专利名称：凹凸棒石表面印迹人参皂苷g-ck的分子印迹材料的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种利用天然矿物材料化学复合修饰制备的分子印迹材料，属于天然矿物资源利用技术领域，具体涉及一种凹凸棒石表面印迹人参皂苷G-CK的分子印迹材料的制备方法。
背景技术：
人参皂苷G-CK (Ginsenoside Compound K，缩写G-CK)是五加科植物人参属人参、西洋参、三七等以及葫芦科植物绞股蓝等药材及相应制剂口服后的主要活性代谢产物， 一种非天然人参皂苷成分，是天然原人参二醇型皂苷群经体内肠道益生菌代谢转化产物， 是一种国际公认最具潜力的治疗肿瘤和艾滋病的高附加值化合物，具有抑制多种肿瘤细胞增殖、生长、浸润、转移等功效，诱导肿瘤细胞凋亡，还具有提高机体免疫力、改善微循环、抗炎、抗过敏、保肝、抗衰老、减毒、增强学习和记忆能力、促进皮肤内胶原蛋白的表达等多种功能。虽具有广泛的商业应用及临床应用价值，但其难于分离纯化。分子印迹技术(molecular imprinting technique, MIT)，亦称为分子烙印技术、 分子模板技术，是源于生物化学、高分子化学、材料科学等学科的一门交叉学科技术，属于超分子化学研究范畴，是指以某一特定的目标分子(模板分子、印记分子或烙印分子)为模板，制备对该分子具有特异选择性聚合物的过程，通常被描述为制备与识别“分子钥匙”的人工“锁”技术(谭天伟.分子印迹技术及应用.北京化学工业出版社，2010.6)。因分子印迹技术具有构效可预知性、特异识别性和广泛适用性等三大优势，受到各国学术结构、企事业团体广泛重视，并投入巨资进行应用研究。分子印迹聚合物具有亲和性及选择性高、抗恶劣环境能力强、稳定性好、使用寿命长、应用范围光等特点。分子印迹技术在许多领域，如在色谱分离、固相萃取、仿生传感、模拟酶催化、临床药物分析、膜分离等领域得到日益广泛的研究和开发，在生物工程、天然药物分离、临床医学、食品工业、环境监测等行业形成广泛的应用。除针对人参皂苷Rgl已开发有相应的分子印迹材料(刘庆山，尹小英，黄火强，等.人参皂苷Rgl分子印迹材料，其制备方法，其应用.中国专利，CN 102166512 A, 2010年8月31日公开)，针对其它人参皂苷化合物的分子印迹材料研发未见相关报道， 尤其是人参皂苷的代谢产物。凹凸棒石是一种具有优良吸附性能的天然硅镁酸盐，具有独特的纳米棒晶结构， 也是一种天然的纳米材料，对含有羟基、醛基、羰基等含氧有机物具有独特的吸附能力。凹凸棒石是一种层链状硅酸盐黏土，其独特的显微结构包括三个层次一是凹凸棒石的基本结构单元一棒晶，属一维纳米材料，是长约1 μ m,直径0. 01 μ m的针状晶体；二是由棒晶紧密平行聚集而成的棒晶束；三是由晶束(也包括棒晶)间相互聚集而形成的各种层链状聚集体。其独特的一维纳米棒晶结构和良好的表面活性决定了它是制备纳米有机-无机复合物的理想无机材料，可以在微米填充和纳米增强两个水平上与聚合物进行功能复合，是优良的补(增)强材料。
中药成分人参皂苷的传统分离纯化载体有硅胶、大孔吸附树脂、三氧化二铝、硅藻土、反相硅胶等，是利用成分在固定相与流动相之间的分配系数的差异实现分离纯化的，最大缺点是选择性差，富集容量低，尤其是对一些结构复杂、多手性位、含量低的高活性化合物，分离纯化难度大，运用常规的载体材料进行分离纯化往往需要反复操作，结果使得最终收率极低，甚至造成手性构型改变而失活。基于分子印迹材料具有构效可预知性、特异识别性和广泛适用性等三大优势，依据特定模板分子量身订做相应的分子印迹材料，将模板分子洗脱后，留下与模板分子的形状、大小以及识别位点相匹配的空隙，该空隙能够重新识别模板分子，以此分子印迹材料作为相应模板分子的分离纯化载体材料，可实现模板分子的高效、快速分离纯化，且分离成本较低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种凹凸棒石表面印迹人参皂苷G-CK的分子印迹材料的制备方法，以人参皂苷G-CK为模板分子、纳米凹凸棒石为载体基质，采用凹凸棒石进行表面化学修饰引入适当的官能基团、筛选系列功能单体、表面聚合制备G-CK分子的表面分子印迹材料，并以此材料作为纯化载体进行动态固相萃取及静态吸附从粗提取物和代谢样品中定向分离、富集G-CK分子，由此提高目标化合物的收率，克服天然药物成分及其代谢产物常规分离纯化载体的缺点及存在的问题。本发明的技术解决方案是以原人参二醇型皂苷群的主要代谢产物G-CK为模板分子，经化学改性的纳米凹凸棒石为基质，合成表面分子印迹材料；具体步骤如下
(1)凹凸棒石的有机改性将凹凸棒石与溶剂甲苯以1:10(w/v)置于圆底烧瓶中， 盖上盖子，在超声清洗器中超声处理1小时充分均质化；按凹凸棒石与硅烷偶联剂比例为 1:1-1:5 (w/v)加入硅烷偶联剂，再加入5:1 的三乙胺，置于沸水浴上加热回流12-48小时进行硅烷化，依次经过滤、甲醇洗涤、氯仿洗涤后真空干燥，得改性凹凸棒石，作为表面印迹的载体材料；
(2)表面分子印迹材料的制备依据G-CK的溶解度，将1倍重量的人参皂苷G-CK溶于其400倍重量的甲醇-氯仿混合溶液中，甲醇与氯仿之比1:3 (v/v)，再加入人参皂苷G-CK 的10倍重量的甲基丙烯酸功能单体及10-50倍重量的改性凹凸棒石，常温下置于转速为 500rpm的振荡器振荡3_10小时，使模板分子、功能单体与改性凹凸棒石之间充分混合；再加入人参皂苷G-CK的10倍重量的交联剂二乙二醇二甲基丙烯酸(E⑶MA)与0. 2倍重量引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟，将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应M-48小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK的凹凸棒石基表面分子印迹材料。其中，硅烷偶联剂为三乙氧基乙烯基基硅烷、三甲氧基巯丙基硅烷、Y-缩甘油氧丙基硅烷、3-(甲基丙烯氧基)丙基硅烷或三乙氧基氨丙基硅烷。本发明具有以下优点1、凹凸棒石基分子印迹材料的形状特征与天然凹凸棒石材料基本一致，经红外、X-射线晶体衍射等方法证实，凹凸棒石表面确实存在分子印迹聚合物薄层，其外核质量为总质量的1%_20%，粒径分析表明粒径分布较广(5-100μπι)；
2、采用静态吸附法评价凹凸棒石基表面分子印迹材料对人参皂苷G-CK的富集纯化能力，结果表明静态吸附容量可达3mg/g以上，富集获得的G-CK纯度可达90%以上，均优于其它非材料的静态吸附富集纯化能力；
3、采用固相萃取方法评价凹凸棒石基表面分子印迹材料对人参皂苷G-CK具有很好的识别能力，与反相硅胶、硅胶、硅藻土、大孔树脂、三氧化二铝等固相萃取柱以及非印迹材料固相萃取柱相比，G-CK印迹柱对人参茎叶总皂苷酶法转化样品母液中的G-CK有较高的选择性，柱容量高，达到細g/g以上，是C18反相硅胶或正相硅胶固相萃取的3-6倍，非印迹材料固相萃取柱的10倍，同时洗脱率达到90%以上，G-CK收率达到80%以上，均高于其它吸附剂固相萃取柱；4、本发明以G-CK为模板分子、纳米凹凸棒石为基质，合成表面分子印迹材料，从中药、民族药、天然植物药以及相应代谢产物中靶向筛选高附加值活性成分，具有重要意义；5、该凹凸棒石基表面分子印迹材料制备的模板分子为人参皂苷G-CK，也适用于 G-Rbl、G-Rh2, G-Rd, G-Fl、G-F2等多种人参皂苷单体化合物；6、表面分子印迹材料制备采用载体基质为硅烷化改性纳米凹凸棒石，也适用于硅烷化改性的颗粒凹凸棒石、硅胶、硅藻土、喷闰土、蒙脱石、高岭土等；7、表面分子印迹材料制备采用的功能单体是甲基丙烯酸，也适用于甲基丙烯酸酯；8、凹凸棒石基表面分子印迹材料既可作为静态吸附剂，也可作为固相萃取填料富集纯化人参皂苷G-CK ;9、凹凸棒石基表面分子印迹材料科作为色谱填料用于制备固相萃取柱及分析与制备型色谱柱。
图1是人参皂苷G-CK分子式。图2是三乙氧基乙烯基硅烷改性凹凸棒石与相应表面分子印迹材料的红外图谱， a改性凹凸棒石；b表面分子印迹材料。图3是三乙氧基乙烯基硅烷改性凹凸棒石与相应表面分子印迹材料的XRD图谱， A分子印迹材料；B改性凹凸棒石。
具体实施例方式下面通过具体实施例详述本发明的技术解决方案，但本发明并不限于下述的实施例。实施例1 依以下步骤制备分子印迹材料
1)凹凸棒石的乙烯基硅烷改性取5g凹凸棒石和50 ml甲苯置于100 ml圆底烧瓶中，盖上盖子，超声处理1 h以充分均质化；再加入5 ml三乙氧基乙烯基硅烷和1 ml三乙胺，加热回流12 h进行硅烷化，反应后经过滤、甲醇、氯仿洗净真空干燥，得改性凹凸棒石， 保存备用；
2)表面分子印迹材料的制备50mg模板分子人参皂苷G-CK溶解于5ml甲醇和15 ml 氯仿中，加入功能单体甲基丙烯酸0.5 g和0.5 g步骤1的硅烷化改性凹凸棒石，置于常温转速为500 rpm的振荡器中振荡3h，使模板分子与功能单体以及改性凹凸棒石之间充分混合，再加入0.25 g交联剂EGDMA和10 mg的引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟， 将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应M小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料。应用例静态吸附法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例1的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料置于5ml母液中，室温下振荡 1小时，再静置1小时，抽滤收集固体，依次用固体的5倍重量蒸馏水洗涤除去水溶性杂质， 用固体的5倍重量的质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用固体的10倍重量甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物3. Olmg,经HPLC分析纯度为91%。应用例固相萃取法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例1的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料装于固相萃取柱中，用5ml 甲醇平衡柱子；取上述5ml母液，以0. 5ml/min以下低流速上样，用5克蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用5克质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用10克甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物4. Img,经HPLC分析纯度为92%。实施例2 依以下步骤制备分子印迹材料
1)凹凸棒石的3-(甲基丙烯氧基)丙基硅烷改性取5g凹凸棒石和50 ml甲苯置于 100 ml圆底烧瓶中，盖上盖子，超声处理1 h以充分均质化；再加入10 ml三乙氧基乙烯基硅烷和1 ml三乙胺，加热回流M h进行硅烷化，反应后经过滤、甲醇、氯仿洗净后真空干燥，得改性凹凸棒石，保存备用；
2)表面分子印迹材料的制备50mg模板分子人参皂苷G-CK溶解于5ml甲醇和15 ml 氯仿中，加入功能单体甲基丙烯酸0.5 g和2.0 g改性凹凸棒石，置于常温转速为500rpm的振荡器中振荡6h，使模板分子与功能单体以及改性凹凸棒石之间充分混合，再加入250 mg 交联剂EGDMA和10 mg的引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟，将反应器置于50°C 恒温转速为500rpm的振荡器反应36小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸 9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK的凹凸棒石基表面分子印迹材料。应用例静态吸附法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例2的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料置于5ml母液中，室温下振荡 1小时，再静置1小时，抽滤收集固体，依次用固体的5倍重量蒸馏水洗涤除去水溶性杂质， 用固体的5倍重量的质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用固体的10倍重量甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物3 mg,经HPLC分析纯度为90. 5%。应用例固相萃取法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法
6转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例2的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料装于固相萃取柱中，用5ml 甲醇平衡柱子；取上述5ml母液，以0. 5ml/min以下低流速上样，用5克蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用5克质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用10克甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物4. 5mg,经HPLC分析纯度为91%。实施例3 依以下步骤制备分子印迹材料
1)凹凸棒石的三甲氧基巯丙基硅烷改性取5g凹凸棒石和50 ml甲苯置于100 ml 圆底烧瓶中，盖上盖子，超声处理1 h以充分均质化；再加入15 ml三甲氧基巯丙基和1 ml 三乙胺，加热回流M h进行硅烷化，反应后经过滤、甲醇、氯仿洗净真空干燥，得改性凹凸棒石，保存备用；
2)表面分子印迹材料的制备50mg模板分子人参皂苷G-CK溶解于5ml甲醇和15 ml 氯仿中，加入功能单体甲基丙烯酸0.5 g和1.5 g步骤1的硅烷化改性凹凸棒石，置于常温转速为500rpm的振荡器中振荡8h，使模板分子与功能单体以及改性凹凸棒石之间充分混合，再加入250 mg交联剂EGDMA和10 mg的引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟， 将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应48小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料。应用例-静态吸附法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至5ml ’②将实施例3的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料置于5ml母液中，室温下振荡1小时，再静置1小时，抽滤收集固体，依次用固体的5倍重量蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用固体的5倍重量的质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用固体的 10倍重量甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物3. 0 Img,经HPLC分析纯度为 90%。应用例固相萃取法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例3的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料装于固相萃取柱中，用5ml 甲醇平衡柱子；取上述5ml母液，以0. 5ml/min以下低流速上样，用5克蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用5克质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用10克甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物4. 05mg,经HPLC分析纯度为91%。实施例4 依以下步骤制备分子印迹材料
1)凹凸棒石的Y-缩甘油氧丙基硅烷改性取5g凹凸棒石和50 ml甲苯置于100 ml 圆底烧瓶中，盖上盖子，超声处理1 h以充分均质化；再加入20 mlY-缩甘油氧丙基硅烷和 1 ml三乙胺，加热回流36 h进行硅烷化，反应后经过滤、甲醇、氯仿洗净真空干燥，得改性凹凸棒石，保存备用；
2)表面分子印迹材料的制备50mg模板分子人参皂苷G-CK溶解于5ml甲醇和15 ml氯仿中，加入功能单体甲基丙烯酸0.5g步骤1的硅烷化改性凹凸棒石，置于常温
转速为500rpm的振荡器中振荡10h，使模板分子与功能单体以及改性凹凸棒石之间充分混合，再加入250 mg交联剂EGDMA和10 mg的引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟， 将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应48小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料。应用例静态吸附法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例4的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料置于5ml母液中，室温下振荡1小时，再静置1小时，抽滤收集固体，依次用固体的5倍重量蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用固体的5倍重量的质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用固体的10 倍重量甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物3. 2mg,经HPLC分析纯度为94%。应用例固相萃取法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例4的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料装于固相萃取柱中，用5ml 甲醇平衡柱子；取上述5ml母液，以0. 5ml/min以下低流速上样，用5克蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用5克质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用10克甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物4. 3mg,经HPLC分析纯度为95%。实施例5 依以下步骤制备分子印迹材料
1)凹凸棒石的三乙氧基氨丙基硅烷改性取5g凹凸棒石和50 ml甲苯置于100 ml 圆底烧瓶中，盖上盖子，超声处理1 h以充分均质化；再加入25 ml三乙氧基氨丙基硅烷和 1 ml三乙胺，加热回流48 h进行硅烷化，反应后经过滤、甲醇、氯仿洗净真空干燥，得改性凹凸棒石，保存备用；
2)表面分子印迹材料的制备50mg模板分子人参皂苷G-CK溶解于5ml甲醇和15 ml 氯仿中，加入功能单体甲基丙烯酸0.5 g和2 g步骤1的硅烷化改性凹凸棒石，置于常温转速为500rpm的振荡器中振荡10h，使模板分子与功能单体以及改性凹凸棒石之间充分混合，再加入250 mg交联剂EGDMA和10 mg的引发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30分钟， 将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应48小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料。应用例静态吸附法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例5的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料置于5ml母液中，室温下振荡 1小时，再静置1小时，抽滤收集固体，依次用固体的5倍重量蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用固体的5倍重量的质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用固体的10倍重量甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物3. Olmg,经HPLC分析纯度为91%。
应用例固相萃取法①由参考文献(喻春皓，魏峰，何志敏.酶法修饰人参茎叶总皂苷及其HPLC图谱研究.中草药，2007，38(1): 46-50)制备人参茎叶总皂苷酶法转化液5ml，旋转蒸发仪下减压蒸干溶剂，残渣用5ml甲醇充分溶解，过滤得母液，并定容至 5ml ’②将实施例5的1克G-CK凹凸棒石基表面分子印迹材料装于固相萃取柱中，用5ml 甲醇平衡柱子；取上述5ml母液，以0. 5ml/min以下低流速上样，用5克蒸馏水洗涤除去水溶性杂质，用5克质量浓度50%甲醇水溶液洗除高极性人参皂苷，最后用10克甲醇洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，得G-CK化合物4. Img,经HPLC分析纯度为92%。
权利要求
1.凹凸棒石表面印迹人参皂苷G-CK的分子印迹材料的制备方法，以原人参二醇型皂苷群的主要代谢产物G-CK为模板分子，经化学改性的纳米凹凸棒石为基质，合成表面分子印迹材料；其特征在于该制备方法具体步骤如下(1)凹凸棒石的有机改性将凹凸棒石与溶剂甲苯以1:10(w/v)置于圆底烧瓶中， 盖上盖子，在超声清洗器中超声处理1小时充分均质化；按凹凸棒石与硅烷偶联剂比例为 1:1-1:5 (w/v)加入硅烷偶联剂，再加入5:1 的三乙胺，置于沸水浴上加热回流12-48小时进行硅烷化，依次经过滤、甲醇洗涤、氯仿洗涤后真空干燥，得改性凹凸棒石，作为表面印迹的载体材料；(2)表面分子印迹材料的制备依据其溶解度，将1倍重量的人参皂苷G-CK溶于其400 倍重量的甲醇-氯仿混合溶液中，甲醇与氯仿之比l:3(v/v)，再加入人参皂苷G-CK的5倍重量的甲基丙烯酸功能单体及10-50倍重量的改性凹凸棒石，常温下置于转速为500rpm的振荡器振荡3-10小时，使模板分子、功能单体与改性凹凸棒石之间充分混合；再加入人参皂苷G-CK的5倍重量的交联剂EGDMA与0. 2倍重量弓|发剂偶氮二异丁腈，通入氮气保护30 分钟，将反应器置于50°C恒温转速为500rpm的振荡器反应M-48小时，反应结束后过滤收集固体材料；将固体材料粉碎处理过80目筛，得粉状材料；将粉状材料用滤纸包好后置于索氏提取器中，用甲醇-乙酸9:1 (ν/ν)作为抽提液回流抽提48小时，取出置于40°C真空干燥箱干燥M小时，得人参皂苷G-CK的凹凸棒石基表面分子印迹材料。
2.根据权利要求1所述的凹凸棒石表面印迹人参皂苷G-CK的分子印迹材料的制备方法，其特征在于其中，硅烷偶联剂为三乙氧基乙烯基基硅烷、三甲氧基巯丙基硅烷、Y-缩甘油氧丙基硅烷、3-(甲基丙烯氧基)丙基硅烷或三乙氧基氨丙基硅烷。
全文摘要
本发明公开了一种凹凸棒石表面印迹人参皂苷G-CK的分子印迹材料的制备方法，以原人参二醇型皂苷群的主要代谢产物G-CK为模板分子，以化学改性的纳米凹凸棒石为基质，合成表面分子印迹材料；本发明以此表面分子印迹材料作为纯化载体进行动态固相萃取及静态吸附，从粗提取物和代谢样品中定向分离、富集G-CK分子，由此提高目标化合物的收率，克服天然药物成分及其代谢产物常规分离纯化载体的缺点及存在的问题。
文档编号B01J20/30GK102500327SQ20111035581
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者吴洁, 喻春皓, 常峰, 张萍 申请人:淮阴工学院