雷公藤内酯甲的提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种雷公藤内酯甲的提取方法，其以雷公藤植株的根心、根皮、茎和叶为原料，经粉碎、浸泡、渗漉、萃取、硅胶柱层析分离纯化、重结晶等多个步骤，可提取得到纯度达99%以上的雷公藤内酯甲，得率为万分之一，比现有文献报道的提取工艺提高10?20倍，是一种大量获得雷公藤内酯甲的有效方法，可为阐明雷公藤中的化学成分、药理作用等研究提供物质基础和科学依据。
【专利说明】
雷公藤内酯甲的提取方法
技术领域
[0001] 本发明属于中医药研究技术领域，具体涉及一种雷公藤内酯甲的提取方法。
【背景技术】
[0002] 雷公藤（TrijOteiii? ri71forc/ii Hook.f)系卫矛科雷公藤属植物，以全根或去 皮根木质部入药。雷公藤具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结、祛风除湿、杀虫止血的作用， 临床用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肾炎、强制性脊柱炎等，但其有大毒，且其 临床有效剂量与中毒剂量相近，这使雷公藤的全药应用至今未能得到广泛推广。为了充分 发挥雷公藤的药用功效，国内外学者已从雷公藤属植物中分离出几十种化学成分，主要有 二萜、三萜、倍半萜、生物碱、苷类、糖类和醇类等。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种雷公藤内酯甲的提取方法，其所得雷公藤内酯甲的纯 度高、产量大，可为雷公藤内酯类化合物的化学结构、药理作用等研究提供物质基础。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种雷公藤内酯甲的提取方法，其包括以下步骤： 1) 将雷公藤粉碎，过20目筛，加其重量5倍体积的乙醇浸泡24h后进行渗漉，然后将渗漉 液合并、浓缩至原体积1/10，得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1在所得乙醇浓缩液中加水混合后，再按体积比1:1.5加乙酸乙酯，萃取 4-6次，然后将萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、浓缩，经微波干燥制得干粉； 3) 将所得干粉加等体积三氯甲烷溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，以三氯甲烷作为 洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并 含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后微波干燥，得粗提干粉； 4) 将所得粗提干粉加等体积乙酸乙酯溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，将乙酸乙酯 与石油醚按体积比1:9混合作为洗脱剂进行洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用 TLC对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重结晶3-5次，得无 色针状结晶，即为雷公藤内酯甲(Wilforlide A)。
[0005] 步骤1)所述雷公藤采用雷公藤植株的根心、根皮、茎和叶。
[0006] 步骤1)中用雷公藤重量28-30倍体积的乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次， 浓缩至干，加 lmL三氯甲烷溶解后采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止渗漉。
[0007] 步骤2)中每次萃取需振摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙酯溶液浓缩，采用TLC 对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止萃取。
[0008] 步骤2)所述微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为 20min〇
[0009] 步骤3)中干粉与硅胶柱层析所用硅胶的重量比为1:120;采用湿法上柱。
[0010] 步骤3)所述微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60°C，干燥时间为 10min〇
[0011] 步骤4)中粗提干粉与硅胶柱层析所用硅胶的重量比为1:80;采用湿法上柱。
[0012] 所得雷公藤内酯甲的结构式为：
无色针状结晶，mp 319-321°C，Liebermanin_Burchard反应阳性(反应紫红色），分子 式〇3〇1146〇3，]^，111/2:454(]\1+)，439,436,421，410,246(基峰），231，228,218,213,208,207， 203,201，190，185，175，159，147，145，133，120，119，107,55<aH-NMR(CDCl3,400MHz):0.79 (3H，S，H-24)，0.87(3H，S，H-28)，0.93(3H，S，H-26)，0.94(3H，S，H-25)，0.99(3H，S，H-23), 1.08(3H，S，H-27)，1.21(3H，S，H-30)，3.22(lH，dd，J=11.7， 4.9Hz，H-3)4.15(lH，d，J= 5.4泡，11-22)，5.30(111，^=3.3抱，11-12)。 13(：-匪1?(〇)(：13，100抱）：38.6((：-1)，27.3((：-2)， 78.9(C-3)，38.9(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，33.3(C-7)，39.6(C-8)，47.5(C-9)，37.1(C-10)，23 ? 6(C-10)，124 ? 7(C-12)，140.3(C-13)，42.5(C-14)，24.3(015)，24.1(016)35.3 (C-17)，39 ? 8( (C-18)，43 ? 5(C-19)，39.3(020)，33.9(021)，83.1(022)，28 .l((C-23)， 15.6(C-24)，15.7(C-25)，17.0(C-26)，25.3(C-27)，24.9(C-(C-28)，182.5(C-29)，21.0(C-30)。IR(cm-b :3500，2980，2950，2900，1760，1658，1490，1460，1380，1180，1100，956。
[0013]本发明的显著优点在于:按本发明方法制得的雷公藤内酯甲纯度可达99%以上，得 率为万分之一，比现有文献报道的提取工艺提高10-20倍，是一种大量获得雷公藤内酯甲的 有效方法，所提取的雷公藤内酯甲已被中国食品药品检定研究院用于作为雷公藤内酯甲的 标准品，这不仅说明了该方法的高效性和科学性，也为雷公藤中化学成分、药理作用等研 究，雷公藤临床应用及雷公藤系列药品质量控制提供了物质基础和科学依据。
【具体实施方式】
[0014] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0015] 实施例1 1) 将1 Okg含根、茎、叶的雷公藤植株粉碎，过20目筛，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按28 L/kg量缓慢加入乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次，浓缩至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止渗漉，然后将渗漉液合并、 浓缩至原体积1/10,得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1在所得乙醇浓缩液中加水混合后，再按体积比1:1.5加乙酸乙酯进行萃 取，每次萃取需振摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙酯溶液浓缩，采用TLC对其进行定性 检测，萃取4次后检测萃取液为阴性，停止萃取，然后将萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、浓 缩，经微波干燥制得干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间 为20min; 3) 将所得干粉加等体积三氯甲烷溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，干粉与柱层析所 用硅胶的重量比为1:120,湿法上柱，以三氯甲烷作为洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集 一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为 lOmin； 4) 将所得粗提干粉加等体积乙酸乙酯溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，粗提干粉与 柱层析所用硅胶的重量比为1:80,湿法上柱，将乙酸乙酯与石油醚按体积比1:9混合作为洗 脱剂进行洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含 有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重结晶3次，得 1.09g雷公藤内酯甲的无色针状结晶，其纯度为99.00%。
[0016] 实施例2 1) 将1 Okg含根、茎、叶的雷公藤植株粉碎，过20目筛，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按29 L/kg量缓慢加入乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次，浓缩至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止渗漉，然后将渗漉液合并、 浓缩至原体积1/10,得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1在所得乙醇浓缩液中加水混合后，再按体积比1:1.5加乙酸乙酯进行萃 取，每次萃取需振摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙酯溶液浓缩，采用TLC对其进行定性 检测，萃取5次后检测萃取液为阴性，停止萃取，然后将萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、浓 缩，经微波干燥制得干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间 为20min; 3) 将所得干粉加等体积三氯甲烷溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，干粉与柱层析所 用硅胶的重量比为1:120,湿法上柱，以三氯甲烷作为洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集 一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为 lOmin； 4) 将所得粗提干粉加等体积乙酸乙酯溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，粗提干粉与 柱层析所用硅胶的重量比为1:80,湿法上柱，将乙酸乙酯与石油醚按体积比1:9混合作为洗 脱剂进行洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含 有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重结晶4次，得 1.02g雷公藤内酯甲的无色针状结晶，其纯度为99.31%。
[0017] 实施例3 1)将1 Okg含根、茎、叶的雷公藤植株粉碎，过20目筛，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按30 L/kg量缓慢加入乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次，浓缩至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止渗漉，然后将渗漉液合并、 浓缩至原体积1/10,得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1在所得乙醇浓缩液中加水混合后，再按体积比1:1.5加乙酸乙酯进行萃 取，每次萃取需振摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙酯溶液浓缩，采用TLC对其进行定性 检测，萃取6次后检测萃取液为阴性，停止萃取，然后将萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、浓 缩，经微波干燥制得干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间 为20min; 3) 将所得干粉加等体积三氯甲烷溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，干粉与柱层析所 用硅胶的重量比为1:120,湿法上柱，以三氯甲烷作为洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集 一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为 lOmin； 4) 将所得粗提干粉加等体积乙酸乙酯溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，粗提干粉与 柱层析所用硅胶的重量比为1:80,湿法上柱，将乙酸乙酯与石油醚按体积比1:9混合作为洗 脱剂进行洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并含 有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重结晶5次，得 0.99g雷公藤内酯甲的无色针状结晶，其纯度为99.48%。
[0018]按本发明方法制得的雷公藤内酯甲的纯度可达99%以上，得率为万分之一，比现有 文献报道的提取工艺提高10-20倍，是一种大量获得雷公藤内酯甲的有效方法，可为阐明雷 公藤中的化学成分、药理作用等研究提供物质基础和科学依据。
[0019]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与 修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1. 一种雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:包括以下步骤： 1) 将雷公藤粉碎，过20目筛，加其重量5倍体积的乙醇浸泡24h后进行渗漉，然后将渗漉 液合并、浓缩至原体积1/10，得乙醇浓缩液； 2) 按体积比1:1在所得乙醇浓缩液中加水混合后，再按体积比1:1.5加乙酸乙酯，萃取 4-6次，然后将萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、浓缩，经微波干燥制得干粉； 3) 将所得干粉加等体积三氯甲烷溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，以三氯甲烷作为 洗脱剂进行洗脱，每500mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用TLC对浓缩液进行定性检测，合并 含有相同成分的浓缩液，回收溶剂后微波干燥，得粗提干粉； 4) 将所得粗提干粉加等体积乙酸乙酯溶解后，采用硅胶柱层析进行分离，将乙酸乙酯 与石油醚按体积比1:9混合作为洗脱剂进行洗脱，每200mL洗脱液收集一份，经浓缩后采用 TLC对浓缩液进行定性检测，合并含有相同成分的浓缩液，回收溶剂至干，得精提物； 5) 将所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重结晶3-5次，得无 色针状结晶，即为所述雷公藤内酯甲。2. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤1)所述雷公藤采用 雷公藤植株的根心、根皮、茎和叶。3. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤1)中用雷公藤重量 28-30倍体积的乙醇进行渗漉，渗漉液每500mL收集一次，浓缩至干，加 lmL三氯甲烷溶解后 采用TLC对其进行定性检测，直至检测为阴性时停止渗漉。4. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤2)中每次萃取需振 摇20次，每次萃取后将收集的乙酸乙酯溶液浓缩，采用TLC对其进行定性检测，直至检测为 阴性时停止萃取。5. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤2)所述微波干燥的 功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为20min。6. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤3)中干粉与硅胶柱 层析所用硅胶的重量比为1:120;采用湿法上柱。7. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤3)所述微波干燥的 功率为500W，频率为2450MHz，温度为60 °C，干燥时间为lOmin。8. 根据权利要求1所述雷公藤内酯甲的提取方法，其特征在于:步骤4)中粗提干粉与硅 胶柱层析所用硅胶的重量比为1:80;采用湿法上柱。
【文档编号】C07J71/00GK105968168SQ201610611187
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年7月30日
【发明人】林绥, 阙慧卿, 钱丽萍
【申请人】福建省医学科学研究院