量的增加，药液中的指标成分的理化检测结果无明显变化，乙醇含量虽壳聚糖澄清 剂添加量的增加也逐渐下降。但在控制范围内。从一年时间的外观观察结果表明，我们可见 采用添加壳聚糖〇.2g/L以上的浓度，即可满足需要。此法从计算生产成本角度几乎可以忽 略，但可以大大地缩短生产周期，提高生产效率，提升产品的质量。
[0096] 在生产中我们将以上实验结果(浓度分别0.2g/L、0.3g/L)进行放大，壳聚糖在这 两个浓度下，对药酒中的主要成份没有明显的吸附作用，同时综合考虑到了生产设备，技术 条件，生产成本等各项因素。最终确定了生产过程中所使用的壳聚糖浓度为〇.3g/L。
[0097] 本发明所制备的保健药酒质量标准如下、但不限以下所述保健药酒质量标准。 [0098]保健药酒质量标准
[0099] 【感官要求】见表8;
[0100] 表8感官要求
[0102]【理化指标】见表9;
[0103] 表9理化指标
[0105]【微生物限度】应符合中国药典2010版2部有关规定 [0106]【标志性成分含量测定】
[0107]总皂苷:根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003)中总皂苷的测定方法测定。 [0108]总黄酮:根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003)中总黄酮的测定方法测定。
[0109]实验例3:保健药酒的急性经口毒性实验 [0110] 1、材料和方法
[0111] 1.1样品：由山东司邦得制药有限公司制备保健药酒，规格:500mL/瓶，实施例1方 法制备。人口服用量推荐为每人(成人)每日一次，每次lOOmL，成人体重按60kg计算，折合剂 量为1.67mL/kg。空白产品20倍浓缩液(不含乙醇，以下称"浓缩液样品"）和含60 %浓度乙醇 的酒供实验用。置4°C冰箱保存。
[0112] 1.2实验动物及环境：SPF级健康昆明种小鼠和SD种大鼠，由广东省医学实验动物 中心繁殖，实验动物生产许可证号：SCXK(粵)2014-0002，实验动物质量合格证号:0072967 (小鼠）、0073187 (雄性大鼠）、0073188 (雌性大鼠）。实验动物使用许可证号：SYXK(桂)2014- 0003。实验动物室温度:22~25°C，相对湿度:55~70 %。r>[0113] 1.3实验方法:采用最大给药量试验法，选体重18~22g的昆明种小鼠20只，雌、雄 性各半。试验前动物禁食16小时，不限饮水。用纯水将60% (V/V)浓度乙醇的酒基对倍稀释 成30% (V/V)乙醇浓度。称取50.0g浓缩液样品，加30% (V/V)乙醇浓度的酒基50mL，再加纯 水至1OOmL，混勾、配成50mg/mL浓度溶液，试验液的乙醇终浓度为15 % (V/V)，然后给动物灌 胃2次（中途间隔6h)，每次灌胃量为0.4mL/20g，合计剂量为20000mg/kg。灌胃后观察、记录 动物的中毒表现。每周称重一次;观察两周时间，试验结束解剖动物进行大体观察。按毒性 分级标准评价受试动物的急性毒性;见表10;
[0114]表10小鼠的急性毒性试验结果
[0115]
[0116] 2、结论
[0117]表10可见，以最大给药量（剂量为20000mg/kg)的浓缩液样品给予小鼠灌胃后，动 物生长良好，未见体重受到影响。受试小鼠均未见有中毒症状，观察14天无动物死亡。试验 结束解剖动物、大体观察，肝、肾、脾、心、肺、胃、肠等主要器官均未见明显异常改变，根据 《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版）中急性毒性分级标准，该样品的急性经口毒性 属无毒级。
[0118]实验例4:保健药酒的Ames实验
[0119] 1、材料和方法
[0120] 1.1样品：与实验例3相同
[0121] 1.2实验动物及环境:与实验例3相同
[0122] 1.3实验方法:采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、 TA100、TA102四种菌株进行实验。以多氯联苯诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9)作为体外代谢活 化系统。采用平板掺入法，在保温的顶层培养基中一次加入0.lmL试验菌株增菌液、0.lmL受 试物溶液和〇.5mL S-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上。5个试验 剂量分别为5000、1000、200、40、8yg/皿，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性突变剂对 照。自发回变对照除不加样品外，其余条件与样品组相同。溶剂对照用纯水替代样品，其余 条件与样品组相同。在无菌操作条件下，用灭菌纯水将浓缩液样品分别配成50、10、2、0.4、 0.08mg/mL 5个浓度，经过滤器(0.22μπι孔径滤膜)过滤除菌后作为受试溶液。每个剂量组的 各种菌株均做3个平行皿。在37°C下培养48小时，计数每皿的菌落数。整套试验在相同条件 下重复做两次。如果受试物的回变菌落数增加超过自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂 量-反应关系者，即为诱变实验阳性。见表11;
[0123] 表11Ames实验结果(第一次）
[0124]
[0125] 注：1、以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值土标准差。
[0126] 2、阳性对照：TA97a+S9、TA98+S9、TA100+S9采用2-氨基芴（剂量为 10g/皿）；TA98-S9采用柔毛霉素（剂量为6g/皿）；TA97a-S9、TA102-S9采用敌克松（剂量为50g/皿）；TA100-S9采用叠氮钠(剂量为1.5g/皿）；TA102+S9采用1,8-二羟基蒽醌(剂量为50g/皿）。见表12;
[0127] 表12Ames试验结果(第二次）
[0130] 注：以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值土标准差。
[0131] 3、结论:从表11、表12可见，对了497&、了498、了4100、了4102四种试验菌株，无论是否 加入，样品各剂量组的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系，表 明该受试物诱变试验结果为阴性。
[0132] 实验例5:保健药酒对小鼠增强免疫力功能实验
[0133] 1、材料与方法
[0134] 1.1材料:实施例1方法制备，为淡棕黄色的澄清液体，每瓶500ml;香菇多糖（10mg/ 片）由武汉标达药业有限公司生产;市场有售。
[0135]1.2剂量设置:小、中、大剂量组按每公斤体重分别给8.4、16.7和33.4ml/kg，相当 于人体临床一日平均用量的5、10、20倍。
[0136] 1.3观察指标与处理方法
[0137] 1.3.1对正常小鼠免疫器官重量的影响健康昆明种小鼠（由广东省医学实验动物 中心提供，40只，体重16~22g，雌雄各半，随机分为5组，正常对照组、香菇多糖组和保健药 酒小、中、大剂量组，每组各8只。保健药酒小、中、大剂量组给药剂量每公斤体重分别相当于 8.4、16.7、33.41111/1^，香燕多糖组每公斤体重10.〇11^，给药体积为0.21111/1(^，对照组给予 等容量双蒸水，每日经口灌胃1次，连续l〇d。末次给药后lh断颈椎处死，摘取胸腺和脾脏，称 重，计算胸腺指数和脾指数(g/kg)。
[0138] 1.3.2对PHA刺激小鼠淋巴细胞转化的影响
[0139] 取同种小鼠共50只，雌雄各半，随机分为5组，正常对照组、香菇多糖组、保健药酒 小、中、大剂量组各10只。保健药酒小、中、大剂量组一次经口灌胃剂量每公斤体重分别相当 于8.4、16.7、33.41111/1^，香燕多糖组每公斤体重10.〇11^，给药体积为0.21111/1(^，对照组给 予等容量双蒸水，每日1次，连续10日。各组小鼠在给药最后3d每日给予经肌肉注射 PHA10mg/kgl次，连续3d，并于末次给药后2h剪小鼠尾巴，取血推片，瑞氏染色，油镜下计数 100个淋巴细胞，计算淋巴细胞转化率（％ )。
[0140] 1.4统计学处理结果用ti表示，经多组间AN0VA方差分析。
[0141] 2、结果
[0142] 2.1对正常小鼠免疫器官重量的影响
[0143] 不同剂量的保健药酒能不同程度地增加脾脏指数，以中剂量组作用明显（P< 0.05)，对胸腺指数仅有轻度增加效应(P>0.05)。阳性对照组香菇多糖能明显增加脾脏指 数，对胸腺指数无影响。提示保健药酒对免疫器官有一定的增重效应(见表13)。
[0144] 表13保健药酒对正常小鼠免疫器官重量的影响f念:#
[0146] 与正常对照组比较，*Ρ<0·05，#Ρ<0·01
[0147] 2.2对PHA刺激小鼠淋巴细胞转化的影响与正常对照相比，香菇多糖组淋巴细胞转 化率显著增加(p<0.05)。保健药酒不同剂量组的淋巴细胞转化率有不同程度的增加，有较 好的量效关系，尤以大剂量组作用明显(P<〇.01)。提示保健药酒能增加细胞免疫功能（见 表 14)〇
[0148]表14保健药酒对正常小鼠淋巴细胞转化功能的影响
[0150] 与正常对照组比较，*Ρ<0·05，#Ρ<...