I型糖尿病的分子标志物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及一种I型糖尿病的分子标志物。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是W膜岛素绝对或相对缺乏，而导致的高慢性血葡萄糖(简称血糖)水平为 主要特征的代谢素乱性疾病，是当前威胁全球人类健康的最重要的非传染性疾病之一，根 据国际糖尿病联盟统计，2011年全球糖尿病患者人数已达3.7亿，其中80%在发展中国家， 估计到2030年全球将有近5.5亿糖尿病患者。2011年全球共有460万人死于糖尿病，当年糖 尿病的全球医疗花费达4650亿美元。其中糖尿病在中国和其他发展中国家中的快速增长， 已给运些国家的社会和经济发展带来了沉重负担。糖尿病作为常见病与多发病在我国有逐 年上升趋势，临床常见的多为I型和II型糖尿病。
[0003] I型糖尿病(T1DM)最常见的形式是免疫介导的疾病，其中的膜岛素分泌β细胞被自 身免疫应答破坏。若干遗传和环境因素都与所述疾病的发病相关，运设及到特异性祀向膜 岛素分泌β细胞的免疫细胞对膜岛的进行性炎性浸润。运种病变在临床发病前(前糖尿病） 的一段不确定时间形成并且在患者被诊断患有所述疾病之后继续。
[0004] 随着人类基因组计划的完成和分子遗传学的发展，基因的研究受到广泛重视，寻 找与疾病相关的基因成为当前研究的热点。越来越多的研究证实，基因在I型糖尿病的发生 发展过程中起着重要的调控作用，因此基因与I型糖尿病发病风险的关系也备受关注。
[000引目前，I型糖尿病的诊断主要依靠临床检查和各种辅助技术，尽管相比W往来说， 医学技术已高度发达，但是临床上尚无可靠的生物标志物可W对I型糖尿病进行风险预测 和早期诊断。
【发明内容】
[0006] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供与I型糖尿病相关的基因标志 物，使用基因标志物来诊断疾病具有及时性、特异性和灵敏性，使患者在糖尿病早期就能知 晓风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[000引本发明提供了一种ΚΙΑΑ022化基因在制备诊断I型糖尿病产品中的应用。
[0009] 进一步，上面所述诊断产品包括:通过实时定量PCR、RT-PCR、免疫检测、原位杂交 或忍片检测KIAA022化基因的表达水平W诊断I型糖尿病的产品。
[0010] 进一步，所述用实时定量PCR诊断I型糖尿病的产品至少包括一对特异扩增 KIAA0226L基因的引物；所述用RT-PCR诊断I型糖尿病的产品至少包括一对特异扩增 KIAA022化基因的引物;所述用免疫检测诊断I型糖尿病的产品包括:与KIAA022化蛋白特异 性结合的抗体;所述用原位杂交诊断I型糖尿病的产品包括：与KIAA022化基因的核酸序列 杂交的探针;所述用忍片诊断I型糖尿病的产品包括:蛋白忍片和基因忍片;其中，蛋白忍片 包括与KIAA022化蛋白特异性结合的抗体，基因忍片包括与KIAA022化基因的核酸序列杂交 的探针。
[0011] 进一步，所述诊断产品包括忍片和/或试剂盒；其中所述忍片包括基因忍片、蛋白 质忍片;所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒。所述基因检测试剂盒包 括SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增KIAA022化基因和管家基因的引物对;所述 SYBR Green聚合酶链式反应体系包含:PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green巧光染料。
[0012] 本发明提供了一种诊断I型糖尿病的产品，所述产品能够通过检测KIAA022化基因 的表达水平来诊断I型糖尿病。
[0013] 进一步，上面所述的产品包括忍片、或试剂盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白 质忍片;所述基因忍片包括固相载体W及固定在固相载体上的寡核巧酸探针，所述寡核巧 酸探针包括用于检测KIAA022化基因转录水平的针对KIAA022化基因的寡核巧酸探针;所述 蛋白质忍片包括固相载体W及固定在固相载体上的KIAA0226L蛋白的特异性抗体;所述试 剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测 KIAA022化基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括KIAA022化蛋白的特异性抗 体。其中，所述基因忍片可用于检测包括KIAA022化基因在内的多个基因（例如，与I型糖尿 病相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质忍片可用于检测包括KIAA022化蛋白在内的多 个蛋白质(例如与I型糖尿病相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与I型糖尿病的标 志物同时检测，可大大提高I型糖尿病诊断的准确率。
[0014] 进一步，上面所述试剂包括使用实时定量PCR、RT-PCR、免疫检测、原位杂交或忍片 方法检测KIA A 0 2 2 6 L基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对 KIAA022化基因的引物和/或探针。
[0015] 进一步，所述基因检测试剂盒包含SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增 KIAA022化基因和管家基因的引物对;所述SYBR Green聚合酶链式反应体系包含:PCR缓冲 液、dNTPs、SYBR Green巧光染料。
[0016] 进一步，所述扩增KIAA0226L基因的引物对序列如下：正向引物序列为5 ' - 了八了4批46〔44了664644-3'；反向引物序列为5'-了6了4了6446446了464464-3'；所述管家基因为 GAPDH，扩增GAPDH的引物序列对如下：正向引物序列为5'-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3' ；反 向引物序列为5 ' -GGTGGAATCATATTGGAACA-3 '。
[0017] 所述基因检测试剂盒可用于检测包括KIAA022化基因在内的多个基因（例如，与I 型糖尿病相关的多个基因）的表达水平。
[0018] 本发明中与KIAA022化基因的核酸序列杂交的探针可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合 体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核巧酸序列 特异性结合，任何长度都可W。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样， 所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探 针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最 长一般不超过30个碱基对，与目的核巧酸序列互补的长度W15-25个碱基对最佳。所述探针 自身互补序列最好少于4个碱基对，W免影响杂交效率。
[0019] 本发明中所述KIAA022化蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 KIAA022化蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗 体、3〇。乂^曰6^(曰13'）2爪等。只要所述片段能够保留与1(^4022化蛋白的结合能力即可。用 于检测蛋白质水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本发明可w使用任何方法 来制备所述抗体，如所述的片段可W通过化学法从头合成或利用重组DNA技术合成。
[0020] 在本发明的上下文中/'KIAA022化基因"包括人KIAA0226L基因 W及人KIAA0226L 基因的任何功能等同物的多核巧酸。KIAA022化基因包括与目前国际公共核酸序列数据库 GeneBank中KIAA022化基因（NC_000013.11)DNA序列具有70%W上同源性，且编码相同功能 蛋白质的DNA序列；
[0021 ] 优选地，KIAA022化基因的编码序列包括W下任一种DNA分子：
[0022] (1)序列表中沈Q ID N0.1所示的DNA序列；
[0023] (2)在严格条件下与（1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0024] (3)与（1)或(2)限定的DNA序列具有70 %、优选地，90 % W上同源性，且编码相同功 能蛋白质的DNA分子。
[0025] 在本发明的具体实施方案中，所述KIAA022化基因的编码序列是SEQ ID N0.1所示 的DNA序列。
[0026] 本发明的KIA