离子液手性固定相及分离缬沙坦光学对映体的方法
【专利摘要】本发明的离子液手性固定相，由L?脯氨酸衍生物模块、N?乙烯基咪唑形成的阴离子交换器模块和巯丙基硅胶模块构成，其分子结构式为：式中：R1为氢、脂肪烷烃基、环烷烃基、含有取代基或不含取代基的芳基、芳烷基、萘基、蒽基；Y为任一种阴离子。用所述离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，包括以下步骤：⑴制备流动相；⑵将缬沙坦对映体用所述流动相溶解，获得对映体待分离溶液；⑶采用式Ⅰ的离子液手性固定相；⑷将缬沙坦对映体待分离溶液用离子液手性固定相进行色谱柱分离并在254nm的紫外检测条件下进行检测，记录色谱图。本发明解决了色谱制备上缬沙坦因流动相溶解小造成上样量小的难题，具备手性色谱制备的潜力。
【专利说明】
离子液手性固定相及分离缬沙坦光学对映体的方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及化学分析分离学科中的手性固定相技术领域，具体说，是将脯氨酸衍 生物与N-乙烯基咪唑连接制成手性选择剂，然后键合到含巯基的硅胶载体表面，得到一种 新型的离子液手性固定相;将所述离子液手性固定相用于分离R-和S-缬沙坦光学对映体的 方法。
【背景技术】
[0002] 缬沙坦的商品名为Diovan，是由瑞士诺华公司研制并于1998年由美国Π )Α批准上 市的一种口服特异性血管紧张素 Π (ΑΤΟ受体拮抗剂，是在临床上用于治疗轻中度原发性 高血压的药物。2005年，美国FDA又扩大该药的用药范围为:适用于治疗心力衰竭。缬沙坦化 学名为(S)-N-戊酰基-Ν-[[2'-(1Η-5-四氮唑-基）[1，Γ-联苯]-4-基]甲基]-缬氨酸，其结 构式如式(II )，其有一个手性中心，存在一对对映体即S-缬沙坦和R-缬沙坦(其具有不同的 旋光性），其中，S-缬沙坦的生物活性远远高于R-缬沙坦。
[0003]
〇
[0004] 关于缬沙坦合成工艺已有美国专利US5339578、US7741507以及世界知识产权组织 的TO 2004/026847、W02006/058701有公开，其中，被广泛采用的缬沙坦的合成工艺为：先制 备得到S-缬沙坦甲酯，然后经水解反应再得到S-缬沙坦;然而目前在水解反应的过程中无 法避免因消旋反应而生成R-缬沙坦。为了降低缬沙坦中R-缬沙坦杂质的含量，工业上需要 严格控制结晶条件，但是这样做会降低S-缬沙坦的收率。为了降低成本提高收率，现有的做 法是在制备过程中对母液进行拆分回收。目前，工业上的拆分方法是手性化学拆分法。所述 手性化学拆分法即生成非对映体拆分法，其常用的拆分试剂为手性胺类，如苯乙胺、N-苄 基-α-苯乙胺等。但是，手性化学拆分法的工作量大且效率较低。
[0005]而手性高效液相色谱法以其快速高效的优势已被广泛应用于手性药物的分析与 制备。对于R-和S-缬沙坦光学对映体的分离，根据现有文献，仅有Chiral AGP(a-酸性糖蛋 白，J.Chromatogr.B 1996,686,77_83)、ChiraDex(-环糊精，J.Chem.Pharm.Res 2015,7， 118-121)和Chiralpak AD-H(淀粉，pharmazie 2009，64,495-498)三款手性色谱柱对其具 备分离能力。但是，前两款手性色谱柱(Chiral AGP、ChiraDex)是以磷酸盐为流动相对R-和 S-缬沙坦进行手性分离的。这一条件限制了上样量。另外，蛋白柱低的键合量也限制了上样 量，且色谱制备效率低，从而限制了前两款手性色谱柱在R-和S-缬沙坦光学对映体制备中 的应用。而后一款手性色谱柱(Chiralpak AD-H)是以正己烷/异丙醇为流动相对R-和S-缬 沙坦光学对映体进行手性分离的，它同样因为流动相样品溶解度极低而大大限制了上样 量，因而也不适于R-和S-缬沙坦光学对映体的制备。总之，文献报道的这三款色谱柱仅对R-和S-缬沙坦光学对映体具有色谱分析能力，而不具有R-和S-缬沙坦光学对映体色谱制备能 力。
[0006] 因此，如果能以对R-和S-缬沙坦具有优秀溶解度的溶剂(如甲醇、乙醇)为流动相， 研发一种对缬沙坦有较出色的分离能力的手性固定相在本领域是非常需要的。因为，这大 大提高了增大上样量的可能，为R-和S-缬沙坦光学对映体的色谱制备提供了可能。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种离子液手性固定相;本发明的 第二个目的是，提供用所述离子液手性固定相分离降血压药R-和S-缬沙坦光学对映体的方 法。
[0008] 为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案。
[0009] 一种离子液手性固定相，其特征在于，由L-脯氨酸衍生物模块、N-乙烯基咪唑形成 的阴离子交换器模块和巯丙基硅胶模块构成，其分子结构式为：
[0010] ~ '6 1
[0011]式中：Ri为氢、脂肪烷烃基、环烷烃基、含有取代基或不含取代基的芳基、芳烷基、 萘基、蒽基；
[0012] Y为任一种阴离子。
[0013] 可选的，所述分子结构式(I)的手性固定相选自以下分子结构式中的一种：
[0014]
[0015]为实现上述第二目的，本发明采取了以下技术方案。
[0016]用所述离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，其特征在于，包括以下 步骤：
[0017] (1)往极性有机溶剂中添加添加剂，用〇 . 45μπι微孔滤膜过滤，超声脱气，得到流动 相；
[0018] (2)将缬沙坦对映体用步骤（1)获得的流动相溶解，用0.22μπι微孔滤膜过滤，得到 缬沙坦浓度为1.0mg/mL的对映体待分离溶液；
[0019] (3)采用所述式I的离子液手性固定相，其分子结构式为：
[0020]
[0021] 式（I)中：
[0022] 心为氢、脂肪烷烃基、环烷烃基、含有取代基或不含取代基的芳基、芳烷基、萘基、 恩基；
[0023] Y为任一种阴离子；
[0024] (4)将步骤(2)得到的缬沙坦对映体待分离溶液2yL在柱温为20 °C~50 °C的条件下 对步骤(3)采用的离子液手性固定相进行色谱柱分离，流速为0.5~1.5mL/min，在254nm的 紫外检测条件下进行检测，记录色谱图。
[0025]可选的，步骤（1)所述的极性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、乙酸乙酯、二氯 甲烷的一种或多种。
[0026]可选的，步骤（1)所述的添加剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、二乙胺、三乙胺、甲酸铵、 乙酸铵、六氟磷酸铵的一种或多种。
[0027] 可选的，步骤(3)所述的离子液手性固定相选自以下分子结构式中的一种：
[0028]
[0029] 本发明的积极效果是：
[0030] (1)将咪唑模块作为阴离子交换器连接到脯氨酸衍生物上制备适合高效液相色谱 用的手性固定相。
[0031] (2)在极性有机色谱模式下制备的脯氨酸衍生物型手性固定相对R-和S-缬沙坦对 映体具有出色的分离能力，解决了色谱制备上缬沙坦因流动相溶解小造成上样量小的难 题，具备手性色谱制备的潜力。
【附图说明】
[0032] 图1为实施例8~13离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的色谱图。
[0033] 图2为实施例14离子液手性固定相CSP3分离缬沙坦光学对映体的色谱图。
[0034] 图3为实施例15在34~37min和37~52min时段内收集的馏分R-缬沙坦和S-缬沙坦 分别在同样色谱条件下进行单一对映体光学纯度检测的色谱图。
【具体实施方式】
[0035] 以下结合附图介绍本发明离子液手性固定相及分离缬沙坦光学对映体的方法的
【具体实施方式】，但是应该指出，本发明的实施不限于以下的实施方式。
[0036] 所述离子液手性固定相的合成方法，包括以下合成步骤：
[0037] (1)将L-脯氨酸分散在干燥的四氢呋喃中，在加热回流条件下滴加 1.2~2.0当量 的卤代酰化试剂；1~3h后反应结束，减压蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取分散于水中的残留物， 有机相以无水硫酸钠干燥，而后减压蒸除溶剂，向残留物中加入异丙醚捣搅析出白色晶体 产物，得到卤代酰化的L-脯氨酸。
[0038]冰水浴下，用二氯甲烷溶解卤代酰化的L-脯氨酸，然后滴加1~1.5当量的二环己 基碳二亚胺DCC的二氯甲烷溶液;0.5~lh后，滴加1~1.5当量的伯胺化合物的二氯甲烷溶 液;8~24h后反应结束，过滤，用稀盐酸溶液洗涤2~3次，再用碳酸氢钠饱和溶液洗涤2~3 次，经无水硫酸钠干燥、减压去除溶剂，残留物用异丙醚捣搅结晶纯化或者用柱色谱纯化， 得到L-脯氨酸衍生物。
[0039] (2)将步骤（1)得到的L-脯氨酸衍生物和1.5当量的N-乙烯基咪唑溶解在乙腈中， 氮气氛围下回流反应12~48h，减压蒸除大部分溶剂后，滴加到乙酸乙酯中进行纯化并重复 数次，得到手性选择剂。
[0040] (3)将步骤(2)得到的手性选择剂与偶氮二异丁腈AIBN及巯丙基硅胶加入到烧瓶 中，氮气氛围下，在甲醇溶液中回流反应6~12h，得到硅胶。
[0041 ]将得到的硅胶进行过滤，用甲醇洗涤数次，在50~60°C温度条件下真空干燥过夜， 制得基于L-脯氨酸衍生物咪唑离子液手性固定相。
[0042]其化学反应及结构式为：
[0043] L--
[0045] CSP1的合成，CSP1的分子结构式为：
[0046]
[0047] (1)将L-脯氨酸（15.00g，130.40mmol)分散于100mL无水四氢呋喃中，在加热回流 条件下滴加氯乙酰氯（15mL，195.70mm〇l)，回流搅拌3h;减压蒸除溶剂，用二氯甲烷萃取分 散于水中的残留物;有机相以无水硫酸钠干燥，而后减压蒸除溶剂，向残留物中加入异丙醚 捣搅析出白色晶体卤代酰化的L-脯氨酸C-l 22.76g，收率为91%。4匪1^0(：13):4.57((1(1， 1Η)，4·15-4.00(m，2H)，3.70-3.50(m，2H)，2.40-1.85(m，4H)。
[0048] (2)将步骤(1)得到的白色晶体产物C-l (3 · OOg，15 · 70mmo 1)和N-乙烯基咪唑（
[0049] 2.21g，23.50mmol)溶于50mL乙腈中，氮气保护下回流加热48h;减压蒸除大部分溶 剂，加入乙酸乙酯析出产物，将粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯析出产物，重复三次 得到纯度较高的手性选择剂C-7。
[0050] (3)将巯丙基硅胶(4 · 00g，元素分析，C5 · 62 %，H1 · 67 % )分散于50mL溶有步骤(2) 得到的手性选择剂C-7 (2 · Ommo 1)与AI BN( 5 % mmo 1)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅 拌8h;过滤并用甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP1(元素分 析，C8.24%，Ν1·51%，Η1·92%)。
[0051 ] 实施例2
[0052] CSP2的合成，CSP2的分子结构式为：
[0053]
[0054] (1)将实施例1获得的C-l (4 · OOg，20 · 90mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加 溶有DCC(6.50g，31.30mmo 1)的二氯甲烷20mL，搅拌反应0.5h;向反应液中滴加溶有苯胺 (2.33g，25. lOmmol)的二氯甲烷20mL，反应搅拌过夜;过滤，滤液分别先后各用2.5M稀盐酸、 饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，向残留物中加入异丙醚析 出白色结晶产物 C-2(4.50g)，收率为 81%</HNMR(CDCl3):9.27(s，lH)，7.50(d，2H)，7.25(t， 2H)，7.05(t，lH)，4.76(d，lH)，4.10(m，2H)，3.75-3.55(m，2H)，2.50(m，lH)，1.19(m，lH)， 2.06-1.90(m，2H)。
[0055] (2)将步骤（1)得到的白色晶体产物C-2 (4 · 00g，15 · OOmmo 1)和N-乙烯基咪唑 (2.128,22.5〇1111]1〇1)溶于5〇1]11^乙腈中，氮气保护下回流加热4811 ;减压蒸除大部分溶剂，加入 乙酸乙酯析出产物，粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯中析出产物，重复三次得到纯度 较高的手性选择剂C-SAC-Mass: [Μ] + = 325 · 1。
[0056] (3)将巯丙基硅胶(4 · 00g，元素分析，C5 · 62 %，H1 · 67 % )分散于50mL溶有步骤(2) 得到的手性选择剂C-8 (2. Ommo 1)和AI BN( 5 % mmo 1)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅 拌8h;过滤并用甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP2(元素分 析，C11.24%，Ν1·67%，Η2·26%)。
[0057] 实施例3
[0058] CSP3的合成，CSP3的分子结构式为：
[0059]
[0060] (1)将实施例1获得的C-1 (4 · 00g，20 · 90mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加 溶有DCC(6.50g，31.30mmo 1)的二氯甲烷20mL，搅拌反应0.5h;向反应液中滴加溶有萘胺 (3.59g，25. lOmmol)的二氯甲烷20mL，反应搅拌过夜;过滤，滤液分别先后各用2.5M稀盐酸、 饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，向残留物中加入异丙醚析 出白色结晶产物C-3(5.60g)，收率为85% ,^1^(0)(:13)39.66(8,110,8.25-7.25(111,710, 4.96(d，lH)，4.15(s，2H)，3.75-3.50(m，2H)，2.67(q，lH)，2.27-1.85(m，4H)。
[0061 ] (2)将步骤（1)得到的白色晶体产物C-3 (4 · 75g，15 · OOmmo 1)和N-乙烯基咪唑 (2.128,22.5〇1111]1〇1)溶于5〇1]11^乙腈中，氮气保护下回流加热4811;减压蒸除大部分溶剂，加入 乙酸乙酯析出产物;粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯中析出产物，重复三次得到纯度 较高的手性选择剂C-LLC-Mass: [M] + = 376.1。
[0062] 3)将巯丙基硅胶(4 · 00g，元素分析，C5 · 62 %，HI · 67 % )分散于50mL溶有步骤(2)得 到的手性选择剂C-9 (2. Ommo 1)和AI BN (5 % mmo 1)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅拌 8h;过滤并用甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP3 (元素分析， C13.81% ,N1.94% ,H2.00%)〇
[0063] 实施例4
[0064] CSP4的合成，CSP4的分子结构式为：
[0065]
[0066] (1)将实施例1获得的C-1 (4 · 00g，20 · 90mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加 溶有DCC(6.50g，31.30mmol)的二氯甲烷20mL，搅拌反应0.5h;向反应液中滴加溶有三苯基 甲胺(6.51g，25.1 Ommo 1)的二氯甲烷20mL，反应搅拌过夜;过滤，滤液分别先后各用2.5M稀 盐酸、饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，向残留物中加入异 丙醚析出白色结晶产物C_4(8 · 00g)，收率为89% "HNMI^CDCh): δ8 · 01 (s，1H)，7 · 50-7 · 00 (m，15H)，4.70(d，lH)，4.00(s，2H)，3.75-3.40(m，2H)，2.50-1.70(m，4H)。
[0067] (2)将步骤（1)得到的白色晶体产物04(6.5(^，15.0〇111111〇1)和^乙烯基咪唑 (2.128,22.5〇1111]1〇1)溶于5〇1]11^乙腈中，氮气保护下回流加热4811 ;减压蒸除大部分溶剂，加入 乙酸乙酯析出产物。粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯中析出产物，重复三次得到纯度 较高的手性选择剂C-l(LLC-Mass :[M] + = 490.6。
[0068] (3)将巯丙基硅胶(4 · 00g，元素分析，C5 · 62 %，HI · 67 % )分散于50mL溶有步骤（2) 得到的手性选择剂C-10(2. Ommol)和AIBN(5%mmol)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅 拌8h;过滤并用大量甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP4(元 素分析，C 11·33%，Ν 1·05%，Η 1.96%)。
[0069] 实施例5
[0070] CSP5的合成，CSP5的分子结构式为：
[0071]
[0072] (1)将实施例1获得的C-1 (4.00g，20.90mmo 1)溶于20mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加 溶有DCC(6.50g，31.30mmol)的二氯甲烷20mL，搅拌反应0.5h;向反应液中滴加溶有3，5-二 氯基苯胺（4.01g，25 . lOmmol)的二氯甲烧20mL，反应搅拌过夜；过滤，滤液分别先后各用 2.5M稀盐酸、饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，向残留物中 加入异丙醚析出米白色结晶产物C_5(6.02g)，收率为 7.40(s，2H)，6.98(s，lH)，4.71(d，2H)，4.14(m，2H)，3.75-3.50(m，2H)，2.42(m，lH)，2.21 (m，lH)，2.05(m，2H)。
[0073] (2)将步骤（1)得到的白色晶体产物C-5 (5 . OOg，15 . OOmmol)和N-乙烯基咪唑 (2.128,22.5〇1111]1〇1)溶于5〇1]11^乙腈中，氮气保护下回流加热4811 ;减压蒸除大部分溶剂，加入 乙酸乙酯析出产物;粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯中析出产物，重复三次得到纯度 较高的手性选择剂C-lULC-Mass :[M] + = 394.4。
[0074] (3)将巯丙基硅胶(4 · OOg，元素分析，C5 · 62 %，HI · 67 % )分散于50mL溶有步骤(2) 得到的手性选择剂c-l 1 (2. Ommol)和AIBN(5%mmol)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅 拌8h;过滤并用甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP5(元素分 析，C11.75%，Ν1·77%，Η2·02%)。
[0075] 实施例6
[0076] CSP6的合成，CSP6的分子结构式为：
[0077]
[0078] (1)将实施例1获得的C-1 (4.00g，20.90mmol)溶于20mL二氯甲烷中，冰水浴下滴加 溶有DCC(6.50g，31.30mmol)的二氯甲烷20mL，搅拌反应0.5h;向反应液中滴加溶有3，5-二 甲基苯胺（3.(^，25.1〇111111〇1)的二氯甲烷2〇 1^，反应搅拌过夜；过滤，滤液分别先后各用 2.5M稀盐酸、饱和碳酸氢钠溶液洗涤三次，经无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，向残留物中 加入异丙醚析出米白色结晶产物C_6(4.90g)，收率为79% "HNMI^CDCh) :δ9.14(s，lH)， 7.14(s，2H)，6.69(s，lH)，4.73(d，2H)，4.10(m，2H)，3.75-3.48(m，2H)，2.48(m，lH)，2.25 (s，6H)，2.05(m，3H)。
[0079] (2)将步骤（1)得到的白色晶体产物C-6 (4 · 42g，15 · OOmmo 1)和N-乙烯基咪唑 (2.128,22.5〇1111]1〇1)溶于5〇1]11^乙腈中，氮气保护下回流加热4811 ;减压蒸除大部分溶剂，加入 乙酸乙酯析出产物，粗产物溶于少量甲醇，再滴加乙酸乙酯中析出产物，重复三次得到纯度 较高的手性选择剂〇12儿〇]\&^ :[]\1] + = 354.1。
[0080] (3)将巯丙基硅胶(4 · 00g，元素分析，C5 · 62 %，H1 · 67 % )分散于50mL溶有步骤（2) 得到的手性选择剂c-l2(2. Ommo 1)和AIBN(5 %mmo 1)的甲醇溶液中，氮气氛围下加热回流搅 拌8h;过滤并用甲醇洗涤滤饼，于50°C下真空干燥，合成得到硅胶手性固定相CSP6(元素分 析，C13.48%，Ν1·96%，Η2·31%)。
[0081 ] 实施例7
[0082]用实施例1-6合成的离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬 沙坦)的方法，色谱柱的填装。
[0083] 将手性固定相CSP1~CSP6分别分散于20mL甲醇中，超声匀浆10min，以甲醇作为顶 替液，在50MPa的压力下分别装入不锈钢柱管（150_X4.6mm)内，装柱时间约15min。
[0084] 实施例8
[0085] 用实施例1合成的离子液手性固定相CSP1分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0086] 1、仪器与条件
[0087] (1)高效液相色谱系统:沃特世高效液相系统包括515栗、7725i手动进样器、1500 柱温箱和2489紫外检测器(美国）。
[0088] (2)色谱柱:装填手性固定相CSP1的色谱柱（150mmX4.6mm)。
[0089] (3)流动相：甲醇/甲酸/二乙胺=100/0 · 4/0 · 2(v/v/v)。
[0090] (4)流速：0.8mL/min。
[0091] (5)柱温:25。。。
[0092] (6)进样体积：2yL。
[0093] (7)检测波长：254nm〇
[0094] 2、分离步骤
[0095] (1)往100mL甲醇中添加400yL的甲酸和200yL的二乙胺后，经0.45μπι微孔滤膜过 滤，超声脱气得到流动相。
[0096] (2)称取10.0 Omg缬沙坦(其中R-缬沙坦的含量约为19.00 % )，置于10mL容量瓶中， 加入步骤（1)得到的流动相稀释至10.0 OmL，经0.22μπι微孔滤膜过滤，得到缬沙坦浓度为 1.0mg/mL的对映体待分离溶液。
[0097] (3)采用所述手性固定相CSP1装填色谱柱（150mmX4.6mm)。
[0098] (4)将步骤(2)得到的缬沙坦对映体待分离溶液2yL在柱温为25 °C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP1进行色谱柱分离，流速为0.8mL/min，在254nm的紫外检测 条件下进行检测，记录色谱图。
[0099] 实施例8对缬沙坦光学对映体的分离结果见图1和表1。由图1的色谱图可知，在实 施例8的条件下，离子液手性固定相CSP1不能分离缬沙坦对映体。
[0100] 实施例9
[0101] 用实施例2合成的离子液手性固定相CSP2分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0102] 1、仪器与条件（同实施例8)
[0103] 2、分离步骤
[0104] (1)(同实施例 8)。
[0105] (2)称取lO.OOmg缬沙坦(其中R-缬沙坦的含量约为19.00%)，置于10mL容量瓶中， 加入步骤（1)得到的流动相稀释至10.0 OmL，经0.22μπι微孔滤膜过滤，得到缬沙坦浓度为 1.0mg/mL的对映体待分离溶液。
[0106] (2)(同实施例 8)。
[0107] (3)采用所述手性固定相CSP2装填色谱柱(150mmX4.6mm)。
[0108] (4)将步骤(2)得到的2yL缬沙坦对映体待分离溶液在柱温为25°C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP2进行色谱柱分离，（其余内容同实施例8)。
[0109] 实施例9的分离结果见图1和表1。图1中的1号峰为R-缬沙坦，2号峰为S-缬沙坦，由 图1的色谱图可知，在实施例9的条件下，离子液手性固定相CSP2可将S-缬沙坦与R-缬沙坦 头现分 i^i(Rs =1.35)。
[0110] 实施例10
[0111] 用实施例3合成的离子液手性固定相CSP3分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S- 缬沙坦）
[0112] 1、仪器与条件(同实施例8)。
[0113] 2、分离步骤
[0114] (1)(同实施例 8)。
[0115] (2)(同实施例 8)。
[0116] (3)采用装填手性固定相CSP3的色谱柱(150mmX4.6mm)。
[0117] (4)将步骤(2)得到的2yL缬沙坦对映体待分离溶液在柱温为25 °C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP3进行色谱柱分离，（其余内容同实施例8)。
[0118] 实施例10的分离结果见图1和表1。图1中的1号峰为R-缬沙坦，2号峰为S-缬沙坦， 由图1的色谱图可知，在实施例10的条件下，离子液手性固定相CSP3可将S-缬沙坦与R-缬沙 坦实现基线分离(R s = 2.04)。
[0119] 实施例11
[0120] 用实施例4合成的离子液手性固定相CSP4分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0121] 1、仪器与条件(同实施例8)。
[0122] 2、分离步骤
[0123] (1)(同实施例 8)。
[0124] (2)(同实施例 8)。
[0125] (3)采用装填手性固定相CSP4的色谱柱(150mmX4.6mm)。
[0126] (4)将步骤(2)得到的2yL缬沙坦对映体待分离溶液在柱温为25°C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP4进行色谱柱分离，（其余内容同实施例8)。
[0127] 实施例11的分离结果见图1和表1。图1中的1号峰为R-缬沙坦，2号峰为S-缬沙坦， 由图1的色谱图可知，在实施例11的条件下，离子液手性固定相CSP4可将S-缬沙坦与R-缬沙 坦实现分离(R s= 1.27)。
[0128] 实施例12
[0129] 用实施例5合成的离子液手性固定相CSP5分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0130] 1、仪器与条件(同实施例8)。
[0131] 2、分离步骤
[0132] (1)(同实施例 8)。
[0133] (2)(同实施例 8)。
[0134] (3)米用装填手性固定相CSP5的色谱柱（150mmX4.6mm)。
[0135] (4)将步骤(2)得到的2yL缬沙坦对映体待分离溶液在柱温为25 °C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP5进行色谱柱分离，（其余内容同实施例8)。
[0136] 实施例12的分离结果见图1和表1。图1中的1号峰为R-缬沙坦，2号峰为S-缬沙坦， 由图1的色谱图可知，在实施例12的条件下，离子液手性固定相CSP5可将S-缬沙坦与R-缬沙 坦实现基线分离(R s = 2.02)。
[0137] 实施例13
[0138] 用实施例6合成的离子液手性固定相CSP6分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S- 缬沙坦）
[0139] 1、仪器与条件(同实施例8)。
[0140] 2、分离步骤
[0141] (1)(同实施例 8)。
[0142] (2)(同实施例 8)。
[0143] (3)米用装填手性固定相CSP6的色谱柱（150mmX4.6mm)。
[0144] (4)将步骤(2)得到的2yL缬沙坦对映体待分离溶液在柱温为25°C的条件下对步骤 (3)采用的离子液手性固定相CSP6进行色谱柱分离，（其余内容同实施例8)。
[0145] 实施例13的分离结果见图1和表1。图1中的1号峰为R-缬沙坦，2号峰为S-缬沙坦， 由图1的色谱图可知，在实施例13的条件下，离子液手性固定相CSP6可将S-缬沙坦与R-缬沙 坦实现分离(R s= 1.21)。
[0146] 表1.用离子液手性固定相CSP1~CSP6对R-和S-缬沙坦对映体进行分离的色谱数 据
[0147]
[0148] 注:表中：
[0149] 1^表示保留较弱的对映体的保留因子；
[0150] α表示选择性因子;Rs表示分离度；
[0151] Mp表示流动相；
[0152] A表示流动相为甲醇/0.4%甲酸/0.2%二乙胺(体积比）；
[0153] B表示流动相为乙腈/0.2%甲酸/0.1%二乙胺(体积比）。
[0154] 实施例14
[0155] 注:实施例14以及实施例15的目的是，在增大缬沙坦对映体上样量的情况下，考察 离子液手性固定相对缬沙坦对映体的分离能力，因为实施例8~13为低上样量的分析级别。
[0156] 用实施例3合成的离子液手性固定相CSP3分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0157] 1、仪器与条件（同实施例8)。
[0158] 2、分离步骤
[0159] (1)(同实施例 8)。
[0160] (2)称取80 · OOmg缬沙坦(其中R-缬沙坦的含量约为19 · 00 % )，置于10mL容量瓶中， 加入步骤（1)得到的流动相稀释至10.0 OmL，经0.22μπι微孔滤膜过滤，得到缬沙坦浓度为 8.00mg/mL的对映体待分离溶液。
[0161 ] (3)采用所述手性固定相CSP3装填色谱柱(150mmX4.6mm)。
[0162] (4)将步骤(2)得到的缬沙坦对映体待分离溶液2yL、10yL、125yL、250yL在柱温为 25°C的条件下对步骤（3)采用的离子液手性固定相CSP3进行色谱柱分离，流速为0.8mL/ min，在254nm的紫外检测条件下进行检测，记录色谱图。
[0163] 实施例14手性固定相CSP3对缬沙坦光学对映体的分离结果见图2。由图2的色谱图 可知，在实施例14的条件下，随着上样量增加至2. OOmg，离子液手性固定相CSP3CSP3仍可将 S-缬沙坦与R-缬沙坦实现分离。
[0164] 如果增加选择器的键合量，还能进一步增加缬沙坦对映体的上样量。
[0165] 实施例15
[0166] 用实施例3合成的离子液手性固定相CSP3分离缬沙坦光学对映体(R-缬沙坦和S-缬沙坦）
[0167] 1、仪器与条件（同实施例8)。
[0168] 2、分离步骤
[0169] (1)(同实施例 8)。
[0170] (2)(同实施例 14)。
[0171] (3)(同实施例 14)。
[0172] (4)将步骤(2)得到的缬沙坦对映体待分离溶液250yL在柱温为25°C的条件下对步 骤(3)采用的离子液手性固定相CSP3进行色谱柱分离，流速为0.8mL/min，在254nm的紫外检 测条件下进行检测，记录色谱图。
[0173] 按上述内容进行多次连续单针进样高效液相色谱分离，在34~52min内分两段，即 34~37min为第一段，37~52min为第二段;分别收集馏分R-缬沙坦和S-缬沙坦。
[0174] (5)将34~37min和37~52min时段内收集的馏分R-缬沙坦和S-缬沙坦分别在同样 色谱条件下进行单一对映体光学纯度检测，得到的色谱图见图3。
[0175] 实施例15的结果表明：
[0176] 模拟制备得到的S-缬沙坦的回收率达97 %以上，其光学纯度在CF37-52范围内达 到99.4% (见图3)。因此可以确定:所述离子液手性固定相CSP3在缬沙坦色谱制备S-对映体 中具有优秀的应用潜能。
【主权项】
1. 一种离子液手性固定相，其特征在于，由L-脯氨酸衍生物模块、N-乙烯基咪唑形成的 阴离子交换器模块和疏丙基硅胶模块构成，其分子结构式为：式中： 办为氢、脂肪烷烃基、环烷烃基、含有取代基或不含取代基的芳基、芳烷基、萘基、蒽基； Y为任一种阴离子。2. 根据权利要求1所述的离子液手性固定相，其特征在于，所述分子结构式（I)的手性 固定相选自以下分子结构式中的一种：3. 用权利要求1所述的离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，其特征在于， 包括以下步骤： (1) 往极性有机溶剂中添加添加剂，用0.45μπι微孔滤膜过滤，超声脱气，得到流动相； (2) 将缬沙坦对映体用步骤（1)获得的流动相溶解，用0.22μπι微孔滤膜过滤，得到缬沙 坦浓度为1. Omg/mL的对映体待分离溶液； (3) 采用所述式I的离子液手性固定相，其分子结构式为：式中： 办为氢、脂肪烷烃基、环烷烃基、含有取代基或不含取代基的芳基、芳烷基、萘基、蒽基； Y为任一种阴离子； (4) 将步骤(2)得到的缬沙坦对映体待分离溶液2yL在柱温为20 °C~50°C的条件下对步 骤(3)采用的离子液手性固定相进行色谱柱分离，流速为0.5~1.5mL/min，在254nm的紫外 检测条件下进行检测，记录色谱图。4. 根据权利要求3所述的用离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，其特征 在于，步骤（1)所述的极性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的一种 或多种。5. 根据权利要求3所述的用离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，其特征 在于，步骤（1)所述的添加剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、二乙胺、三乙胺、甲酸铵、乙酸铵、六氟 磷酸铵的一种或多种。6. 根据权利要求3所述的用离子液手性固定相分离缬沙坦光学对映体的方法，其特征 在于，步骤(3)所述的离子液手性固定相选自以下分子结构式中的一种：
【文档编号】B01J20/29GK105854851SQ201610231276
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月14日
【发明人】柯燕雄, 赵见超, 吴海波, 王东强, 陈龙, 吴海霞, 杜亚军, 韦志深, 程玲平
【申请人】华东理工大学