DNA分子；
[0044] (2)在严格条件下与（1)限定的DNA分子杂交且编码序列表中序列1所示蛋白质的 DNA分子；
[0045] (3)与（1)或(2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码序列表中序列1所示蛋 白质的DNA分子。
[0046] 上述严格条件可为用6 X SSC，0.5 % SDS的溶液，在65°C下杂交，然后用2 X SSC， 0 · 1 % SDS和 1 X SSC，0· 1 % SDS各洗膜一次。
[0047] 在本发明中，所述表达盒由能够启动所述基因表达的启动子，所述基因，以及转录 终止序列组成。
[0048] 在本发明中，所述重组载体为重组表达载体。所述重组表达载体具体为在载体 pCMV6-Entry的多克隆位点处插入所述基因（序列2)后得到的重组质粒。所述多克隆位点具 体为Sgfl酶切位点(GCGATCGC)和Mlul酶切位点(ACGCGT)。所述转基因细胞为非繁殖材料。
[0049] 在本发明实施例中，所述胃癌细胞为人源胃癌细胞，具体为胃癌细胞株SGC7901、 HSC44-PE、44AS3、NCI-N87、MGC803或MKN45。
[0050] 在本发明中，所述产品可为试剂盒。
[0051 ] 实验证明，TCF4基因由于在正常组织、良性胃炎组织和胃癌组织中存在明显的表 达差异，胃癌组织中TCF4基因的表达远高于正常组织或者良性胃炎组织；而且在低转移性 的胃癌与高转移性的胃癌样本中也存在明显的表达差异，高转移性的胃癌原发灶TCF4基因 的表达高于低转移性的胃癌样本，因此TCF4可以作为基因标志物用于检测胃癌的发生和发 展，从而预测胃癌的复发和转移并制定治疗决策。
【附图说明】
[0052]图1为胃部分切除患者的正常胃组织、良性胃炎组织和胃癌组织的免疫组化染色 结果。其中，A为胃部分切除患者的正常胃组织的免疫组化染色结果;B为良性胃炎组织的免 疫组化染色结果;C为胃癌组织的免疫组化染色结果;D为胃癌淋巴结转移灶的免疫组化染 色结果。
[0053] 图2为胃癌组织中TCF4mRNA表达量检测。*表示与对照比较，在P〈0.0 5水平上差异 显著。
[0054] 图3为western blotting检测胃癌细胞株中TCF4蛋白的表达量。其中，A为永生化 的正常胃粘膜上皮细胞株GES-1与6个胃癌细胞株中TCF4蛋白的western blotting结果图； B为SGC7901/C0N与SGC7901/TCF4细胞中TCF4蛋白的western blotting结果图；C为44As3/ CON与44As3/TCF4细胞中TCF4蛋白的western blotting结果图。*表示与对照细胞比较，P〈 0.05水平上差异显著。
[0055]图4为采用划痕实验方法检测胃癌细胞株SGC7901/C0N与SGC7901/TCF4的转移性。 其中，A1与A2分别为SGC7901/C0N细胞在划痕实验Oh与14h的结果;B1与B2分别为SGC7901/ TCF4细胞在划痕实验Oh与14h的结果。*表示与对照比较，在P〈0.01水平上差异显著。图中， SGC-7901 即表示 SGC7901。
[0056]图5为采用划痕实验方法检测胃癌细胞株44As3/C0N与44As3/dnTCF4的转移性。其 中，A1与A2分别为44As3/C0N细胞在划痕实验Oh与14h的结果;B1与B2分别为44As3/dnTCF4 细胞在划痕实验〇h与14h的结果。*表示与对照比较，在P〈0.01水平上差异显著。
【具体实施方式】
[0057]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0058]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0059] 下述实施例中所涉及的TCF4蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示。其编码基 因的序列如序列表中序列2所示。
[0060] 胃癌细胞株44As3:为来自于日本细胞库(JCRB cell bank)的产品。在"Kazuyoshi Yanagihara,Misato Takigahira,Hiromi Tanaka,et al.Development and biological analysis of peritoneal metastasis mouse models for human scirrhous stomach cancer .Cancer Sci .2005Jun; 96 (6) :323-32. " 一文中有记载，公众可从申请人处获得，仅 用于重复本发明实验使用。
[0061 ]胃癌细胞株HSC44-PE:为来自于日本细胞库（JCRB cell bank)的产品。在 "Kazuyoshi Yanagihara,Misato Takigahira,Hiromi Tanaka,et al.Development and biological analysis of peritoneal metastasis mouse models for human scirrhous stomach cancer.Cancer Sci .2005Jun；96(6) :323-32.，!一文中有记载，公众可从申请人处 获得，仅用于重复本发明实验使用。
[0062]胃癌细胞株SGC7901:在"陈坚，钟良，钱立平等.丹参酮Π A诱导SGC7901胃癌细胞 凋亡及机制.复旦学报(医学版），2007年01期"一文中有记载，公众可从申请人处获得，仅用 于重复本发明实验使用。
[0063]胃癌细胞株NCI-N87:在"王中林，蒋平，谭映霞等.苦参碱对NCI-N87胃癌细胞增殖 凋亡及bcl-2蛋白表达的影响.中华中医药学刊，2009年01期"一文中有记载，公众可从申请 人处获得，仅用于重复本发明实验使用。
[0064]胃癌细胞株MGC803:在"何慧，马艳华，苏波等.二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞 1^1^^1/1?〇〇1^1通路的影响.中国药理学通报，2014年03期" 一文中有记载，公众可从申请 人处获得，仅用于重复本发明实验使用。
[0065] 胃癌细胞株MKN45 :在"李琦，范忠泽，孙珏等.幽门螺杆菌对人胃癌MKN45细胞 P38MAPK信号转导通路激活作用的研究.中国癌症杂志，2008年11期"一文中有记载，公众可 从申请人处获得，仅用于重复本发明实验使用。
[0066]永生化胃上皮细胞株GES-1:为来自于中国医学科学院肿瘤细胞库的产品。在"胡 兴萍.左氧氟沙星在GES-1细胞和MGC80-3细胞上的转运特征.安徽医科大学，2014年硕士学 位论文"一文中有记载，公众可从申请人处获得，仅用于重复本发明实验使用。
[0067]实施例1、胃癌组织中TCF4蛋白表达量检测及其与临床病理参数之间的关系 [0068]供试者:83例经临床确诊的胃癌患者(包含47例淋巴结转移性胃癌）；10例经临床 确诊的良性胃炎患者；以及10例非癌症行胃部分切除术患者的正常胃组织。供试者均为自 愿参与。
[0069] 1、免疫组化检测TCF4蛋白的表达
[0070] 通过免疫组化技术检测TCF4蛋白在83例胃癌组织(47例淋巴结转移灶）、10例良性 胃炎患者和10例非癌症行胃部分切除术患者的正常胃粘膜上皮组织中的表达情况。具体操 作如下：
[0071] 将由甲醛固定石蜡包埋后的各组织样品切片经免疫组化SP法染色:在烘箱内以60 °C的条件下烘烤10-20分钟后，放入梯度二甲苯中脱蜡以及梯度酒精中脱水，在枸橼酸(博 士德生物公司产品）溶液中通过高温高压的方式用进行抗原修复，自然冷却至室温，3% (体 积分数)的过氧化氢溶液清除内源性氧化酶，用山羊血清(北京中杉金桥生物技术有限公司 产品）室温封闭lh，弃去，加 anti-TCF4工作液（1:500，abl85736，Abcam公司产品）4°C过夜， 次日经PBS缓冲液(武汉博士德生物工程有限公司产品)洗净后，滴加羊抗鼠/兔IgG(北京中 杉金桥生物技术有限公司产品)孵育1小时，DAB染色剂(北京中杉金桥生物技术有限公司产 品)染色6分钟，蒸馏水洗涤终止染色，苏木素复染30秒，最后进行脱水封片并且拍照评分。
[0072]根据免疫组化染色结果，采用以下标准给予各样本的TCF4蛋白表达评分：（1)阳性 细胞比例评分标准：染色比例〈5%为0分；2 5%且〈25%为1分；2 25%且〈50%为2分；2 50 %且〈75 %为3分，2 75 %为4分。（2)染色强度评分标准:无染色为0分;淡黄色为1分；明显 的黄棕色为2分;强棕褐为3分。在40倍物镜下随机选取5个视野，以5个视野阳性细胞比例与 染色强度评分的乘积最后的平均值为最后得分。以最后分值大于等于2视为阳性，其中2-4 分为弱阳性，4分以上为强阳性。
[0073] 结果发现：胃癌组织以及淋巴结转移灶中TCF4蛋白表达明显高于由良性胃炎组织 和正常胃组织组成的对照标本，且差异具有统计学意义(P〈〇.05)。胃癌组织和良性胃炎组 织中TCF4蛋白表达情况具体参见表1。正常胃组织、良性胃炎组织和胃癌组织以及淋巴结转 移灶的免疫组化染色结果参见图1，由图可见正常胃组织与良性胃炎组织基本未被染色;而 胃癌组织以及淋巴结转移灶样本呈现明显的棕褐色着色。
[0074]表1良性胃炎组织与胃癌组织中TCF4蛋白表达情况 「00751
[0076] *P〈0.05，表示二组之间差异有统计学意义。
[0077] 2、分析TCF4蛋白表达与临床病理参数之间的关系
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