Tcf4蛋白在作为胃癌检测标记物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及TCF4蛋白在作为胃癌检测标记物中的应用，特别 涉及检测TCF4蛋白含量的物质在制备用于监测胃癌发生和/或发展的产品中的应用。
【背景技术】
[0002] 胃癌是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤，我国是胃癌的高发区，每年新增病例 接近全球总数的一半。由于胃癌早期临床症状特异性低和缺乏简便有效的监测指标，近半 数胃癌患者在确诊时多已处于进展期，往往发生局部或远处转移，从而失去了最佳治疗时 期。肿瘤的转移和复发往往是导致预后不良的重要因素，它的发生机制十分复杂，通常涉及 多基因、多阶段、多因素参与。因此，进一步探索研究新的基因表达变化与胃癌发生发展及 其恶性特征的关系，对揭示其发生发展的分子机制及设计合理的治疗方案及判断预后，提 高胃癌的治疗水平具有重要意义。
[0003] T细胞因子4(T cell factor 4，TCF4)又叫TCF7L2(transcription factor 71ike 2)，属于Wnt信号通路中核转录因子TCF/LEF(T_Cell Factor/Lymphoid Enhancer Factor) 家族成员，其他成员有TCF-1(TCF7)，TCF-3(TCF7L1)和LEF1，其全长氨基酸序列含有四个功 能区域:第一个是与β-catenin结合的结构域，位于N末端;第二个是高迀移率族蛋白结构域 (high mobility group domain，HMG-box)，这是该家族成员均具有的结构域，它是一组高 度保守的DNA结合域，可以结合到Wnt反应元件;第三个是核定位信号结构域，第四个是羧基 端蛋白结合域，该区域是选择性剪接的高频位点。这四个结构域不是独立的，其作用是相互 影响的。
[0004] 本领域迫切需要进行对肿瘤信号通路中关键基因的研究，尤其是在中国发病率很 高的胃癌的相关基因，阐明这些基因与胃癌的发生发展的关系，可以为胃癌的诊断和治疗 提供新的手段。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种TCF4蛋白的新用途。
[0006] 本发明所提供的新用途具体为用于检测如下（1)-(3)中任一的检测物在制备用于 监测胃癌发生和/或发展的产品中的应用：
[0007] (1)TCF4蛋白；
[0008] (2)编码所述TCF4蛋白的mRNA;
[0009] (3)编码所述TCF4蛋白的基因。
[0010] 其中，所述检测物可为任何能够实现对所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因进行 定量检测的试剂和/或仪器。具体可选自如下中任一种:抗所述TCF4蛋白的特异性抗体、用 于扩增所述基因的特异性扩增引物、用于检测所述mRNA或所述基因的探针或芯片。对所述 TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因进行定量检测包括但不限于:使用DNA探针或荧光探针直 接检测胃癌组织DNA基因组中的TCF4基因，设计TCF4的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)方法检测TCF4的mRNA，使用免疫组化、免疫荧光、流式细胞等方法检测转录TCF4基 因的蛋白并对蛋白进行染色标记。
[0011]胃癌恶性程度高，胃癌原发病灶处的TCF4蛋白表达量也高，反之亦然，因此胃癌原 发病灶处的TCF4蛋白表达量高低在一定程度上可以直接反应胃癌预后情况。
[0012]本发明还提供了一种用于监测胃癌发生的系统。
[0013] 本发明所提供的用于监测胃癌发生的系统，包含用于检测如下（1)-(3)中任一的 检测物：
[0014] (1)TCF4蛋白；
[0015] (2)编码所述TCF4蛋白的mRNA;
[0016] (3)编码所述TCF4蛋白的基因。
[0017]所述系统还包含数据处理装置;所述数据处理装置内设模块1和模块2;所述模块1 具有如下(al)所示的功能，所述模块2具有如下(a2)所示的功能：（al)采集并比较待测者与 对照者的组织样本中所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因的表达量；（a2)根据比较结果按 照如下方法确定所述待测者是否为胃癌患者:若所述待测者的组织样本中所述TCF4蛋白或 所述mRNA或所述基因的表达量显著高于所述对照者的组织样本中所述TCF4蛋白或所述 mRNA或所述基因的表达量，则所述待测者为或候选为胃癌患者;反之，则所述待测者不为或 候选不为胃癌患者;所述对照者为健康人或良性胃炎患者。
[0018] 其中，所述组织样本可为胃组织样本。所述健康人以及所述良性胃炎患者为经过 临床确认的健康人及良性胃炎患者。
[0019] 在实际使用中，最好采用病理组织学进行进一步鉴定。
[0020] 所述检测物可为任何能够实现对所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因进行定量 检测的试剂和/或仪器。具体可选自如下中任一种:抗所述TCF4蛋白的特异性抗体、用于扩 增所述基因的特异性扩增引物、用于检测所述mRNA或所述基因的探针或芯片。对所述TCF4 蛋白或所述mRNA或所述基因进行定量检测的方法包括但不限于:使用DNA探针或荧光探针 直接检测胃癌组织DNA基因组中的TCF4基因，设计TCF4的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)方法检测TCF4的mRNA，使用免疫组化、免疫荧光、流式细胞等方法检测转录TCF4基 因的蛋白并对蛋白进行染色标记。
[0021 ]在本发明的一个实施例中，对所述TCF4蛋白进行定量检测的方法具体为免疫组化 染色法，根据染色结果采用以下标准给予TCF4蛋白表达评分：（1)阳性细胞比例评分标准： 染色比例〈5%为0分；2 5%且〈25%为1分；2 25%且〈50%为2分；2 50%且〈75%为3分，2 75%为4分。（2)染色强度评分标准:无染色为0分;淡黄色为1分；明显的黄棕色为2分;强棕 褐为3分。在40倍物镜下随机选取5个视野，以5个视野阳性细胞比例与染色强度评分的乘积 最后的平均值为最后得分。以得分的高低反应所述TCF4蛋白的表达量的高低。在本发明的 另一个实施例中，对编码所述TCF4蛋白的mRNA的检测方法具体为实时荧光定量RT-PCR法。 在本发明的再一个实施例中，对所述TCF4蛋白进行定量检测的方法具体为western blot检 测法。
[0022]如下(a)-(d)所示物质中的任一种在促进胃癌细胞迀移和/或制备用于促进胃癌 细胞迀移的产品中的应用也属于本发明的保护范围：
[0023] (a)TCF4 蛋白；
[0024] (b)编码所述TCF4蛋白的基因；
[0025] (c)含有所述基因的表达盒、重组载体或转基因细胞；
[0026] (d)能够促进所述TCF4蛋白表达的物质。
[0027] 能够抑制所述TCF4蛋白表达的物质在抑制胃癌细胞迀移和/或制备用于抑制胃癌 细胞迀移的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
[0028] 本发明还提供了一种用于促进胃癌细胞迀移的产品以及用于抑制胃癌细胞迀移 的产品。
[0029]本发明所提供的用于促进胃癌细胞迀移的产品，其活性成分为如下(a)-(d)所示 物质中的任一种：
[0030] (a)TCF4 蛋白；
[0031] (b)所述TCF4蛋白的编码基因；
[0032] (c)含有所述编码基因的表达盒、重组载体或转基因细胞；
[0033] (d)能够促进所述TCF4蛋白表达的物质。
[0034]本发明所提供的用于抑制胃癌细胞迀移的产品，其活性成分为能够抑制所述TCF4 蛋白表达的物质。
[0035]在本发明中，所述"能够抑制所述TCF4蛋白表达的物质"具体为EdTP载体。所述 EdTP载体为addgene公司产品，Plasmid#24311 (Gene/Insert name:EF lalpha_dnhTcf4// SV40-PuroR)〇
[0036] 本发明还保护如下(A)或(B)所示的方法：
[0037] (A)促进胃癌细胞迀移的方法，包括如下步骤:向目的胃癌细胞中导入编码TCF4蛋 白的基因，得到表达所述基因的重组胃癌细胞;所述重组胃癌细胞的迀移速度与所述目的 胃癌细胞的迀移速度相比提高；
[0038] (B)抑制胃癌细胞迀移的方法，包括如下步骤:抑制目的胃癌细胞中编码TCF4蛋白 的基因的表达，得到所述基因被抑制的重组胃癌细胞;所述重组胃癌细胞的迀移速度与所 述目的胃癌细胞的迀移速度相比降低。
[0039]在所述(A)的方法中，所述编码TCF4蛋白的基因是通过重组表达载体的形式导入 所述目的胃癌细胞的；所述重组表达载体是在pCMV6-Entry载体的Sgf I酶切位点和Mlul酶 切位点之间插入序列2所示DNA片段后得到的重组质粒。
[0040] 在所述⑶的方法中，所述"抑制目的胃癌细胞中编码TCF4蛋白的基因的表达"的 方法可为任何能够抑制所述目的胃癌细胞中所述编码TCF4蛋白的基因表达的方法。在本发 明中，所述方法具体为向所述目的胃癌细胞中导入TCF4沉默载体;所述TCF4沉默载体可为 EdTP载体；所述EdTP载体具体为addgene公司产品，Plasmid#24311 (Gene/Insert name : EFlalpha-dnhTcf4//SV4〇-PuroR)〇
[0041] 所述方法为非疾病诊断性方法。
[0042]在本发明中，所述TCF4蛋白为序列表中序列1所示蛋白质。编码所述TCF4蛋白的编 码基因可为如下中任一种：
[0043] (1)序列表中序列2所示的