拮抗tlr7/8及tlr9活化的药物分子及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子及用 途。
【背景技术】
[0002] 银肩病俗称牛皮癣，是临床常见的一种慢性炎症性皮肤病，青壮年者发病多，病程 较长，易复发，呈进行性皮损与角质增厚。临床表现以红斑、鳞肩为主，全身均可发病。
[0003] 虽然早期认识到该病是一种与遗传、感染等有关的自身免疫性疾病。但具体致病 机制不清楚，致使目前尚无特效药，主要采用非特异性药物治疗，以软化角质层的对症策 略，或辅助使用少量激素的治疗方案。副作用较大，且疗效不理想。
[0004] 近年来，诸多报道逐步表明，银肩病的致病机制主要是由于自身免疫发生紊乱，皮 肤巨噬细胞和T淋巴细胞等免疫细胞上的Toll样受体(TLRs)家族中的TLR7/8、9,在识别自 身破损细胞及微生物中的核酸片段后，引发过度炎症反应，导致自身表皮细胞进一步损伤， 继而又促使淋巴细胞聚集和表皮角化，由此，反复循环使其不断恶化。
[0005] 最近，国外采用特殊抗体来对抗炎症因子，如：抗白介素（IL)和肿瘤坏死因子 (TNF)的抗体，取得初步疗效。但是，制备工艺较为复杂，价格昂贵。
[0006] 如何从TLRs活化的源头来阻断银肩病的发生和发展，是本领域技术人员关注的热 点。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子及用途。所述药物 分子能拮抗TLR7/8及TLR9活化，抑制TNF，IL等促炎因子的释放，达到抑炎效果;所述药物分 子与生理盐水或磷酸缓冲液配制成注射剂，采用皮下注射方式进行治疗，可显著缓解银肩 病的病理损伤。
[0008] 本发明的技术方案是：
[0009] 拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，该药物分子为包含的序列如SEQ ID N0:1所 示的硫代修饰分子结构。
[0010] 该分子的结构为T*G*G*OG*OG*OA*OOOA*OG*G*OOT*G，其中*为硫代修 饰。
[0011] 上述药物分子在用于制备治疗银肩病药物中的用途，所述药物为注射剂，所述注 射剂由上述药物分子和生理盐水组成，所述的药物分子和生理盐水的重量:体积比为1~2: 3~5〇
[0012] 本发明所述的注射药物的制备过程:按上述核苷酸序列，通过普通化学合成、硫代 修饰并纯化的方法获得，剂型为(水溶性)粉末，可单独，也可辅以甘露醇膨化剂等混合后， 进行真空包装，可保存于室温或4°C冰箱中。
[0013] 使用时，采用普通注射用液体（如：生理盐水，等)稀释，通过注射器在患者皮下进 行注射给药。可按每天一次，可多点注射，每点10~30^/300μ1，每两周为一个疗程，实际疗 程次数可按临床具体情况而定。
[0014] 由于本发明所述注射剂的作用靶点与治疗位置明确、效果显著、安全性好的优点， 能显著抑制促炎因子的释放，改善银肩病的病理损伤，可作为治疗银肩病的药物，具有迫切 的社会健康需求和广泛的应用前景。
[0015] 申请人长期从事Toll样家族相关先天免疫研究，深入的研究TLR9阻断剂C41分子 的作用机制及其适应症，通过实验验证，该分子不仅可以阻断TLR9介导的炎症活化，同时能 拮抗TLR7/8介导的活化;并且在银肩病动物模型上，获得了显著的疗效。而且，c41分子可通 过胞内自身代谢，不影响细胞的再次应答能力，这使得c41分子既能在疾病活动期起抑制作 用，又不会破坏机体正常免疫。经初步安评和药学研究，证实该分子稳定性好，无毒副作用。 由此，c41分子，即本发明所述药物分子，是一种从银肩病发病的起始环节阻断炎症反应，从 而到达治疗效果的药物分子，它势必为广大银肩病患者带来希望，积极推动临床治疗发展。 [00 16]此外，银肩病病理损伤主要发生在表皮、真皮及皮下。通过皮下注射能够快速使药 物进入患处，阻止聚集的免疫细胞的活化，药效更佳。
[0017]本发明所述重量:体积，当重量单位为yg，体积单位则对应为μL;当重量单位为mg， 体积单位则对应为ml;当重量单位为Kg，体积单位则对应为1。
【附图说明】
[0018] 图1为所述药物抑制巨噬细胞TLR7/8，9活化；
[0019] 图2为所述药物改善银肩病的病理损伤(X20，HE).其中a为安慰剂组，b为c41治疗 组。
【具体实施方式】
[0020] 下面的实施例可详细地说明本发明，但不以此限制本发明。
[0021] 实施例1:注射剂制备
[0022] 药物名称:c41分子
[0023] 序列结构：TGGCGCGCACCCACGGCCTG [0024] 修饰结构：
[0025] (*为硫代修饰）
[0026]制备方式:化学合成，委托上海生工公司。产量，采用HPLC纯化，抽取真空，采用玻 璃瓶保存于室温，按330yg/瓶(干粉)包装。
[0027] 使用配置:取一小瓶，注入生理盐水600μ1，稀释混匀，备用。
[0028] 实施例2: c41分子抑制TLR7/8和9的活化鉴定
[0029] 2.1主要材料、试剂与设备：
[0030] 1)细胞株:RAW264 · 7 (ATCC，USA ·)。
[0031] 2)细胞培养基:DMEM(Gibco，Inc.，USA)。
[0032] 3)Elisa试剂盒：抗鼠 TNF_a(eBioscience，Inc · ,USA) 〇
[0033] 4)细胞培养箱:FORMA 3111.
[0034] 5)酶标仪:全波长多功能酶标仪(Thermo Scientific，USA) ·
[0035] 2 · 2实验方法：将RAW264 · 7细胞稀释至I X IOfVmL，加入96孔板（200yL/孔），置37 °C，5%C02培养箱培养2h后，加入TLR7/8激动剂R848(5yl，终浓度100ng/ml)为实验一组;加 入TLR9激动剂CpG-0DN18265yl(5yl，终浓度4μΜ)为实验二组，以上各组均设8复孔。然后，各 组分出4复孔，加培养液5μ1，分别作为安慰剂一组、二组;各组剩余的4复孔，分别加入本发 明所述药物c41分子5μ1(终浓度4μΜ)作为治疗一组、二组。继续培养24h后，收集上清，进行 El isa检测，获取TNF-a浓度。
[0036] 2.3实验结果：安慰剂一组，TLR7/8正常活化，刺激RAW264.7细胞释放大量TNF-a， 安慰剂二组，TLR9正常活化，刺激RAW264.7细胞释放大量TNF-a;治疗一组和二组，在本发明 所述药物c41分子作用下，RAW264.7细胞释放TNF-a水平受到显著抑制(P〈0.01)，所以，该药 物能有效抑制银肩病的关键靶标，遏制过度炎症反应。如附图1所示。
[0037]实施例3:皮下注射治疗银肩病及其疗效。
[0038] 3.1主要材料、试剂与设备：
[0039] 1)动物:Balb/c(华阜康生物科技股份有限公司，中国）。
[0040] 2)建模药物:咪喹莫特（明欣药业，中国）。
[0041] 3)治疗药物:本发明所述注射剂(详见实施例1)
[0042] 3.2实验方法：
[0043] 1)小鼠剃毛后，小鼠剃毛后，咪喹莫特背部建立银肩病模型，20mg/cm2,每天1次， 持续6天。
[0044] 2)分组:安慰剂组，药物治疗组各5只鼠。
[0045] 3)给药:安慰剂组:皮下只注射生理盐水(NS)，100yl/20g体重；治疗组:本发明所 述C41药物用NS稀释为550μg/ml皮下注射C41分子100yl/20g体重。
[0046] 4)各组从第一天开始治疗，持续6天。
[0047] 5) 6天后取各组皮肤组织，HE染色，病理观察。
[0048] 3.3实验结果：
[0049]安慰剂组，皮下炎性细胞浸润，表皮增厚，角质化明显;而治疗组，无明显的炎症细 胞浸润，表皮未见角化，说明，本发明所述注射剂能够有效遏制银肩病的病理损伤。如附图2 所示。
【主权项】
1. 一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，其特征在于：该药物分子为包含的序列如 SEQ ID NO: 1所示的硫代修饰分子结构。2. 根据权利要求1所述的药物分子，其特征在于:所述分子的结构为T*G*G*C*G*C*G*C* A*〇C*C*A*C*G*G*C*C*T*G，其中 *为硫代修饰。3. 权利要求1-2任一所述的药物分子在用于制备治疗银肩病药物中的用途。4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于:所使用药物为注射剂。5. 根据权利要求4所述的用途，其特征在于:所述注射剂由权利要求1或2所述的药物分 子和生理盐水或磷酸缓冲液组成。6. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于:所述的药物分子和生理盐水的重量:体积 比为1~2:3~5。
【专利摘要】本发明涉及一种拮抗TLR7/8及TLR9活化的药物分子，该药物分子为包含的序列如SEQ？ID？NO:1所示的硫代修饰分子结构。本发明所述药物分子能拮抗TLR7/8及TLR9活化，抑制TNF，IL等促炎因子的释放,达到抑炎效果；所述药物分子与生理盐水配制成注射剂，采用皮下注射方式进行治疗，可显著缓解银屑病的病理损伤。
【IPC分类】C07H21/00, A61K31/713, A61P17/06
【公开号】CN105541947
【申请号】CN201610015280
【发明人】李彦, 刘万成, 王宁, 杨希川, 刘鑫
【申请人】中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月11日