30担加尿素2-3公斤，追施提苗肥，结合除草进行中耕松土第一次，在拨节前以深斤追施拨节孕穗肥，并结合中耕培土第三次。2.根据权利要求1所述的一种高粱品种选育及其栽培方法，其特征在于，所述缓冲液包含7-13mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.3-0.7mmol/L 二氨基乙烷四乙酸，7-13mmol/L氯化钠、0.015 μ g.μ I ^0.055 μ g.μ I 1甲基磺酸乙酯。3.根据权利要求1所述的一种高粱品种选育及其栽培方法，其特征在于，质粒DNA保护剂由氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和TWeen20保护剂按体积比2: 3: I混合所得。4.根据权利要求1所述的一种高粱品种选育及其栽培方法，其特征在于，限制性内切酶为限制性内切酶Hind II1.+EcoR I酶。5.根据权利要求1所述的一种高粱品种选育及其栽培方法，其特征在于，所述拌种剂包括35-65%核苷酸盐和35-65%的中微量元素，所述核苷酸盐包括核糖核酸碱水解后得到的Y -腺苷酸二钾或钠，5'-鸟腺苷酸二钾或钠，5'-胞苷酸二钾或钠和Y -尿苷酸二钾，所述中微量元素包括Mn、B、Fe、Zn、Cu和Mo，所述Mn: B: Fe: Zn: Cu: Mo的重量比为3:1: 2:1: 2: 2。
【专利摘要】本发明公开了一种高粱品种选育及其栽培方法，包括如下步骤：通过花粉管通道法将无毒广谱抗病基因PYH157和抗虫基因CpTI导入高粱中后，选择阳性植株，并获取其种子，将种子经晒种、浸种和拌种处理后进行播种，施农家肥和底肥，早间苗匀苗保留壮苗，疏密留稀，拨除病、弱、杂苗，5-6叶时按土壤肥力、施肥水平及播种密度每窝定苗2-3株，定苗后，追施提苗肥，结合除草进行中耕松土第一次，在拨节前以深斤追施拨节孕穗肥，并结合中耕培土第三次。本发明提高了高粱作物的抗病能力，使高粱的生长周期缩短，成熟速度更快，植株的抗病能力强，同时产量提高，品质更好，荚果饱满，病虫害明显减少。
【IPC分类】A01H5/00, A01G1/00, C12N15/82
【公开号】CN105349573
【申请号】CN201510906040
【发明人】王淑芳, 冀月林, 刘建明, 杨存良, 武江鑫, 于伟, 邢玉伟, 高海生, 武江涛, 贾彦青, 王雄飞, 师丽晓, 聂建国, 张建萍, 柴小丽, 高美怀, 王宏伟, 贾变, 武龙, 王鑫, 郭俊峰, 丁一, 王云龙, 张鹏义, 段立功
【申请人】山西省原平市双惠种业有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月5日