专利名称：一种快速检测食品中4-甲基咪唑的方法
技术领域：
本发明属于食品添加剂的检测范围，特别是涉及可以作为食品生产厂检测焦糖色素及含有焦糖色素的食品的一种快速检测食品中4-甲基咪唑的方法。
背景技术：
焦糖色素是一种世界范围内广泛使用的食品色素，全世界每年消耗量约20万吨，其中90％以上用在食品和饮料中。美国约95％的焦糖色素用于饮料；亚洲的焦糖色素主要用于酱油及其它调味品中。例如酱油是我国人民生活中不可缺少的传统调味品，随着人民生活水平的提高，除要求酱油具有一定的营养成分和感观质量外，对酱油的安全卫生方面提出了更高的要求。在酱油的感观指标中色泽是重要的指标之一，酱油的色泽主要来自于发酵过程中产生的黑色素，还有一部分来自于添加的焦糖色素，一些生产厂在酿造工艺达不到色度要求时，往往添加过量的焦糖色素。目前市场上还出现了一些不法厂家用“毛发水”和焦糖色素配制的“酱油”。
用于酱油、醋、饮料的焦糖色素主要以氨法生产，在生产过程中会产生一定量的有害物质4-甲基咪唑，经动物毒理学实验证明，4-甲基咪唑对小鼠的LD50值为370mg/kg体重，可致惊厥甚至诱发癫痫症，国家标准GB8817-2001规定氨(铵)法生产的焦糖色素中4-甲基咪唑的含量不能超过0.02％。无论是生产工艺所需的合法添加还是人工配制产品中过量添加的焦糖色素，其中所含的4-甲基咪唑都可能会因长期摄入而造成危害，因而快速、准确测定食品中4-甲基咪唑的含量十分必要，同时可作为质检部门判定酱油安全的指标之一。
目前焦糖色素中4-甲基咪唑的测定方法有硅胶薄层层析法，纸层析法，气相色谱法，离子色谱法，高效液相色谱法，毛细管等速电泳法等。焦糖色素的定性和定量分析方法虽然在准确度、精密度等方面已经随着分析仪器的进步达到了一定的水平，但仪器分析方法需要专门的分析仪器和昂贵的测试费用。硅胶薄层层析及纸层析测定焦糖色素中所含4-甲基咪唑的方法存在的问题是检测限高，灵敏度低，难以定量，不适于对添加焦糖色素的食品中含有的微量4-甲基咪唑进行检测。
目前，食品中添加焦糖色素带入的4-甲基咪唑则因食品中组分多，分离纯化困难而缺少专门的检测方法。特别是针对酱油、醋等生活常用食品，检测其中的4-甲基咪唑含量是判别其安全性的方法之一。因此研究快速、简便、价廉的分析方法十分必要。本研究提供了在食品质量监测方面识别酿造品和人工配制食品的技术，为加强食品市场监管提供快速分析方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速检测食品中4-甲基咪唑的方法。其特征在于该方法的步骤是是将含有焦糖色素的样品经XTR＞500mg的固相萃取柱分离提取得到分析样品，样品过柱后，用有机溶剂洗脱4-甲基咪唑混合物，被测物溶液浓缩后用微量点样器直接在层析材料聚酰胺薄膜上点样3～6μl，垂直放入密闭的，装有展开剂的展开缸中上行展开，在展开剂前沿距薄膜顶端0.5～1cm时停止层析，挥干溶剂，由碘蒸气熏蒸显色60分钟，碘蒸汽显色后肉眼直接观察，如果在比移值0.5～0.7之间同时观察到与标样比移值相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4-甲基咪唑。
所述有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。
所述展开剂为按体积比配比的环己烷∶丙酮∶乙醇＝(4～5.5)∶(0.8～1.2)∶(0.5～0.9)的混合物本发明的有益效果是首次提出使用聚酰胺薄膜作为4-甲基咪唑的层析测定材料，此材料方便易得，展开迅速，展开后的薄层板可以长期保存以备复查，且可以应用薄层扫描仪进行定量测定；利用适当配比的展开剂，可以完全分离目标化合物与溶于乙酸乙酯或二氯甲烷的其它组分。因此本方法可以对4-甲基咪唑实现快速定性、定量检测，用于4-甲基咪唑检测的全过程约为1～2小时即可以得到结果，而仪器分析需时较长；试验证明酱油、醋在酿制过程中不产生4-甲基咪唑，因此可以通过聚酰胺薄层层析对于4-甲基咪唑的定量检测判定该产品是天然酿造还是由人工兑制。检测价格低廉本发明定性检测部分无需大型设备费投入，易于在基层推广使用，特别是作为定性测定酱油等液态食品是否存在大量的4-甲基咪唑时操作简单，消耗品价格较为低廉；灵敏度高本方法可以对含量大于10μg/L的4-甲基咪唑(酱油中4-甲基咪唑含量约为20μg/L以上)进行检测。
具体实施例方式
本发明提供一种快速检测食品中4-甲基咪唑的方法。该方法是将含有焦糖色素的样品，微孔滤膜过滤后加入经过预处理活化XTR＞500mg的固相萃取柱中，样品过柱后，用有机溶剂乙酸乙酯或二氯甲烷洗脱4-甲基咪唑混合物，被测物溶液浓缩后用微量点样器直接在2×8cm的层析材料聚酰胺薄膜上点样3～6μl，垂直放入密闭的，装有按体积配比的展开剂环己烷∶丙酮∶乙醇＝(4～5.5)∶0.8～1.2∶(0.5～0.9)的混合物于展开缸中上行展开，在展开剂前沿距薄膜顶端0.5～1cm时停止层析，挥干溶剂，展开距离约6.5～7cm，可以实现目标化合物与杂质完全分离，由碘蒸气熏蒸显色60分钟，碘蒸汽显色后肉眼直接观察，如果在比移值0.5～0.7之间同时观察到比移值与标样相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4-甲基咪唑，即全过程约为1～2小时可以得到结果。特别适合对酱油、醋、可乐等含有焦糖色素的样品进行检测。仪器分析需时较长。也可用标样系列浓度对照法实现半定量检测，还可用薄层扫描法实现定量测定。
下面再举实施例对本发明予以进一步说明。
实施例含有焦糖色素的酱油1～5mL，微孔滤膜过滤后加入经过预处理活化的XTR1000mg固相萃取柱，用有机溶剂乙酸乙酯或二氯甲烷洗脱4-甲基咪唑混合物，所得被测物溶液经浓缩后直接点样。
用微量点样器在2×8cm的聚酰胺薄板上点样3～6μL，垂直放入密闭的，装有展开剂(环己烷∶丙酮∶乙醇＝5∶1∶0.7)的展开缸中上行展开，展开距离为7～7.5cm，与定量点于同一薄层板的4-甲基咪唑标准品比较，可以判定该酱油产品中目标化合物是否存在，且目标化合物与杂质在此色谱条件下完全分离。取出薄板，挥干溶剂，碘蒸汽显色，与标样对照进行定性检测，用肉眼直接观察，在比移值0.6～0.7之间如果同时观察到比移值与标样相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4-甲基咪唑，是加入焦糖色素的由人工配制的酱油，相反如果观察不到与标样有相同的棕色斑点，则是天然酿造的酱油。也可用标样系列浓度对照法实现半定量检测，还可用薄层扫描法实现定量测定。
最后所应说明的是醋与可乐类饮料的测定原理与方法和酱油完全相同，本专利不一一例举。
权利要求
1.一种快速检测食品中4-甲基咪唑的方法，其特征在于该方法的步骤是是将含有焦糖色素的样品经XTR＞500mg的固相萃取柱分离提取得到分析样品，样品过柱后，用有机溶剂洗脱4-甲基咪唑混合物，被测物溶液浓缩后，用微量点样器直接在层析材料聚酰胺薄膜上点样3～6μl，垂直放入密闭的，装有展开剂的展开缸中上行展开，在展开剂前沿距薄膜顶端0.5～1cm时停止层析，挥干溶剂，由碘蒸气熏蒸显色60分钟，碘蒸汽显色后肉眼直接观察，如果在比移值0.5～0.7之间同时观察到与标样比移值相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4-甲基咪唑。
2.根据权利要求1所述快速检测食品中4-甲基咪唑的方法，其特征在于所述有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。
3.根据权利要求1所述快速检测食品中4-甲基咪唑的方法，其特征在于所述展开剂为按体积比配比的环己烷∶丙酮∶乙醇＝(4～5.5)∶(0.8～1.2)∶(0.5～0.9)的混合物。
全文摘要
本发明公开了属于食品添加剂的检测范围的一种快速检测食品中4－甲基咪唑的方法。该方法的原理是将含有焦糖色素的样品经固相萃取柱(XTR＞500mg)固相萃取，样品过柱后，用有机溶剂洗脱，洗脱液浓缩后，用微量点样器直接在层析材料聚酰胺薄膜上点样，在装有相应配比的展开剂中上行展开，碘蒸汽显色后肉眼直接观察，如果在比移值0.5～0.7之间同时观察到比移值与标样相同的棕色斑点，则认为该被测物中含有4－甲基咪唑。可以实现快速定性检测样品是天然酿造还是由人工配制，特别适合对酱油、醋、可乐等含有焦糖色素的样品进行检测。展开后的薄层板可以长期保存以备复查，且可以应用薄层扫描仪进行定量测定。
文档编号G01N30/00GK1560629SQ20041000450
公开日2005年1月5日 申请日期2004年2月19日 优先权日2004年2月19日
发明者陈敏, 郭小莉, 戴蕴青, 何计国, 陈 敏 申请人:中国农业大学