一种复合促生菌剂及其在蔬菜生防中的应用
【专利摘要】本发明公开一种复合促生菌剂及其在蔬菜生防中的应用，将含有芽孢杆菌20?40份，灰色链霉菌20?50份，多脂鳞伞5?15份，高山被孢霉5?15份，柱状黄杆菌5?15份,斯氏假单胞菌5?15份,沼泽红假单胞菌20?40份和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌40?60份制备复合促生菌，吸附于载体种植蔬菜根茎基质粉碎物，辅料为尿素和过磷酸钙，其中尿素与过磷酸钙的重量比为1:3；载体和辅料的重量比为1:2；将蔬菜根茎基质粉碎成段状，加水至含水量40?70%，然后按体积比每立方米加入复合菌液100?300g，混合均匀在20?40℃下密封堆制固体发酵制备获得。通过在作物、蔬菜中应用具有显著突出的促生作用。CGMCC No. 649220120903
【专利说明】
一种复合促生菌剂及其在蔬菜生防中的应用
技术领域
[0001]本发明涉及农业微生物应用技术领域，具体说，本发明涉及一种复合促生菌剂及其在对蔬菜促生协同作用中的应用技术领域。【背景技术】
[0002]内生菌普遍存在于植物体内，与宿主形成和谐的共生体，产生大量次生代谢活性物质。据报道，内生菌可增强宿主的抗病性、提高植物的生产力、抗逆抗虫、具有除草剂活性等特性。因此，内生菌可作为生物促生中有潜力的因子，在生态农业和生物农药研制方面具有重要的用途。植物内生细菌(jSflc/OjOAjtic Aactefla)可通过不同途径促进其宿主植物生长，其作用与植物根围细菌相似(PGP R )，植物根围促生细菌(朽a/31 gro r tA -joroff1 t i/3貧 rAizo/?acteria，简称PGPR)，生存于植物根际、根表，能够直接或间接地促进或调节植物以及作物生长。植物内生细菌能固定大气中的氮供给其宿主植物利用;合成铁载体能够溶解并吸收土壤中铁供给其宿主植物利用;合成植物激素促进植物不同生长阶段的生长，具有溶解矿物质如磷的机制，使其更有利于植物利用；作用于生长有关的酶使其调节植物的生长发育。
[0003]人们对植物根际促生菌的应用已有数百年的历史，为豆科植物接种根瘤菌剂其实就是对根际促生菌的应用，这项技术在一百多年前就已经为人们所应用，并在世界范围内对农作物产量产生了重大影响。20世纪30年代以来，许多学者都发现在植物根际范围内生存着许多细菌，它们在生长代谢过程中，会通过某种途径促进植物生长，例如，东欧地区曾大规模的在田间联合接种非共生细菌，如固氮菌和芽孢杆菌，开启了人们深入研究促生菌的历史。近些年来，随着人们对根际促生菌研究的深入和重视，越来越多的促生菌被筛选和应用到科研和生产中，并逐步深入到对促生菌作用机制、生理效应、制剂产品的研究。人们对应用微生物来代替化肥和农药寄予了很大的希望。
【发明内容】
[0004]针对现有技术中复合菌剂及其在蔬菜促生中的应用研究现状，本发明旨在提供一种复合促生菌剂及其在蔬菜生防中的应用，通过采用本发明提供的复合促生菌剂，通过对黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜验证试验可知具有突出的促生作用，获得良好的技术效果， 作为防治蔬菜拮抗菌具有广泛而适用的价值。
[0005]本发明采用主要的技术方案:通过选用以芽孢杆菌为主的多种促生菌，通过将选用的不同促生菌优化组合制备复合促生菌剂，通过对黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得显著突出的技术效果，作为防治蔬菜拮抗菌具有广泛的应用价值。
[0006] 本发明具体提供一种复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)20-40份灰色链霉菌(5^1"印to野ces griset/s)20-50份，多脂鱗伞(/%o_/1ta ac/ijDosa)5-15份，高山被抱霉(i/brtiere_/_/a a_/j〇i/3a)5-15份，柱状黄杆菌(/^/araAacteri?備are)5_15份，斯氏假单胞菌(Z^et/c/o/moas stt/tzeri) 5-15份，沼泽红假单胞菌(7?Aoc/osec/oset/c/o_ffl〇t/as j〇ac/t/st_ris) 20-40份和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(5t/i姑o_/c/e_ria g_/ac/1_/i)CGMCC N0.6492 的40-60份，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。
[0007]同时，本发明提供利用上述提供的复合促生菌剂制备的微生物肥料。配伍后的复合菌液充分吸附于载体;载体为种植蔬菜根茎基质粉碎物，颗粒大小为l_30mm;辅料为尿素和过磷酸钙，其中尿素与过磷酸钙的重量比为1:3;载体和辅料的重量比为1:2;将蔬菜根茎基质粉碎成l_30mm的段状，加水至含水量40-70%，然后按体积比每立方米加入复合菌液 100-300g，并混合均匀，在空气温度20-40°C下密封堆制固体发酵制备获得。
[0008]本发明通过提供将制备的一种复合促生菌剂在蔬菜促生中的应用，对黄瓜、番茄、 辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果。
[0009]进一步，本发明利用复合促生菌剂制备的微生物肥料在蔬菜促生中的应用，对黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜中应用具有显著突出的促生作用，获得良好的技术效果。
[0010]本发明中，所选用的芽孢杆菌(5aciDus S/7.)、灰色链霉菌(?St1-ejDtoffijces griset/s)、多脂鱗伞(/%o_/1ta ac/ijDosa)、高山被抱霉(i/b_rtie_re_/_/a a_/j〇i/3a)、柱状黄杆菌 (/^/araAacteri? co_/t?zmare)、斯氏假单胞菌(Pset/c/off1flas stt/tzeri)、沼泽红假单胞菌 (7?Aoc/osec/oset/c/c_t/as jOac/ustris)都为常见的菌种，本领域普通技术人员可以通过公众渠道获得。
[0011]本发明采用的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(^/rMWc/eria Wac/iWi)，菌株编号为 LJ20。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编:1〇〇1〇1。保藏日期是2012年9月3日，保藏号是CGMCC N0.6492。经微生物学鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(j9t/rlAo2c/eria g^ac/1ii)。该菌株最适生长条件为:温度35°C，培养基采用固体LB培养基，培养条件:pH 7.0,时间16h;菌落中等大小、扁平，表面干燥、有褶皱，边缘整齐，不透明；显微观察其菌体呈短杆状，芽孢中生，不膨大;依照第九版《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》jWkoua』〇/ 5>ste?atic fecter1-如灯》)和《常用细菌系统鉴定手册》对LJ20菌株进行形态学测定，生理生化检测确定LJ20菌株为克霍尔德氏菌属(及/r处o^c/eria)中的成员。通过BLAST同源比对，菌株LJ20的16S rDNA 序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后，构建系统进化树，该菌株LJ20与Wac/iWi AY268167处于最小分支，是其近似种;进而将该菌株LJ20确定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia glad1li)。[〇〇12]本发明进一步提供了菌种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌Wac/iWi) CGMCC N0.6492的保存条件，采用LB培养基成分:蛋白胨1%(W/V)，酵母膏0.5%(W/V)，氯化钠1% (W/V)，琼脂2%(W/V)，pH 7.0，121°(:灭菌30分钟。1^培养基培养条件:在其1^培养基斜面上35° C条件下，培养16小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存;平时使用保存在LB培养基的斜面上，4° C冰箱保存备用。
[0013]本发明采用的上述菌种发酵液的制备方法及其在制备过程中选用的培养基及培养条件都为本领域常见和熟知。
[0014]通过实施本发明具体的
【发明内容】
，可以达到以下有益效果:本发明具体提供一种复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)20-40份灰色链霉菌(?StrejDtoffijces griset/s)20-50份，多脂鱗伞(/%o_/1ta ac/ijDosa)5-15份，高山被抱霉 (i/b_rtie_re_/_/a a_/j〇i/3a)5-15份，柱状黄杆菌(/^/araAacte1-1? co_/t/備a_re)5_15份，斯氏假单胞菌(Z^et/c/off1flas stt/tzeri) 5-15份，沼泽红假单胞菌(7?Aoc/osec/oset/c/o_ffl〇t/as j〇ac/t/st_ris) 20-40份和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(5t/i姑o_/c/e_ria g_/ac/1_/i)CGMCC N0.6492 的40-60份菌液分别制备菌液混合获得。通过利用复合促生菌剂及提供的制备的微生物肥料在蔬菜促生中的应用，对黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜中应用具有显著突出的促生作用，获得良好的技术效果。【具体实施方式】
[0015]
[0016]下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
[0017] 本发明采用的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌Wac/iWi)，菌株编号为 LJ20。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编:1〇〇1〇1。保藏日期是2012年9月3日，保藏号是CGMCC N0.6492。经微生物学鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(j9t/rlAo2c/eria g^ac/1ii)。该菌株最适生长条件为:温度35°C，培养基采用固体LB培养基，培养条件:pH 7.0,时间16h;菌落中等大小、扁平，表面干燥、有褶皱，边缘整齐，不透明；显微观察其菌体呈短杆状，芽孢中生，不膨大;依照第九版《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》jWkoua』〇/ 5>ste?atic fecter1-如灯》)和《常用细菌系统鉴定手册》对LJ20菌株进行形态学测定，生理生化检测确定LJ20菌株为克霍尔德氏菌属(及/r处o^c/eria)中的成员。通过BLAST同源比对，菌株LJ20的16S rDNA 序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后，构建系统进化树，该菌株LJ20与Wac/iWi AY268167处于最小分支，是其近似种;进而将该菌株LJ20确定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia glad1li)。[〇〇18] 本发明进一步提供了菌种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌从o^c/eria CGMCC N0.6492的保存条件，采用LB培养基成分:蛋白胨1%(W/V)，酵母膏0.5%(W/V)，氯化钠1% (W/V)，琼脂2%(W/V)，pH 7.0，121°(:灭菌30分钟。1^培养基培养条件:在其1^培养基斜面上35° C条件下，培养16小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存;平时使用保存在LB培养基的斜面上，4° C冰箱保存备用。
[0019]本发明中选用的所有菌种和原辅材料，以及选用的菌种培养条件和方法都为本领域熟知选用的，本发明中涉及到的%都为重量百分比，除非特别指出除外。
[0020]实施例一:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌(jfeciDus Sj〇.)20公斤，灰色链霉菌(?StrejDtoffijces griset/s)20公斤，多脂鱗伞(/%o_/1ta ac/ijDosa)5公斤，高山被抱霉(i/brtiere_/_/a a_/j〇i/3a) 5公斤，柱状黄杆菌(/773 7〇/73(^61^"?(^〇_/"備31'6)5公斤，斯氏假单胞菌(/?56"0?〇?〇/335 stt/tzeri) 5公斤，沼泽红假单胞菌(7?Aoc/osec/oset/c/c_t/as j〇ac/t/stris) 20公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(执/rAAo_/c/eria g_/ac/1_/i)CGMCC N0.6492的40公斤，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。[〇〇21]实施例二:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)40公斤，灰色链霉菌50公斤，多脂鱗伞[a a15公斤，高山被抱霉d_r[ie_re_/_/a 15公斤，柱状黄杆菌(Wac6>_/M?/]are) 15公斤，斯氏假单胞菌{Pseudomonas stutzeri) 15^jr,{Rhodosedoseudomouas padustris)40公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(j9orA/?6>_Weria Wad1hOCGMCC N0.6492的60公斤，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。[〇〇22]实施例三:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)30公斤，灰色链霉菌 ^ri*sew*s)40公斤，多脂鱗伞a^i/76>*sa)10公斤，高山被抱霉d_r[ie_re_/_/a 10公斤，柱状黄杆菌(Wa10公斤，斯氏假单胞菌{Pseudomonas stutzeri) 10^jr*,{Rhodosedoseudomouas padustris)30公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(j9orA/?6>_Weria f/ad1hOCGMCC N0.6492的50公斤，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。
[0023]实施例四:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)25公斤，灰色链霉菌 ^ri*sew*s)45公斤，多脂鱗伞a(^i/76>*sa)6公斤，高山被抱霉14公斤，柱状黄杆菌(/7/^6>/^(^虹〗训？(^6>_/腫/^作)12公斤，斯氏假单胞菌(/^仙(^6>肌咖*5 *s totoeri) 14公斤，沼泽红假单胞菌/7a^*s^ri*s) 35公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌r/ad1hOCGMCC N0.6492的55公斤，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。[〇〇24]实施例五:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)25公斤，灰色链霉菌 ^ri*sew*s)48公斤，多脂鱗伞adi/76>*sa)14公斤，高山被抱霉d_rfie_re_/_/a 公斤，柱状黄杆菌(Wa15公斤，斯氏假单胞菌{Pseudomonas stutzeri) jr , WiW^L\^^-M^{Rhodosedoseudomouas padustris) 25公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(及/rAAWeria Wad1hOCGMCC N0.6492的40公斤菌液分别制备菌液混合获得。
[0025]实施例六:复合促生菌剂的制备复合促生菌剂，含有芽孢杆菌印.)35公斤，灰色链霉菌 ^ri*sew*s)45公斤，多脂鱗伞a^i/76>*sa)10公斤，高山被抱霉d_r[ie_re_/_/a 公斤，柱状黄杆菌(Wa15公斤，斯氏假单胞菌{Pseudomonas stutzeri) 5公斤，WiW^L\^^M^{Rhodosedoseudomouas padustris)^Q 公斤和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌f/ad1hOCGMCC N0.6492的60公斤，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。
[0026]实施例七:利用复合促生菌剂制备微生物肥料利用上述实施例一至实施例六提供的复合促生菌剂制备的微生物肥料。配伍后的复合菌液充分吸附于载体;载体为种植蔬菜根茎基质粉碎物，颗粒大小为l-30mm;辅料为尿素和过磷酸钙，其中尿素与过磷酸钙的重量比为1:3;载体和辅料的重量比为1:2;将蔬菜根茎基质粉碎成l_30mm的段状，加水至含水量40-70%，然后按体积比每立方米加入复合菌液100-300g，并混合均匀，在空气温度20-40°C下密封堆制固体发酵制备获得。
[0027]实施例八:在辣椒、花生、水稻和番茄上进行6个微生物肥料的田间试验，结果表明:施用上述实施例提供的微生物肥料可使花生和辣椒的氮肥用量降低20%，磷肥用量降低50%，并使花生和辣椒产量比常规施肥最高增加7.5%和20%;在水稻栽培中，当N、P、K用量各降低 17%时，3个微生物肥料能使水稻产量略有增加；番茄栽培，N、P、K用量比常规施肥各降低30.7%，42.4%，50%时，番茄产量最高可增加27% ;在无公害辣椒栽培中，施用微生物肥料可以替代40%的有机肥，并且产量比常规施肥最高增加28%。同一微生物肥料针对不同作物会出现增产或减产2种相反的结果，应针对不同作物研发相应的专用微生物肥料。[〇〇28]1.1供试材料上述实施例七提供含有不同功能菌株的6个微生物肥料:试验样1;试验样2;试验样 3;试验样4;试验样5;试验样6。
[0029]1.2试验方法试验设6个微生物肥料处理，1个常规施肥处理，共7个处理。3次重复，随机区组排列。
[0030]1.2.1辣椒试验:以常规施肥，即腐熟厩肥45000 kg / hm2，尿素300 kg/hm2,重过磷酸钙150 kg / hm2作对照，在施用与对照等量的厩肥时，6个微生物肥料各添加尿素240 kg/ hm2，重过磷酸|丐75 kg/ hm2作处理。微生物肥料用量300 kg/ hm2。 [〇〇31]1.2.2无公害辣椒试验:以常规施肥，即腐熟厩肥35700 kg / hm2，牛粪71400 kg/ hm2，重过磷酸|丐195 kg/ hm2作对照；在施用腐熟厩肥21450kg/ hm2，牛奠 45000 kg/ hm2时，6个微生物肥料各添加过磷酸妈90 kg/ hm2作处理。微生物肥料用量 300 kg/ hm2〇[〇〇32]1.2.3花生试验:以常规施肥，即腐熟厩肥30000 kg / hm2，尿素150 kg/hm2,重过磷酸钙160.5 kg/ hm2作对照，在施用与对照等量的厩肥时，6个微生物肥料各添加尿素120 kg/ hm2，重过磷酸|丐81 kg/ hm2作处理。小区面积2.8 mX 4m。微生物肥料用量300 kg/ hm2。[〇〇33]1.2.4水稻试验:以常规施肥，即腐熟芝麻饼肥300 kg/ hm2,烤烟专用肥(N:P205:K20= 10:10:20) 450 kg/ hm2，移栽 1 个月后追施K2SO4 90 kg/hm2，KN〇3 15 kg/ hm2作对照，在施用与对照等量的饼肥时，6个微生物肥料各添加水稻专用肥375 kg/ hm2,追肥同对照作处理。小区面积66.7 m2。微生物肥料用量225 kg/ hm2。[〇〇34]1.2.5番茄试验:以常规施肥，即尿素405kg/ hm2,磷酸二铵390 kg / hm2，硫酸钾450 kg/hm2作对照，供试的6个微生物肥料处理，化肥用量均为尿素300 kg / hm2，磷酸二铵225 kg / hm2,硫酸钾225 kg/ hm2。小区面积4 mX 2.7 m。微生物肥料用量300 kg/ hm2。
[0035]2试验结果2.1辣椒田间试验该试验设计是施用微生物肥料的6个处理较辣椒常规施肥降低氮肥用量20%，降低磷肥用量50%。试验结果显示:施用微生物肥料试验样2和试验样4的处理，辣椒产量为11429 kg / hm2和12107 kg/ hm2，分别比常规施肥辣椒增产13%和20%。其他处理较对照均有减产，幅度在5% - 10.7%。初步试验表明，试验样3和试验样1两个微生物肥料，可以降低辣椒栽培的化肥施用量，并具有良好的增产效果。[〇〇36]2.2无公害辣椒田间试验该试验6个微生物肥料处理厩肥和牛粪用量较无公害辣椒常规施肥各降低40%，重过磷酸钙和硫酸铵用量与对照相同。试验结果显示:施用微生物肥料试验样1和试验样2 处理的辣椒产量较常规施肥分别增产15%和28%，试验样3处理比对照略有增产，其他3 个微生物肥料处理较对照减产7%?10%。初步试验表明，微生物肥料试验样1和试验样2 在无公害辣椒生产中具有降低有机肥用量和增加产量的双重作用。[〇〇37]2.3花生田间试验该试验6个微生物肥料处理尿素和重过磷酸钙用量较花生常规施肥对照分别降低20% 和50%。试验结果显示:微生物肥料试验样6处理花生产量较对照增产7.5%，处理试验样1和试验样3较对照增产6.7%，处理试验样4较对照略有增产，2个处理试验样5和试验样2较对照减产2%和5%。初步试验表明，3个微生物肥料试验样6、试验样1和试验样3 在花生栽培中有较好的应用效果。[〇〇38]2.4水稻田间试验该试验6个微生物肥料处理所用水稻专用化肥均比水稻常规用量降低17%。3个微生物肥料处理试验样3、试验样4和试验样5水稻产量比对照略有增加，但增产幅度极小，仅为1.6%左右，其他3个微生物肥料处理比对照略有减产，但减产幅度在5%以下。说明施用供试的6个微生物肥料替代17%的水稻化学专用肥不会对水稻产量造成大的影响。[〇〇39]2.5番茄田间试验6个微生物肥料处理较对照氮肥用量降低30.7%，磷肥用量降低42.4%，钾肥用量降低50%。从试验结果得出，试验样1处理产量较对照增加3704 kg/ hm2，增产27%，试验样4和试验样5处理分别比对照增产20%和19%，试验样3和试验样6处理分别比对照增产 15%和13%，只有试验样2处理产量较对照减产3%。说明供试的6个微生物肥料除试验样2 外均有良好的增产效果，且能大幅度降低化肥的施用量。
[0040]实施例九:通过盆栽试验，研究了上述实施例一至实施例六制备的六种不同的复合促生菌剂对土豆、黄瓜、茄子、辣椒、花生、大豆6种蔬菜根结线虫的生物防治作用。结果表明:接种上述实施例一至实施例六制备的复合促生菌剂能够降低根结级数，明显抑制根结线虫的生长，对每种蔬菜都有不能程度的防治效果。
[0041]植物寄生线虫是植物侵染性病害的重要病原物之一，其对植物造成的危害超过细菌和病毒，仅次于病原真菌。蔬菜中以番茄、土豆、黄瓜、茄子、辣椒、花生、大豆等受害较重， 由于对番茄已经进行多次田间试验，效果较好，为了研究上述实施例制备的复合促生菌剂的适用范围，把其余的6种蔬菜做为试验对象，进行盆栽试验，并对其生防效果进行比较，从而为深入研制开发上述实施例制备的复合促生菌剂及其在生产中的应用奠定基础。[〇〇42]1材料与方法1.1试验材料供试作物:土豆、黄瓜、茄子、辣椒、花生、大豆(种子站购买)。供试菌株:上述实施例制备的复合促生菌剂通过选购芽孢杆菌(BaciDus Sj0.)、灰色链霉菌(?StrejDtoffijces griset/s)、多脂鱗伞(/%o_/1ta ac/ijDosa)、高山被抱霉(i/b_rtie_re_/_/a a_/j〇i/3a)、柱状黄杆菌 (/^/araAacteri? co_/t?zmare)、斯氏假单胞菌(Pset/c/off1flas stt/tzeri)、沼泽红假单胞菌 (7?Aoc/osec/oset/c/c_t/as jOac/ustris)都为常见的菌种，本领域普通技术人员可以通过公众渠道获得，唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(及/rAAoic/eria Wac/12i)CGMCC N0.6492为
【申请人】前期获得的保藏菌种。供试线虫的采集与分离:从北票蓝旗根结线虫的发生地采样，先把病根洗净，挑取卵囊，进行孵化备用。[〇〇43]1.2盆栽试验设计每种蔬菜分别进行育苗、移栽，每种蔬菜为30棵，分别加入根结线虫2龄幼虫2 000条/ 钵。每种蔬菜设2组处理，即处理组:15棵加入上述实施例制备的复合促生菌剂发酵液10 mL/钵;对照组(00:15棵不加上述实施例制备的复合促生菌剂作为对照。各处理采取定期除草、浇水等常规管理，比较各处理组每种蔬菜的结瘤情况、土里的线虫数以及株高，干重。
[0044]1.3线虫根结级数鉴定按Benjumin D的方法进行根结分级:无根结为0级；1%?20%有根结为1级；21%?40%有根结为2级;41%?60%有根结为3级;61%?80%有根结为4级;81%?100%有根结为5级。
[0045]2结果与分析通过对照组(CK)根结线虫对每种蔬菜的根部侵染都很严重，始终是4?5级，线虫数量也和接种前变化不明显，线虫的正常死亡率也很低。但是添加了上述实施例制备的复合促生菌剂剂后(处理组)，根结级数明显下降，线虫数量也大幅度下降，从株高和干重的指标上来看，上述实施例制备的复合促生菌剂剂对每种蔬菜都有作用，株高和干重都有不同程度地提尚。
[0046]3 结论由于根结线虫病是多种蔬菜的主要根系病害，它分布广泛、危害严重、不易防治。为此， 该试验对从土壤中分离出来的上述实施例制备的复合促生菌剂对根结线虫防治的多样性进行了研究，结果表明:上述实施例制备的复合促生菌剂剂对根结线虫具有很好的生物防治效果，可以显著降低根结线虫的根结级数和2龄幼虫数量，表现出明显抑制根结线虫生长的作用。此外，还能使植物的株高和干重都有不同程度地提高，能提高植株本身的抗病能力。通过上述实施例制备的复合促生菌剂剂的研制及其防治效果的比较，确定上述实施例制备的复合促生菌剂剂对各种根结线虫的生物防治都有效果，值得进一步开发和推广应用。[〇〇47]通过上述试验验证，本发明提供的复合促生菌剂及利用复合促生菌剂制备微生物肥料在蔬菜中具有明显突出的促生作用，特别是对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果。
【主权项】
1.一种复合促生菌剂，含有芽孢杆菌(Bacillus sp.)20-40份，灰色链霉菌 (Streptomyces griseus)20_50份，多脂鱗伞(Phol1ta adiposa)5_15份，高山被抱霉 (Mortierella alpina)5_15份，柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)5_15份，斯氏假 单胞菌(Pseudomonas stutzeri) 5-15份，沼泽红假单胞菌(Rhodosedoseudomouas padustris) 20-40份和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia glad1li)CGMCC N0.6492 的40-60份，分别制备的菌液混合获得复合促生菌剂。2.—种如权利要求1所述的复合促生菌剂在蔬菜促生中的应用。3.—种复合促生菌剂制备的微生物肥料，其特征在于，使用权利要求1提供的复合促生 菌剂充分吸附于载体;载体为种植蔬菜根茎基质粉碎物，颗粒大小为l-30mm;辅料为尿素和 过磷酸钙，其中尿素与过磷酸钙的重量比为1:3;载体和辅料的重量比为1:2;将蔬菜根茎基 质粉碎成l_30mm的段状，加水至含水量40-70%，然后按体积比每立方米加入复合菌液100-300g，并混合均匀，在空气温度20-40°C下密封堆制固体发酵制备获得。4.一种如权利要求3所述的复合促生菌剂制备的微生物肥料在蔬菜促生中的应用。
【文档编号】C12R1/38GK106085918SQ201610606604
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月29日 公开号201610606604.X, CN 106085918 A, CN 106085918A, CN 201610606604, CN-A-106085918, CN106085918 A, CN106085918A, CN201610606604, CN201610606604.X
【发明人】杨蓉, 龙宣杞, 侯敏, 詹发强, 崔卫东, 杨文琦, 张峥
【申请人】新疆农业科学院微生物应用研究所