专利名称：液体食品中大肠菌群快检纸片的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种食品中大肠菌群快检纸片，是一种专门用于液体食品中快速检测大肠菌群的鉴定试剂。其主要成分是蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂、胆盐、40g/L溴甲酚紫溶液、20g/LTTC溶液、蒸馏水，按比例混合后经灭菌浸渍于层析滤纸上，在无菌条件下恒温烘干，每份包括9张吸附1mL原液样品或稀释样品的纸片(5×5cm2)。分别装于3联的聚丙烯塑膜袋内，再密封于铝箔袋内，10℃以下保存备用。液体食品中大肠菌群快检纸片可用于啤酒、果酒、黄酒等低度酒类及果汁、汽水、冰块(融化)等液态食品中大肠菌群或粪大肠菌群的检测。
背景技术：
大肠菌群是人畜粪便中的主要细菌，因而被用来作为反映食饮品中是否被粪便污染或污染程度的指示菌。大肠菌群数的高低，表明了食品被粪便污染的程度，故以此作为粪便污染指标来评价食品卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。大肠菌群作为评价食品卫生质量的主要指标之一，我国已将其纳入“国家标准”。检测大肠菌群传统的方法是试管发酵法，需要配制新鲜培养基，操作方法及步骤繁琐，成本价格高，检测时间长，达不到快速一步法，大肠菌群的检测结果无法定量分析。因此，业内一直希望能有一种经济、简便、易行、快速、准确的方法和产品。
本发明的目的在于提供一种能克服已有方法和产品不足的专用于液态食品快速检测大肠菌群的鉴定试剂。具有可适合于各种液态食品的大肠菌群的培养检测，操作方法简便、易行、快速(一步法)，特异性强，敏感性高，结果准确，成本低廉，便于基层单位特别是边沿地区及条件差的实验室使用。
发明内容
本发明的要点在于选择反应结果最佳的组分配方和适当的载体纸片，并进行一系列合理的溶解、校正pH、灭菌、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装于恰当的容器等工艺流程，而制成一种专业的大肠菌群快检纸片。
本发明选择的配方如下(组分及其每升含量)蛋白胨20～30g；氯化钠5g；磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)8～12g；乳糖15～20g；琼脂1g；胆盐1g；40g/L溴甲酚紫酒精溶液4～5mL；20g/L红四氮唑(TTC)溶液5～7mL；蒸馏水1000mL。
蛋白胨作为细菌的氮源，为培养大肠菌群提供其生长所需要的营养和能量，同时作为作用底物被分解脱氢；氯化钠为培养大肠菌群提供其生长所需要的渗透压；磷酸氢二钾为具有一定缓冲作用的碱式盐，用于调节培养基的pH值，并保持其相对的稳定；乳糖作为细菌的碳源，为培养大肠菌群提供其生长所需要的新陈代谢的能源，同时作为大肠菌群细菌的作用底物可被分解而产酸产气；琼脂作为培养基的赋形剂，溶解冷却后可将培养基中的有效成分固定于载体纸片上；胆盐是一种抑菌剂，可抑制革兰氏阳性菌等非大肠菌群细菌的生长，以减少生物干扰因素；溴甲酚紫溶液为酸碱指示剂，大肠菌群细菌分解乳糖产酸可使之变黄，TTC溶液为氧化还原指示剂，细菌作用底物所产氢与之发生反应形成不可逆的红色化合物。利用大肠菌群细菌能分解乳糖产酸使纸片变黄、分解底物所产氢与TTC结合在纸片上形成红色斑点或红晕状来鉴别大肠菌群是否生存，从而推导食品卫生质量。
本发明产品的制备方法1)载体纸片将新华层析滤纸，切成5cm×5cm规格，经干烤或高压灭菌(高压后于45℃温箱烘干)后备用；2)内包装袋将耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，按实验要求压合成12.5×19cm规格的3联袋，100℃15min蒸汽灭菌后于45℃烘干备用。
3)制备培养基将蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂、胆盐、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0～7.4，再按量加入40g/L溴甲酚紫溶液，混匀，115℃15min高压灭菌，冷至60℃左右按量加入过滤除菌的20g/L TTC溶液，混匀。
4)浸渍纸片将空白纸片排放于灭菌的深搪瓷盘内，加入40℃左右的培养基使之淹没纸片，浸泡数分钟，使培养基充分吸附于纸片，挤去多余的培养基，摆放于无菌不锈钢丝网上，45℃恒温室烘干。
5)包装将浸渍烘干的纸片，无菌操作装入无菌的3联袋内，每袋1张，再装入铝铂袋，热合封口后10℃以下保存备用。
本发明具有以下优点1)大肠菌群快检纸片适合于啤酒、果酒、黄酒等低度酒类及果汁、汽水、冰块(融化)等液态食品中大肠菌群的培养检测。2)成本低廉。3)操作方法简便易行，检测步骤简捷快速，检测时间只需18～20h，比常规发酵法缩短了4天，使繁琐的发酵培养和证实试验技术简化到一步法即可完成，一般人员都能掌握操作。4)产品的敏感性高、特异性强、结果准确，与国标方法符合率高。5)纸片有一定的规格，大肠菌群可均匀分布于纸片，在表面形成鲜明的菌落特征，使大肠菌群的检测达到快速准确定量分析。6)大肠菌群快检纸片含有抑菌剂，在检测中可减少生物因素的干扰影响。7)产品附有详细使用说明书和“大肠菌群最可能数(MPN)检索表”，按此要求进行，即可完成全部操作过程，直接报告检测结果。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，按照下表所列数据(每升含量)及其所述步骤进行配置配方一
配方二
配方三
各配方均按上述本发明产品制备方法进行。使用时按下列步骤操作1.将产品外包装剪开，在3袋纸片接种原液样品每袋1ml，3袋纸片接种1∶10稀释样品每袋1ml，3袋纸片接种1∶100稀释样品每袋1ml；封闭袋口保湿，于37℃培养18～20h观察结果(粪大肠菌群须44.5℃培养)。
2.结果判定纸片保持青紫色为阴性；出现红(或橙)色斑点且周围变黄色为阳性。根据各不同接种量的阳性袋数，查相应MPN检索表，报告检测结果。
权利要求
1.一种液体食品中大肠菌群快检纸片，是以乳糖蛋白胨培养基为基础液，胆盐为抑菌剂，溴甲酚紫、TTC为指示剂，层析滤纸为载体，经一系列溶解、校正pH、高温灭菌、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺流程而制成的一种专业的大肠菌群快检纸片。其特征在于具有如下配方(组分及其每升含量)蛋白胨20～30g；氯化钠5g；磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)8～12g；乳糖15～20g；琼脂1g；胆盐1g；40g/L溴甲酚紫酒精溶液4～5mL；20g/L红四氮唑(TTC)溶液5～7mL；蒸馏水1000mL。
2.根据权利要求1所述液体食品中大肠菌群快检纸片的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1)载体纸片将新华层析滤纸，切成5cm×5cm规格，经干烤或高压灭菌(高压后于45℃温箱烘干)后备用；2)内包装袋将耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，按实验要求压合成6.5cm×9cm规格的3联袋，100℃15min蒸汽灭菌后于45℃烘干备用。3)制备培养基将蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂、胆盐、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0～7.4，再按量加入40g/L溴甲酚紫溶液，混匀，115℃15min高压灭菌，冷至60℃左右按量加入过滤除菌的20g/L TTC溶液，混匀。4)浸渍纸片将空白纸片排放于灭菌的深搪瓷盘内，加入40℃左右的培养基使之淹没纸片，浸泡数分钟，使培养基充分吸附于纸片，挤去多余的培养基，摆放于无菌不锈钢丝网上，45℃恒温室烘干。5)包装将浸渍烘干的纸片，无菌操作装入无菌的3联袋内，每袋1张，再装入铝铂袋，封口后10℃以下保存备用。
3.液体食品中大肠菌群快检纸片使用说明格式及其内容。
全文摘要
本发明名称为液体食品中大肠菌群快检纸片，是一种专门用于全液态饮食品中快速检测大肠菌群的卫生检验产品。通过对主要成分及其用量的合理配伍、科学的工艺制备方法和适宜的包装，使产品成本低廉，操作方法简便易行，检测步骤简捷快速，使繁琐的试管法发酵培养和证实试验技术简化到一步法即可完成，而且敏感性好、特异性强、结果准确，与国标方法符合率高。加入抑菌剂，可减少生物因素的干扰；恰当的纸片规格，可使大肠菌群的检测达到快速准确定量分析。适用于啤酒、果酒、黄酒等低度酒类及果汁、汽水、冰块(融化)等液态食饮品中大肠菌群的培养检测。
文档编号G01N33/02GK1995374SQ20061006966
公开日2007年7月11日 申请日期2006年8月7日 优先权日2006年8月7日
发明者阚方琦, 马乐好, 王方木 申请人:山东省疾病预防控制中心