一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开一种聚丙烯酸?胱胺二盐酸盐?维生素E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如(I)所示。该聚丙烯酸?胱胺二盐酸盐?维生素E琥珀酸酯聚合物具有亲水性和对GSH还原响应性的特点，可作为一个优良的抗肿瘤药物载体。其制备方法简单、条件温和；所使用的材料新颖，具有较低的临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在水中能自组装形成胶束，可以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。
【专利说明】
一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物及其 制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于聚合物合成及纳米材料技术领域，具体涉及一种聚丙烯酸-胱胺二盐 酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物及其制备方法，以及在抗肿瘤药物载上的应用。
【背景技术】
[0002] 目前大量的抗癌药物存在水溶性差，半衰期短，需频繁大量给药，且靶向性差产生 很多毒副作用，因此药物载体开始被广泛研究。难溶于水的药物被装载与合适的载体上，改 变药物的吸收分布等过程，将药物输送到靶器官，从而达到更好的抗癌作用。
[0003] 但是目前的抗癌化疗药物并不稳定，在到达肿瘤细胞部位之前就已经释放，导致 药物生物利用度低，副作用较大。因此研究出一种能够对细胞环境不同做出相应的刺激响 应型纳米胶束具有重大意义。根据刺激信号的不同，应激响应型纳米胶束可分为pH敏感型、 温度敏感型，酶敏感型，以及还原敏感型等类型。其中还原敏感型胶束除具有传统的"核_ 壳"结构之外，其结构中还含"S-S"键，其可对肿瘤细胞部位的高浓度还原型谷胱甘肽(GSH) 做出响应，有研究表明，细胞内的GSH可以控制细胞内氧化还原电位的变化，因而影响控制 着氧化还原刺激机制，在肿瘤部位GSH的浓度比正常细胞中药高出4倍。利用其电位变化刺 激，可用于抗癌药物的控释。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，是以 聚丙烯酸为亲水端，维生素 E琥珀酸酯为疏水端，合成聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥 珀酸酯的聚合物，该聚合物具有亲水性和对GSH还原响应性的特点，具有能够装载抗癌药 物，在水中自组装形成载药纳米胶束，用于肿瘤治疗等优势。制备方法简单、条件温和;所使 用的材料新颖，具有较低的临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在 水中能自组装形成胶束，可以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。
[0005] 本发明采用的技术方案为：
[0006] -种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素 E琥珀 酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如（I)所示：
[0007]
[0008] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，制备方法如下：
[0009] 1)胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将维生素 E琥珀酸酯溶于无水有机溶 剂中，在催化剂作用下，与胱胺二盐酸盐发生酰化反应，得到胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸 酯；
[0010] 2)聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将聚丙烯酸溶于无水有机 溶剂中，加入催化剂，搅拌至反应结束，然后向其中缓慢滴加胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸 酯溶液，至反应完成后，将反应液转移至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥，得到聚丙 烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物。
[0011] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，制备方法中所述 无水有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜;优选地，所述无水有机溶剂为无水N，N-二甲基甲酰胺。
[0012] 所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚 胺、1-羟基苯并三唑中的一种或两种以上组合。优选地，所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(Η0ΒΤ)的混合。
[0013] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，步骤1)中维生素 E 琥珀酸酯与N，N-二甲基甲酰胺的质液比g/mL为0.53:20;
[0014] 所述维生素 E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比为1:1-1:20,优选地为1: 3。
[0015] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，步骤1)中所述催 化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(Η0ΒΤ)的 混合，所述维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐投料摩尔比 为1:1-1:5，优选地为1:1.2;维生素 E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑投料摩尔比为1:1-1:5，优 选地为1:1.2。
[0016] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，步骤2)中所述催 化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(Η0ΒΤ)的 混合，所述胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐 酸盐的投料比为1:1-1:5,优选地为1:1.2;胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1-羟基苯并 三唑的投料比为1:1-1:5，优选地为1:1.2。
[0017] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，步骤2)中聚丙烯 酸中羧基与胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1:20，优选地为1:5。所述 的聚丙烯酸平均分子量为3000Da。透析袋截留分子量为lOOODa。
[0018] 所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物在作为抗肿瘤药物 载体上的应用。
[0019] 所述的应用，所述药物载体为纳米药物载体，包括胶束、微乳、微球和纳米粒中一 种或两种以上组合，所述纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合 物胶束可通过透析法，溶剂挥发法或薄膜水化超声法制备。
[0020] 所述的应用，通过透析法制备具体为:将聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸 酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含有水的烧杯中透析3-5天，透析结束后，过0.22μπι 微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束 溶液。
[0021] 所述的应用，通过溶剂挥发法制备具体为，将聚合物冻干粉末溶于四氢呋喃中，在 搅拌的条件下，将其逐滴加入含有水的烧杯中。在室温下挥发5h后，4000r/min离心10min， 得到澄清的载药纳米胶束溶液。
[0022] 所述的应用，通过薄膜水化超声法制备具体为，将聚合物冻干粉末加入甲醇溶解， 旋蒸除去甲醇，加入水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处理2min，超声脉冲开2s，停 2s，然后将所得胶体溶液过0.22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E 琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
[0023] -种抗癌药物，选自抗肿瘤基因、蛋白，更优选地选自索拉非尼。紫杉醇、羟基喜树 碱、姜黄素、小檗碱及其组合。
[0024]本发明具有以下有益效果：
[0025] 本发明用含有二硫键的胱胺二盐酸盐对维生素 Ε琥珀酸酯进行修饰，并将其作为 疏水段，与亲水性聚丙烯酸结合，得到的聚丙烯酸胱胺二盐酸盐维生素 Ε琥珀酸酯聚合物具 有亲水性和对GSH还原响应性的特点。以期作为一个优良的抗肿瘤药物载体。且具有较低的 临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在水中能自组装形成胶束，可 以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。
[0026] 本发明通过在聚丙烯酸分子上接枝亲脂性的维生素 Ε琥珀酸酯，对其进行疏水性 改造，合成了聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物。该聚合物在水溶液中可自 组装成为具有核-壳结构的纳米粒，并在内核包载难溶性的抗癌药物，以增加药物的溶解度 并改善其体内分布。
[0027] 本发明制备方法的优点在于合成工艺简单、条件温和;所使用的材料具有良好的 生物相容性和生物可降解性，而且材料中含有二硫键，因为肿瘤细胞中谷胱甘肽GSH含量高 于正常细胞，因此对正常细胞不产生作用，但对谷胱甘肽GSH含量较高的肿瘤细胞敏感，因 此纳米粒具有良好的稳定性。并且提高了治疗的安全性和有效性。
[0028]聚丙烯酸为一种生物黏附性材料，黏附性来自羧基与黏膜之间的相互作用。利用 聚丙烯酸作为纳米载体材料一方面能促进药物的口服吸收，另一方面聚丙烯酸作为亲水性 材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
[0029] 维生素 Ε琥珀酸酯是天然维生素 Ε的衍生物。其对肿瘤细胞有显著的杀伤作用，而 对正常细胞没有明显的毒性作用。已有相关文献报道维生素 Ε琥珀酸酯能诱导人淋巴瘤的 凋亡，随后也发现其能选择性的人乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞生长。可将肿瘤细胞周 期阻断在G1期，且能一直肿瘤细胞的增殖和分化，遏制肿瘤细胞DNA的合成，增加转移生长 因子iKTGF-β)的分泌与活化并使TGF-βΙΙ型受体表达增加，还可诱导肿瘤细胞凋亡。维生素 Ε琥珀酸酯是一种亲脂性良好的物质，因此可将其作为纳米载体的疏水段。
[0030] 胱胺二盐酸盐结构中含有二硫键，其应用于聚合物合成中具有如下优势，一方面， 可以作为维生素 Ε琥珀酸酯与聚丙烯酸连接的桥链。另一方面，胱胺二盐酸盐结构中的二硫 键，对谷胱甘肽较敏感，而肿瘤细胞内的GSH量又会比正常细胞的多。又可稳定纳米胶束。
【附图说明】
[0031] 图1为实施例1制备的胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯的核磁共振氢谱；
[0032] 图2为实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物的核磁共 振氢谱；
[0033] 图3为实施例5制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯纳米胶束的粒径 图；
[0034] 图4为实施例5制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯纳米胶束的透射 电镜照片；
[0035] 图5聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯纳米胶束的临界胶束浓度；
[0036] 图6载药胶束的体外释放曲线；
[0037]图7载药胶束的药代动力学曲线
【具体实施方式】
[0038] -种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素 E琥珀 酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述的聚合物具有如下的结构式：
[0039]
[0040] 该聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物的合成方法，包括如下步骤：
[0041] (1)胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将维生素 E琥珀酸酯溶于无水N，N_二 甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1_羟基苯并三 唑(Η0ΒΤ)，室温下搅拌反应2-4h，然后向其中加入胱胺二盐酸盐，三乙胺，室温下避光搅拌 反应12h，反应完成后，在搅拌的情况下，将反应液逐滴加入含有冰水的烧杯中，加入完毕后 析出白色固体，过滤，冻干后即得胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯产物。
[0042] (2)聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将聚丙烯酸溶于无水N，N- 二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，1-羟基苯并 三唑(Η0ΒΤ)，室温下搅拌反应6h，然后逐滴向其中加入胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的 N，N-二甲基甲酰胺溶液，室温下避光搅拌反应12h。反应结束后，将反应液转移至透析袋中， 室温透析3-5天，冷冻干燥得白色粉末，即聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯。
[0043] 上述合成方法中，步骤(1)所述的维生素 E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比 为1:1-1:20,优选地为1:3。维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐 酸盐(EDCI)的投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2;维生素 E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑 (Η0ΒΤ)投料摩尔比为1:1-1:5,优选地为1:1 · 2。
[0044] 步骤(2)所述的胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)的投料摩尔比为1:1-1:5,优选地为1:1.2;胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1 -羟基苯并三唑(Η0ΒΤ)的投料摩尔比为1:1 -1: 5，，优选地为1:1.2。聚丙烯酸 中的羧基与所述胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1:20,其中最优选地 为1:5。聚丙烯酸平均分子量为3000Da。透析袋截留分子量为lOOODa。
[0045] 该聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物可作为抗肿瘤药物载体。该 药物载体为纳米药物载体，任选地，所述的纳米药物载体选自胶束、微乳、微球、纳米粒及其 组合。其中纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物自组装纳米 胶束。
[0046] 上述聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束的制备方 法包括透析法，溶剂挥发法，薄膜水化超声法。
[0047] 上述聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物的自组装纳米胶束的制备 包括如下方法：
[0048] (1)透析法:聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透 析袋中，于含有1L水的烧杯中透析，透析3-5天透析结束后，过0.22μπι微孔滤膜，得到澄清的 聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
[0049] (2)溶剂挥发法:其特征是将聚合物冻干粉末溶于2mL四氢呋喃中，在搅拌的条件 下，将其逐滴加入含有20mL水的烧杯中。在室温下挥发后0.22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙 烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
[0050] (3)薄膜水化超声法:其特征是，将聚合物冻干粉末加入5mL甲醇溶解，旋蒸除去甲 醇，加入20mL水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处理2min，超声脉冲开2s，停2s，然 后将所得胶体溶液过〇.22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀 酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
[0051] 实施例1.胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯的合成
[0052] 1)将维生素 Ε琥珀酸酯(VES，0.53g，lmmol)溶于20mL无水N，N-二甲基甲酰胺中，置 于50mL圆底烧瓶中，待溶解后，依次加入1-(3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDCI，0 · 23g，1 · 2mmol)、1-羟基苯并三唑（Η0ΒΤ，0 · 18g，1 · 2mmol)，室温下搅拌反应2-4h，然 后向其中加入胱胺二盐酸盐(0.6758,3臟〇1)，11^三乙胺，室温下避光搅拌反应1211，反应完 成后，在搅拌的情况下，将反应液逐滴加入含有200mL冰水的烧杯中，加入完毕后析出白色 固体，过滤，冻干后，即得胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯溶液。
[0053]采用核磁共振氢谱确定实施例1中的化合物结构，选用溶剂为CDC13,结果如图1所 示。化学位移为6.5ppm为酰胺键中-NH-C0-中的Η，2.5ppm和3.5ppm分别为胱胺二盐酸盐中-CH2中的H，3. Oppm以下为维生素 E琥珀酸酯中的典型Η峰，因此由图1可知，实施例1合成了胱 胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯。
[0054]实施例2.聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯的合成 [0055] 2)将聚丙烯酸(0.18g，2.5mmo 1)溶于20mL无水Ν，Ν-二甲基甲酰胺中，依次加入Ι Ο-二甲基氨基丙基 ）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 化0(：1，0.1158,0.6111111〇1)，1-羟基苯并三唑 (Η0ΒΤ，0.09g，0.6mmo 1)，，室温下搅拌反应6h得混合液，然后逐滴向混合液中加入5mL胱胺 二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯(0.332g，0.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液，室温下避光搅拌 反应12h。反应结束后，将反应液转移至透析袋中，室温透析3-5天，冷冻干燥得白色粉末，即 聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯。
[0056]采用核磁共振测定1HNMR来确定实施例2中化合物的结合，采用DMS0-d6为溶剂，结 果如图2所示，化学位移0.8-1. Oppm为维生素 E琥珀酸酯中的-CH3峰，而化学位移3-3.5ppm 为聚丙烯酸中
，根据维生素 E琥珀酸酯的-CH3峰和聚丙烯酸中
积分面积之比，得出所制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物中的维生 素 E琥珀酸酯的取代度为20%。
[0057]实施例3.透析法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物纳米胶束 [0058]将实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物的反应液转 移至透析袋中，于含1L水的烧杯中透析，透析3-5天透析结束后，过0.22μπι微孔滤膜，得到澄 清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
[0059] 实施例4.溶剂挥发法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物纳米 胶束
[0060] 称取2mg实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物冻干粉 末溶于2mL四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将其逐滴加入含有20mL水的烧杯中，在室温下挥 发5h后0.22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物自 组装纳米胶束溶液。
[0061] 实施例5.薄膜水化超声法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物 纳米胶束
[0062]称取2mg实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物冻干粉 末溶于5mL甲醇溶解，旋蒸除去甲醇，加入20mL水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处 理2min，超声脉冲开2s，停2s，然后将所得胶体溶液过0.22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯 酸-胱胺二盐酸盐-维生素 Ε琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
[0063] 用Malvern Zetasizer Nano-ZS 90测定纳米粒的粒径及Zeta电位，粒径结果如图 3所示，纳米粒的平均粒径为40nm，多分散性系数Η)Ι为0.2，Zeta电位为-22mV。图4是聚丙烯 酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒经磷钨酸染色后在H-7000型透射 电镜下的观察结果。由图可以看出纳米粒呈较规整的球形，用Malvern Zetasizer Nano-ZS 90测定纳米粒的粒径及Zeta电位，粒径结果如图4所示，纳米粒的平均粒径为40nm，多分散 性系数Η)Ι为0 · 2，Zeta电位为-22mV。
[0064] 因此，本发明所制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物自组装 纳米胶束可以作为良好的疏水性抗癌药物载体，以增加药物的溶解度，改变其体内分布，提 高化疗的安全性和有效性。如本发明所合成的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯 自组装纳米粒可以成功荷载索拉非尼，HPLC测定结果表明，载药量可以达到20%以上。
[0065] 实施例6.聚合物胶束的临界胶束浓度值测定
[0066]采用芘探针法测定聚合物胶束的临界胶束浓度。取100yL的芘丙酮溶液（1 X 10-4mol/L)于9个离心管中，在氮气流下挥干丙酮，并向其中加入5mL 2X10-1，4X10-2,2X 10-2，4 X 10-3，2 X 10-3，4 X 10-4，2 X 10-4，4 X 10-5，2 X 10-5mg/mL的胶束溶液，使得芘的 最终浓度为2 X 10-6mol/L，涡旋混合lmin后，超声40min，室温下避光静置平衡24h。并应用 荧光分光光度计来测定各溶液的荧光强度。
[0067]采用芘探针法测定实施例2中所得聚合物的临界胶束浓度值。以logC为横坐标，在 芘固定激发波长334nm，发射波长在383nm和373nm下荧光强度比值为纵坐标作图。结果如图 5所示，曲线拐点处即为聚合物胶束的临界胶束浓度(CMC)值，CMC值为6.3yg/mL。
[0068]实施例7.溶剂挥发法制备载药纳米胶束溶液
[0069]称取16mg聚合物冻干粉末，8mg索拉非尼溶于2mL四氢咲喃中，在搅拌的条件下，将 其逐滴加入含有20mL水的烧杯中，在室温下挥发5h后，4000r/min离心10min，得到澄清的载 药纳米胶束溶液。
[0070] 实施例8载药胶束的体外释放
[0071] 采用透析法测定载药胶束的体外释放特征。精密量取载药胶束lmL置于透析袋中， 将其置于10mL不同浓度(OmM，2μΜ，10mM，40mM)的谷胱甘肽的pH 7.4磷酸盐缓冲液中，于37 °〇恒温振荡器中以100印111/111；[11进行透析。每批样品平行3次。分别于0.2511，0.511，111，211，411， 6h，8h，10h，12h，24h，36h，48h取样lmL，并补充lmL相应的释放介质，并将样品经过0.45μπι微 孔滤膜过滤，进液相分析测定。
[0072] 由图6可知，索拉非尼载药胶束的药物体外释放具有一定的谷胱甘肽浓度依赖性， 其浓度越大，药物累积释放量越多。且药物的释放具有一定的缓释作用。
[0073]实施例9载药胶束的细胞实验
[0074]以1 X 104cells/孔的密度将Hela细胞接种到96孔培养板中，培养24h待细胞贴壁 后，弃去培养液，在每孔中分别加入等浓度的索拉非尼和实施例4的载药胶束lOOyL(实验 组），以只加培养液作为空白对照组，分别于细胞培养箱中培养24h，再向每孔中加入MTT10μ L，培养4h，吸出培养液，向每孔中分别加入100yL DMS0，在590nm下用酶标仪检测每孔的吸 光度值(0D)，细胞存活率公式如下：
[0075] Cell viability(%)=0D(空白组)_0D(实验组)/0D(空白组）X100%
[0076] 其中索拉非尼的IC5Q值为70ymol/L，载药胶束的IC5Q为30ymol/L，空白材料没有毒 性。
[0077] 实施例10载药胶束的大鼠体内药动学研究
[0078] 雄性大鼠12只，随机分为2组，给药前禁食12h，分别尾静脉注射给予索拉非尼溶液 剂（SFN-Sol)和实施例4所制备的载药胶束（SFN-NP)，分别于0.083h，0.16h，0.25h，0.5h， lh，2h，4h，6h，8h，10h，12h，24h 眼眶取血 0.2mL 于肝素管中，14000r/min，离心 10min，取上清 100yL并加入15yL内标(瑞格非尼）加入300yL乙腈，祸旋3min，混勾后于14000r/min,离心 10min，取上清进液相分析。所测定的药时曲线如图7所示。由图7可知:给予索拉非尼载药胶 束后，与索拉非尼溶液相比，延长了索拉非尼的体内循环时间，而且显著增加了其血药浓 度，更好地提高了药效。
【主权项】
1. 一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，该聚合物是维 生素 E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如（I)所示：2. 如权利要求1所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，制备方法如下： 1) 胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将维生素 E琥珀酸酯溶于无水有机溶剂中， 在催化剂作用下，与胱胺二盐酸盐发生酰化反应，得到胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯； 2) 聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的合成:将聚丙烯酸溶于无水有机溶剂 中，加入催化剂，搅拌至反应结束，然后向其中缓慢滴加胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯溶 液，至反应完成后，将反应液转移至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥，得到聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物。3. 如权利要求2所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，制备方法中所述无水有机溶剂为无水N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜;所述催化剂 为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑中 的一种或两种以上组合。4. 如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，步骤1)中维生素 E琥珀酸酯与N，N-二甲基甲酰胺的质液比g/mL为0.53:20;所述维生 素 E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比为1:1-1:20。5. 如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，步骤1)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯 并三唑的混合;维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐投料摩 尔比为1:1-1:5,维生素 E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑投料摩尔比为1:1-1: 5。6. 如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，步骤2)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯 并三唑的混合;胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺盐酸盐的投料比为1:1-1:5,胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑的投料 比为 1:1-1:5。7. 如权利要求2所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物，其特征 在于，步骤2)中聚丙烯酸中羧基与胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1: 20 〇8. 如权利要求1所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物在作为 抗肿瘤药物载体上的应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物载体为纳米药物载体，包括胶束、微 乳、微球和纳米粒中一种或两种以上组合;所述纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐- 维生素 E琥珀酸酯聚合物胶束可通过透析法，溶剂挥发法或薄膜水化超声法制备。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，通过透析法制备具体为:将聚丙烯酸-胱胺 二盐酸盐-维生素 E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含有水的烧杯中透析3-5 天，透析结束后，过〇. 22μπι微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素 E琥珀酸 酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
【文档编号】A61K47/32GK105884942SQ201610330806
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】陈立江, 刘宇, 杨佳, 王欣, 刘举
【申请人】辽宁大学