专利名称：利用t-t错配的dna探针荧光测定汞离子浓度的方法
技术领域：
本发明涉及汞离子浓度的检测分析领域，具体地涉及一种利用T-T错配的DNA探针荧光测定汞离子浓度的方法。
背景技术：
汞是一种剧毒、不能生物降解的重金属离子。环境中的汞被动植物吸收后，通过生物的富集作用和食物链的传递，最后进入人体内部，当进入血液后，将与血浆蛋白或血红细胞结合，以后主要分布到脑和肾脏，其次为肝、肠壁、心、肺等处。汞的危害突出表现在其神经毒性上，对呼吸道、消化道也有影响。当汞含量在人体体内积累到一定程度时，会导致中毒发病，严重者甚至死亡。国际食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission, CAC)规定了矿泉水中与食用盐中的汞的限量标准分别为0. 001mg/kg和 0. lmg/kg (CODEX STAN 193-1995, Rev. 2-2006)，欧盟对某些鱼类及其产品制定汞的限量标准为 lmg/kg 和 0. 5mg/kg (COMMISSION REGULATION ( EC) No 1881/2006 of 19 December 2006)。我国也制定了相应的食品卫生标准，其中食品中汞的限量最低为0. Olmg/ kg(GB 2762 -2005.食品中汞限量的卫生标准)。目前，检测总汞的仪器方法包括冷原子吸收光谱法、冷原子荧光光谱法以及ICP-MS等(Hight，et al. Food Chem. 2005, 91，557; Roulet, et al. Sci. Total Environ. 2000, 26, 143； ffuillouda, et al. Spectrochim. Acta Part B 2004, 59，755.)。但这些方法需要贵重的仪器，复杂耗时的样品处理，不适用于现场快速检测。由于DNA的结构和性能对重金属的影响非常灵敏，因而利用DNA与金属离子之间的相互作用发展高选择性、高灵敏度的重金属分析检测方法有很大的价值与意义。Gao等证明了 DNA中的鸟嘌呤可以和Cu2+特异性结合形成稳定的结构，(Y. G. Gao, M. Sriam, A. H. J. Wang, Nucleic Acid Res. 21 (1993) 4093 - 4191)并用于 Cu2+的检测中。Ono 小组首次报道了 DNA中的碱基对C-C能与Ag+特异性结合形成稳定的C- Ag+-C结构(Miyake， Y. ； Togashi, H. ； Tashiro, M. ； Yamaguchi, H. ； Oda, S. ； Kudo, Μ. ； Tanaka, Y.； Kondo, Y. ； Sawa, R. ； Fujimoto, T. ； Machinami, T. ； 0no, A. J. Am. Chem. Soc. 2006，128, 2172 - 2173.)。Dong小组基于C- Ag+-C结构设计了检测Ag+的比色生物传感器(T. Li, L. Shi, E. WangandS. Dong, Chem. -Eur. J. , 2009，15，3347 - 3350·)。 利用生物相容性和水溶性都很好的DNA分子对重金属离子污染进行检测受到了国内外专家的关注。Ono小组还首次报道了 DNA序列中的T-T碱基对能与Hg2+发生特异性结合形成稳定的T- Hg2+-T结构。随后，国内外报道了很多基于T- Hg2+-T结构测定汞离子的荧光传感器和比色方法(Z. D. Wang, J. H. Lee, Y. Lu, Chem. Commun·，2008，6005 -6007; C. K. Chiang, C. C. Huang, C. W. Liu, H. Τ. Chang. Analytical Chemistry, Vol. 80, No. 10，May 15，2008; J. S. Lee, M. S. Han, and C. A. Mirkin. Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46，4093 _ 4096.)，这些方法都具有较好的选择性和较高的灵敏度。但是，方
权利要求
1. 一种利用T-T错配的DNA探针荧光测定汞离子浓度的方法，其特征在于，所述方法以含有T-T错配的DNA探针作为汞离子的识别元件，以DNA双链嵌入剂STOR GREEN I为荧光信号分子，利用所述SYBR GREEN I与所述含有T-T错配的DNA探针单双链结合时荧光信号强度的差异，对待测样品中的汞离子浓度进行荧光检测；其中，所述STOR GREEN I的结构式如下化学式(I)所示
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，向所述含有T-T错配的DNA探针中加入 HEPES缓冲液，并用NaNO3溶液调节离子强度，制成DNA探针溶液；所得探针溶液用NaOH溶液调节至PH中性。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品在检测前进行过滤，并用NaOH 溶液调节酸度至中性。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光检测在激发波长为479nm，发射波长5Mnm处进行。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述汞离子浓度的检出限为3nmol/L。
全文摘要
本发明涉及汞离子浓度的检测分析领域，公开了一种利用T-T错配的DNA探针荧光测定汞离子浓度的方法，其特征在于，所述方法以含有T-T错配的DNA探针作为汞离子的识别元件，以DNA双链嵌入剂SYBRGREENI为荧光信号分子，利用所述SYBRGREENI与所述含有T-T错配的DNA探针单双链结合时荧光信号强度的差异，对待测样品中的汞离子浓度进行荧光检测。本发明方法不会对环境产生污染，对汞离子选择性好，能够排除大多数金属离子的干扰，具有成本低、灵敏度高、检测快速等优点。
文档编号C09K11/06GK102200510SQ201110091858
公开日2011年9月28日 申请日期2011年4月13日 优先权日2011年4月13日
发明者卫碧文, 吴继魁, 张俊玲, 林莉, 郑翊, 高欢 申请人:上海出入境检验检疫局机电产品检测技术中心, 上海海洋大学食品学院